【摘要】：目的研究長鏈非編碼RNA-MEG3(lncRNA-MEG3,lncR-MEG3)在急性胰腺炎中的臨床意義,及其同系物L(fēng)ncR-RGD1566401對大鼠胰腺外分泌細(xì)胞的凋亡作用。方法LncR-RGD1566401是位于大鼠染色體6q32的母系印跡基因,長度為1,915bp,是母系表達(dá)基因3(MEG3)的同源類似物。用攜帶有l(wèi)ncR-RGD1566401目的基因的慢病毒(Lenti-LncRNA)和特異性lncR-RGD1566401抑制劑(lncRNA Smart Silencer)轉(zhuǎn)染AR42J細(xì)胞系24h,轉(zhuǎn)染空病毒(Lenti-NC)和特異性lncR-RGD1566401陰性抑制劑(lncRNA smart silencer negative control)作為對照;以100 nmol/L雨蛙肽(Caerulin)體外誘導(dǎo)正常培養(yǎng)AR42J及轉(zhuǎn)染后AR42J的凋亡,使用藥物誘導(dǎo)凋亡24h以后,采用流式細(xì)胞技術(shù)(Flow cytometry,FCM)檢測各組AR42J細(xì)胞的凋亡率,使用實(shí)時熒光定量RT-PCR法檢測各組lncR-RGD1566401的表達(dá)量,而后采用蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測各組凋亡蛋白活性Caspase-3和P53表達(dá)量的變化。同時收集鄭州大學(xué)人民醫(yī)院2016年1月至2017年1月的急性胰腺炎患者63例,其中重癥急性胰腺炎(serve acute pancreatitis,SAP)21例,輕癥急性胰腺炎(mild acute pancreatitis,MAP)42例。采用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測患者入院后24h血清lncR-MEG3的表達(dá)水平,比較各組間lncR-MEG3、C反應(yīng)蛋白(CRP)、D-二聚體(D-Dimer)濃度差異。使用SPSS22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析獲得的數(shù)據(jù),然后制作受試者工作特征曲線(ROC曲線),進(jìn)一步評價該血清學(xué)指標(biāo)對SAP的診斷效能。結(jié)果雨蛙肽體外誘導(dǎo)AR42J凋亡的凋亡率(19.34±0.54)%較對照組(7.23±0.33)%明顯升高,lncR-RGD1566401表達(dá)量較對照組升高(5.43±0.31)倍,活性Caspase-3和P53表達(dá)量明顯升高;轉(zhuǎn)染攜帶有l(wèi)ncR-RGD1566401目的基因的慢病毒組lncR-RGD1566401表達(dá)量較空病毒組升高(8.24±0.22)倍(p0.05);AR42J凋亡率(38.20±0.37)%較空病毒組(22.60±0.96)%明顯升高(p0.05);活性Caspase-3和P53表達(dá)量明顯升高(p0.05);應(yīng)用特異性lncR-RGD1566401抑制劑組較陰性對照組lncR-RGD1566401表達(dá)量降低(0.54±0.14)倍,(p0.05),AR42J凋亡率(13.60±0.33)%較陰性對照組(19.60±0.46)%顯著降低,(p0.05),P53表達(dá)量和凋亡蛋白活性Caspase-3明顯降低(p0.05)。在收集的臨床血清樣本中,患者血清lncR-MEG3的表達(dá)水平在SAP組較MAP組顯著降低(p0.05),CRP、D-Dimer濃度顯著升高(p0.05);lncR-MEG3、CRP和D-Dimer聯(lián)合檢測應(yīng)用于診斷急性重癥胰腺炎時的曲線下面積(AUC)高于CRP和D-Dimer聯(lián)合的AUC,也高于lncR-MEG3、CRP、D-Dimer單獨(dú)使用時的AUC。結(jié)論1.lncR-RGD1566401與大鼠AR42J細(xì)胞凋亡相關(guān);2.上調(diào)lncR-RGD1566401表達(dá)水平,AR42J細(xì)胞凋亡率增加;下調(diào)lncR-RGD1566401表達(dá)量,AR42J細(xì)胞凋亡率降低;3.MAP組患者血清lncR-MEG3表達(dá)量較SAP組lncR-MEG3表達(dá)量升高明顯;4.聯(lián)合lncR-MEG3、CRP、D-Dimer指標(biāo)診斷急性重癥胰腺炎的診斷效能顯著高于單獨(dú)指標(biāo)或CRP與D-Dimer聯(lián)合指標(biāo);5.lncR-MEG3表達(dá)水平可以在早期反映AP患者病情嚴(yán)重程度,lncR-MEG3可能是潛在的作為區(qū)分MAP和SAP的血清學(xué)生物標(biāo)志物。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R576

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 付強(qiáng);秦濤;劉傳江;陳琳;楚皓源;胡明星;王玉柱;張宏偉;;微小RNA-135a通過抑制其靶基因Sp3的表達(dá)促進(jìn)大鼠胰腺腺泡細(xì)胞凋亡[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2016年03期

2 吳敏;李潔;劉曉;李欽芳;郭曉榕;湛先保;;穩(wěn)定表達(dá)EGFP-LC3的AR42J細(xì)胞系的建立[J];中華胰腺病雜志;2015年02期

3 張宏偉;羅乾坤;秦濤;劉傳江;胡明星;王玉柱;;微小RNA在大鼠慢性胰腺炎與正常胰腺組織中的表達(dá)差異[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2014年10期

4 莊彥章;陳殿遠(yuǎn);張偉達(dá);黃銀群;張傳洽;;多項(xiàng)血液指標(biāo)檢測對急性胰腺炎預(yù)后判斷價值[J];中華實(shí)用診斷與治療雜志;2011年03期

5 ;Effect of NF-κB and p38 MAPK in activated monocytes/macrophages on pro-inflammatory cytokines of rats with acute pancreatitis[J];World Journal of Gastroenterology;2003年11期

6 張群華,倪泉興,蔡端,張延齡,張妞,侯蘭娣;急性壞死性胰腺炎多器官損傷的機(jī)制研究(英文)[J];Chinese Medical Journal;2001年07期

7 李能平;;《2012版急性胰腺炎分類:亞特蘭大國際共識的分類和定義的修訂》解讀[J];中華胰腺病雜志;2013年03期

，

本文編號：2593413