【摘要】：目的研究長鏈非編碼RNA-MEG3(lncRNA-MEG3,lncR-MEG3)在急性胰腺炎中的臨床意義,及其同系物LncR-RGD1566401對大鼠胰腺外分泌細胞的凋亡作用。方法LncR-RGD1566401是位于大鼠染色體6q32的母系印跡基因,長度為1,915bp,是母系表達基因3(MEG3)的同源類似物。用攜帶有l(wèi)ncR-RGD1566401目的基因的慢病毒(Lenti-LncRNA)和特異性lncR-RGD1566401抑制劑(lncRNA Smart Silencer)轉染AR42J細胞系24h,轉染空病毒(Lenti-NC)和特異性lncR-RGD1566401陰性抑制劑(lncRNA smart silencer negative control)作為對照;以100 nmol/L雨蛙肽(Caerulin)體外誘導正常培養(yǎng)AR42J及轉染后AR42J的凋亡,使用藥物誘導凋亡24h以后,采用流式細胞技術(Flow cytometry,FCM)檢測各組AR42J細胞的凋亡率,使用實時熒光定量RT-PCR法檢測各組lncR-RGD1566401的表達量,而后采用蛋白質印跡法(Western blot)檢測各組凋亡蛋白活性Caspase-3和P53表達量的變化。同時收集鄭州大學人民醫(yī)院2016年1月至2017年1月的急性胰腺炎患者63例,其中重癥急性胰腺炎(serve acute pancreatitis,SAP)21例,輕癥急性胰腺炎(mild acute pancreatitis,MAP)42例。采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(qRT-PCR)檢測患者入院后24h血清lncR-MEG3的表達水平,比較各組間lncR-MEG3、C反應蛋白(CRP)、D-二聚體(D-Dimer)濃度差異。使用SPSS22.0軟件進行統(tǒng)計學分析獲得的數據,然后制作受試者工作特征曲線(ROC曲線),進一步評價該血清學指標對SAP的診斷效能。結果雨蛙肽體外誘導AR42J凋亡的凋亡率(19.34±0.54)%較對照組(7.23±0.33)%明顯升高,lncR-RGD1566401表達量較對照組升高(5.43±0.31)倍,活性Caspase-3和P53表達量明顯升高;轉染攜帶有l(wèi)ncR-RGD1566401目的基因的慢病毒組lncR-RGD1566401表達量較空病毒組升高(8.24±0.22)倍(p0.05);AR42J凋亡率(38.20±0.37)%較空病毒組(22.60±0.96)%明顯升高(p0.05);活性Caspase-3和P53表達量明顯升高(p0.05);應用特異性lncR-RGD1566401抑制劑組較陰性對照組lncR-RGD1566401表達量降低(0.54±0.14)倍,(p0.05),AR42J凋亡率(13.60±0.33)%較陰性對照組(19.60±0.46)%顯著降低,(p0.05),P53表達量和凋亡蛋白活性Caspase-3明顯降低(p0.05)。在收集的臨床血清樣本中,患者血清lncR-MEG3的表達水平在SAP組較MAP組顯著降低(p0.05),CRP、D-Dimer濃度顯著升高(p0.05);lncR-MEG3、CRP和D-Dimer聯合檢測應用于診斷急性重癥胰腺炎時的曲線下面積(AUC)高于CRP和D-Dimer聯合的AUC,也高于lncR-MEG3、CRP、D-Dimer單獨使用時的AUC。結論1.lncR-RGD1566401與大鼠AR42J細胞凋亡相關;2.上調lncR-RGD1566401表達水平,AR42J細胞凋亡率增加;下調lncR-RGD1566401表達量,AR42J細胞凋亡率降低;3.MAP組患者血清lncR-MEG3表達量較SAP組lncR-MEG3表達量升高明顯;4.聯合lncR-MEG3、CRP、D-Dimer指標診斷急性重癥胰腺炎的診斷效能顯著高于單獨指標或CRP與D-Dimer聯合指標;5.lncR-MEG3表達水平可以在早期反映AP患者病情嚴重程度,lncR-MEG3可能是潛在的作為區(qū)分MAP和SAP的血清學生物標志物。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R576

【參考文獻】

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本文編號：2593413