【摘要】：目的：建立血吸蟲病肝纖維化小鼠動物模型,觀察AKF-PD對血吸蟲性肝纖維化的治療效果,探索其有效治療劑量。 方法：雄性昆明小鼠336只,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機(jī)分為①正常組(n=30)：不予以尾蚴感染及吡喹酮?dú)⑾x,自尾蚴感染后第8周開始予以0.5%CMCNa6ml/kg灌胃,每天一次,共16周；②模型組(n=30)：以腹部貼片法感染小鼠,每只小鼠感染日本血吸蟲尾蚴22+2條,不予以殺蟲,自尾蚴感染后第8周開始予以0.5%CMCNa6ml/kg灌胃,每天一次,共16周；③單純吡喹酮?dú)⑾x組(n=30)：以同樣方法感染小鼠,感染6周后開始予以吡喹酮?dú)⑾x,吡喹酮劑量共1000mg/kg,分兩天給藥,殺蟲1周后：予以0.5%CMCNa6ml/kg灌胃,每天一次,共16周；④殺蟲+AKF-PD (62.5mg/Kg、125mg/Kg、250mg/Kg、500mg/Kg)組,每組30只,以同樣方法感染小鼠及殺蟲,殺蟲1周后開始予以相應(yīng)AKF-PD劑量及濃度灌胃,每天一一次,共16周；⑤殺蟲+INF-a組(n=30)：以同樣方法感染小鼠及殺蟲,殺蟲1周后開始予以IFN-a10萬單位／只,肌肉注射,每天一次,共16周。各組小鼠于末次給藥12小時后麻醉下處死,留取血清、肝脾組織分別行：(1)生化檢測：血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine minotransferase, ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate aminotransferase, AST) (2)肝組織病理學(xué)檢查：HE染色檢測肉芽腫結(jié)節(jié)大小、VG(纖維染色)檢測膠原表達(dá)、免疫組化染色檢測Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)。 結(jié)果： 1.血清ALT：模型組比正常組顯著增高(P0.001),單純吡喹酮?dú)⑾x組與模型組比較無顯著性差異(p0.05)；殺蟲+AKF-PD(62.5mg/kg, 125mg/kg,250mg/kg)組顯著低于模型組(P0.05)；殺蟲+AKF-PD250mg/kg組顯著低于單純吡喹酮?dú)⑾x組(P0.05),與殺蟲+IFN-a組比較無顯著差異(p0.05) 2.肝組織病理學(xué)檢查： 少卵肉芽腫結(jié)節(jié)大小：模型組最大,正常者最小,兩者比較差異顯著(P0.001)；單純吡喹酮?dú)⑾x組與模型組比較無顯著差異(P0.05)；殺蟲+AKF-PD各劑量組比模型組顯著縮小(P0.05)；殺蟲+AKF-PD各劑量組比單純吡喹酮?dú)⑾x組顯著縮小(P0.05)；殺蟲+AKF-PD各劑量組與殺蟲+IFN-a組比較,無顯著差異(p0.05) VG纖維表達(dá)量：模型組比正常組顯著增多(P0.001)；單純吡喹酮?dú)⑾x組與模型組比較無顯著差異(P0.05)；殺蟲+AKF-PD各劑量組比模型組顯著減少(P0.01)；殺蟲+AKF-PD各劑量組比單純吡喹酮?dú)⑾x組顯著減少(P0.01)；殺蟲+AKF-PD125mg/kg組比殺蟲+IFN-α組顯著減少(P0.01) 免疫組化Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)量：模型組比正常組顯著增多(P0.001)；單純吡喹酮?dú)⑾x組比模型組顯著減少(P0.001)；殺蟲+AKF-PD各劑量組比模型組顯著減少(P0.001)；殺蟲+AKF-PD (125mg/kg,250mg/kg)組比單純吡喹酮?dú)⑾x組顯著減少(P0.001)；殺蟲+AKF-PD (125mg/kg,250mg/kg)組顯著低于殺蟲+干擾素組(P0.001) 結(jié)論： 1.血吸蟲誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化模型成功。 2.單純吡喹酮?dú)⑾x后血吸蟲肝纖維化仍能進(jìn)展。 3.在殺蟲的基礎(chǔ)上,聯(lián)合AKF-PD250mg/kg治療可降低血吸蟲性肝纖維化血清ALT,減輕小鼠肝臟炎癥反應(yīng),保護(hù)肝細(xì)胞；聯(lián)合AKF-PD治療可縮小肉芽腫,減少膠原纖維表達(dá),降低Ⅰ、Ⅲ型膠原在肝臟的沉積,以AKF-PD 125mg/kg組效果最佳,效果優(yōu)于IFN-a。
【圖文】：

各組ALT、AST結(jié)果

細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，，核大而圓，未見纖維組織增生，無肝細(xì)胞壞死，肝小葉無纖維間隔，匯管區(qū)有一定數(shù)量的結(jié)締組織，內(nèi)含小葉間動脈、小葉間靜脈和小葉間膽管。(附圖2)。小鼠予相應(yīng)藥物治療16周后模型組:肝內(nèi)可見典型的慢性蟲卵肉芽腫形成，周圍可見各組炎性細(xì)胞浸潤，匯管區(qū)因肉芽腫形成、膠原纖維組織增生及炎細(xì)胞浸潤而明顯擴(kuò)大、變形。單純毗喳酮?dú)⑾x組、殺蟲+AKF一PD(62.5mg/kg、SOOmg/kg)組:蟲卵肉芽腫范圍和密度略少一于模型組，蟲卵周圍包膠原纖維及炎癥細(xì)胞浸潤。殺蟲+AKF一 PD(125mg/kg、25Omg/kg)及殺蟲 +IFN一a組:與單純毗喳酮?dú)⑾x組相比，肉芽腫面積縮小，纖維組織明顯減少。正常組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)正常，未見肉芽腫，無肝細(xì)胞壞死及纖維組織的增生。(附圖3)。3.2.3肝組織HE染色少卵結(jié)節(jié)大小結(jié)果(表3一3，圖一2)HE染色肉芽腫少卵結(jié)節(jié)大小結(jié)果:正常組為0.00士0.00，模型組為0.82士0.56，模型組比正常組顯著增大(P<0.001):單純毗哇酮?dú)⑾x組為0.82士0.47
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R575.2;R532.21

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2594699