【摘要】：目的:1.建立有效的真核表達(dá)體系。2.分泌表達(dá)出具有生物活性的HGF蛋白。方法:本研究首次利用p GAPZαA這一真核表達(dá)載體表達(dá)HGF蛋白。我們從gene bank上找到HGF全長片段,然后根據(jù)真核表達(dá)偏愛密碼子將其合成。為得到二級(jí)結(jié)構(gòu)的HGF蛋白,我們在494位氨基酸Arg和495位氨基酸Val間添加了腸激酶序列。將HGF和p GAPZαA質(zhì)粒雙酶切后行連接轉(zhuǎn)化,構(gòu)建穿梭載體p GAPZαA-HGF,測序后將穿梭載體進(jìn)行線性化,然后電轉(zhuǎn)化入畢赤酵母GS115進(jìn)行表達(dá),分別在24h,48h,72h,96h取樣。將得到的蛋白行親和層析純化,然后行Western Blot檢測。最后分離小鼠原代肝細(xì)胞,采用MTT法檢測HGF蛋白的生物學(xué)活性。結(jié)果:成功構(gòu)建了p GAPZαA-HGF穿梭質(zhì)粒,Western Blot檢測顯示80k Da左右有陽性條帶,HGF蛋白成功表達(dá),在48h時(shí)表達(dá)量較好,濃度為16.6mg/L,并且得到的HGF蛋白具有生物學(xué)活性。結(jié)論:建立了有效的真核表達(dá)體系,分泌表達(dá)出具有生物活性的HGF蛋白,為真核表達(dá)HGF蛋白提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù),為后續(xù)大量表達(dá)HGF蛋白提供了可行性。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 岳根全;孟興凱;張俊晶;鐘海燕;;肝細(xì)胞生長因子研究進(jìn)展[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2006年01期

2 汪茂榮,鞠九龍,許家璋,陳崇宏,張運(yùn)芳,明亮,徐叔云;肝細(xì)胞生長因子的部分純化與活性研究[J];中國藥理學(xué)通報(bào);1992年02期

3 沈炳棣,陶志華,朱濤;肝細(xì)胞生長因子和表皮生長因子對體外肝細(xì)胞生長的影響[J];溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1993年02期

4 王立生,吳祖澤,劉福陸;肝細(xì)胞生長因子[J];生理科學(xué)進(jìn)展;1993年04期

5 黃龍;肝細(xì)胞生長因子的研究進(jìn)展[J];中國藥理學(xué)通報(bào);1995年06期

6 羅運(yùn)權(quán),吳孟超嘍;肝細(xì)胞生長因子[J];新消化病學(xué)雜志;1997年03期

7 沈敏;肝細(xì)胞生長因子基因及其表達(dá)[J];肝臟;1999年04期

8 哈小琴,郭樹華,吳祖澤;肝細(xì)胞生長因子是一個(gè)強(qiáng)的腎營養(yǎng)因子[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2000年04期

9 李可洲,黎介壽;肝細(xì)胞生長因子的生物學(xué)作用[J];腸外與腸內(nèi)營養(yǎng);2000年02期

10 冷建杭;肝細(xì)胞生長因子生物學(xué)作用研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊);2000年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 宋衛(wèi)青;呂維紅;陳華波;;內(nèi)毒素誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡及肝細(xì)胞生長因子的抑制作用[A];第四屆全國臨床檢驗(yàn)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

2 宋衛(wèi)青;呂維紅;陳華波;;內(nèi)毒素誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡及肝細(xì)胞生長因子的抑制作用[A];第五次全國中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

3 張盛潔;陳萍;葉景佳;曹江;;肝細(xì)胞生長因子激活因子抑制因子-1的表達(dá)調(diào)控研究[A];第二屆中國醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)暨細(xì)胞生物學(xué)教學(xué)改革會(huì)議論文集[C];2008年

4 況應(yīng)敏;馬超龍;曾仲;劉濤;范振磊;;肝細(xì)胞生長因子在老年親屬供腎移植中的作用[A];2012中國器官移植大會(huì)論文匯編[C];2012年

5 哈小琴;;減毒沙門氏菌介導(dǎo)肝細(xì)胞生長因子基因?qū)π∈竺庖叩挠绊慬A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

6 王雁;尚濤;;肝細(xì)胞生長因子和血管緊張素轉(zhuǎn)化酶與妊娠高血壓綜合征血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的研究[A];第八次全國婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

7 賀芳;鄔力祥;劉發(fā)益;曹莉;楊麗娟;周p，

本文編號(hào)：2581532