發(fā)布時間：2020-02-21 04:55

【摘要】：目的:1.建立有效的真核表達(dá)體系。2.分泌表達(dá)出具有生物活性的HGF蛋白。方法:本研究首次利用p GAPZαA這一真核表達(dá)載體表達(dá)HGF蛋白。我們從gene bank上找到HGF全長片段,然后根據(jù)真核表達(dá)偏愛密碼子將其合成。為得到二級結(jié)構(gòu)的HGF蛋白,我們在494位氨基酸Arg和495位氨基酸Val間添加了腸激酶序列。將HGF和p GAPZαA質(zhì)粒雙酶切后行連接轉(zhuǎn)化,構(gòu)建穿梭載體p GAPZαA-HGF,測序后將穿梭載體進(jìn)行線性化,然后電轉(zhuǎn)化入畢赤酵母GS115進(jìn)行表達(dá),分別在24h,48h,72h,96h取樣。將得到的蛋白行親和層析純化,然后行Western Blot檢測。最后分離小鼠原代肝細(xì)胞,采用MTT法檢測HGF蛋白的生物學(xué)活性。結(jié)果:成功構(gòu)建了p GAPZαA-HGF穿梭質(zhì)粒,Western Blot檢測顯示80k Da左右有陽性條帶,HGF蛋白成功表達(dá),在48h時表達(dá)量較好,濃度為16.6mg/L,并且得到的HGF蛋白具有生物學(xué)活性。結(jié)論:建立了有效的真核表達(dá)體系,分泌表達(dá)出具有生物活性的HGF蛋白,為真核表達(dá)HGF蛋白提供了實驗依據(jù),為后續(xù)大量表達(dá)HGF蛋白提供了可行性。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575

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本文編號：2581532