【摘要】：背景炎癥性腸�。╥nflammatory bowel disease，IBD）包括潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）和克羅恩病（Crohn disease，CD），其病因目前認(rèn)為是由多種因素(主要包括環(huán)境、遺傳、感染和免疫因素)相互作用引起的慢性炎癥反應(yīng)[1]所致。這種慢性炎癥反復(fù)發(fā)作過程導(dǎo)致黏膜不斷被破壞和修復(fù)，這一過程引起腸道間質(zhì)的成纖維細(xì)胞與肌成纖維細(xì)胞活化，進(jìn)而產(chǎn)生大量的細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellular matrix，ECM），同時基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）/基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑（tissue inhibitor of metalloproteinase，TIMPs）的動態(tài)平衡被打破使ECM降解失衡，兩方面因素導(dǎo)致ECM的過度沉積，最終發(fā)生腸壁纖維化[2]。研究認(rèn)為TGF-β信號通路是IBD纖維化過程中重要機(jī)制。 現(xiàn)今IBD的主要治療藥物有氨基水楊酸制劑、糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑，這些藥物主要是在炎癥活動期起到抗炎作用，但長期慢性炎癥導(dǎo)致的腸壁纖維化卻不可避免[3]。因此，對IBD早期防治的研究應(yīng)著力于腸壁纖維化的形成機(jī)制，這將為IBD的治療和預(yù)防提供新的靶點。 沙利度胺是德國制藥商格蘭泰公司20世紀(jì)50年代推出的一種鎮(zhèn)靜劑，為谷氨酸衍生物，具有免疫抑制、免疫調(diào)節(jié)作用。動物實驗中看到沙利度胺在多種器官纖維化如腹膜纖維化[4]、肺纖維化[5-8]、肝纖維化[9-12]及心肌梗死后的結(jié)構(gòu)重塑[13]中起著抑制纖維化的作用，其作用機(jī)制主要是通過抑制轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β，TGF-β1）的分泌，使TGF-β1表達(dá)水平下調(diào)，其分泌水平的下調(diào)引起細(xì)胞外基質(zhì)沉積減少導(dǎo)致膠原合成減少，同時TGF-β1水平下調(diào)破壞了MMPs/TIMPs之間的平衡來抑制ECM沉積從而抑制纖維化形成。因此我們推測，在炎癥性腸病腸壁纖維化中，沙利度胺可能通過抑制TGF-β1的膠原合成及促進(jìn)基質(zhì)沉積的作用來抑制腸壁纖維化的形成，這為IBD的臨床治療提供新的思路。 目的探討沙利度胺能否抑制三硝基苯甲酸（trinitrotoluene，TNBS）結(jié)腸炎大鼠腸壁纖維化的發(fā)生及形成及其主要機(jī)制。 方法將60只SD大鼠隨機(jī)分4組，每組15只：正常組、模型組、治療組及對照組。正常組給予生理鹽水灌腸后給予正常飲食飲水，不做特殊處理；模型組給予TNBS/乙醇混合液（混合液按100mg/kg計算的TNBS加上等體積的無水乙醇）灌腸[14]后給予正常飲食飲水，不做特殊處理；治療組給予TNBS灌腸后，將沙利度胺藥片碾碎溶于橄欖油（40mg/ml），每日早8點給予大鼠沙利度胺200mg/kg/d灌胃[15]；對照組給予TNBS灌腸后第2天開始每日給予同治療組相同劑量的橄欖油灌胃。每日觀察并記錄所有大鼠的精神、活動及毛發(fā)狀態(tài)，大便性狀及便血情況，體重下降情況，并行疾病活動指數(shù)評分（Disease activity index，DAI），28天后處死所有大鼠取各組結(jié)腸組織，行大體形態(tài)損傷指數(shù)（colon macroscopic damageindex， CMDI）評分，病理切片行HE染色及Masson染色觀察并評估結(jié)腸慢性炎癥及纖維化程度，取各組結(jié)腸組織勻漿行Elisa及western blot檢測各組結(jié)腸組織TGF-β1、I型及III型膠原、MMP-2、MMP-9及TIMP-1蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果經(jīng)過造模及藥物干預(yù)，與正常組大鼠相比，模型組大鼠精神萎靡，，出現(xiàn)稀糊狀及黏液膿血便，體重明顯下降，DAI評分明顯升高，而治療組上述情況較模型組好轉(zhuǎn)，DAI評分較模型組下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，對照組情況與模型組無顯著差異。與正常組相比，模型組CMDI評分明顯升高，病理切片HE染色可見多量慢性炎癥細(xì)胞浸潤，Masson染色可見大量膠原沉積，而治療組上述指標(biāo)改善，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)腸組織均漿行Elisa檢測及western檢測可見，與正常組相比，模型組TIMP-1、TGF-β1、I型及III型膠原表達(dá)水平顯著升高（P0.05），MMP-2及MMP-9蛋白的表達(dá)水平下降（P0.05），而治療組較模型組TIMP-1、TGF-β1、I型及III型膠原表達(dá)水平下降（P0.05），MMP-2及MMP-9蛋白的表達(dá)水平升高（P0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義，而對照組與模型組無明顯差異。 結(jié)論沙利度胺能夠抑制大鼠TNBS結(jié)腸炎腸壁纖維化，其機(jī)制可能是通過抑制腸壁TGF-β1的表達(dá),減少間質(zhì)膠原的合成并調(diào)節(jié)MMPs/TIMPs平衡而實現(xiàn)的。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R574

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2471589