發(fā)布時(shí)間：2020-03-23 05:15

【摘要】：目的 探討SD大鼠原代肝星狀細(xì)胞(Hepatic Stellate Cell, HSC)體外培養(yǎng)中,不同濃度的銀杏葉提取物對其增殖、凋亡及膠原合成的影響 方法 1.采用改良的膠原酶消化法原位分離SD大鼠HSC。 2.0.4%臺盤藍(lán)染色計(jì)算產(chǎn)量及存活率、顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、結(jié)蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定分離的HSC。 3.實(shí)驗(yàn)分組：正常對照組、GBE各濃度處理組(0、1、10、100、500μg/ml),分別用MTT法觀察GBE對HSC的增殖影響、ANNEXIN V FITC/PI雙染、流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測HSC凋亡情況、ELISA方法檢測細(xì)胞的膠原合成。 結(jié)果 1.原代分離的HSC得率為2-5×107/每只大鼠,純度大于95%,活率大于90%。 2.GBE各濃度處理組：1μg/mlGBE抑制率為7.83%,10μg/mlGBE抑制率為21.5%,100μg/mlGBE抑制率為32.4%,500μg/mlGBE抑制率44.8%,隨GBE處理濃度增加,對HSC增殖抑制程度增加,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 3.ANNEXIN V FITC/PI雙染顯示隨著GBE濃度的增加,HSC凋亡率逐漸增加(P0.01) 4.ELISA方法檢測細(xì)胞的膠原合成顯示,隨GBE濃度的增加,Ⅳ型膠原合成的含量逐漸降低,與對照組之間存在明顯差異(P0.05),透明質(zhì)酸(Hyaluronic Acid, HA)含量逐漸降低,與對照組之間存在明顯差異(P0.01),并成劑量依賴性。 結(jié)論 1.采用原位壓力灌流及循環(huán)灌流能成功實(shí)現(xiàn)大鼠肝星狀細(xì)胞的分離及培養(yǎng),原代分離的大鼠HSC經(jīng)培養(yǎng)活化后可以用于肝纖維化的研究。 2.銀杏葉提取物可明顯抑制肝星狀細(xì)胞的增殖和促進(jìn)其凋亡,明顯下調(diào)透明質(zhì)酸、Ⅳ型膠原的含量,從而發(fā)揮抗肝纖維化并逆轉(zhuǎn)纖維化的作用。
【學(xué)位授予單位】：泰山醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2596247