【摘要】：目的間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)有重要的免疫調(diào)節(jié)和組織再生作用,但其治療肝損傷的機(jī)制尚不完全清楚,既可能通過(guò)旁分泌因子調(diào)節(jié)炎癥,也可直接轉(zhuǎn)分化為肝細(xì)胞。為明確這兩種機(jī)制,擬構(gòu)建巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的膜定位綠色熒光蛋白(GFP)與白蛋白啟動(dòng)子調(diào)控的PE40毒素的共表達(dá)質(zhì)粒,以期殺傷轉(zhuǎn)染MSC中向肝細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的細(xì)胞。方法用PCR獲得GFP以及DLL1(Delta-like 1)跨膜區(qū)基因片段,融合成膜定位GFP基因并插入pFlag-CMV-1載體。將白蛋白基因啟動(dòng)子和PE40基因片段插入已構(gòu)建好的膜定位GFP序列下游,構(gòu)建真核表達(dá)載體,熒光顯微鏡檢測(cè)GFP的表達(dá)。應(yīng)用可表達(dá)白蛋白的人正常肝臟細(xì)胞檢測(cè)該載體對(duì)肝細(xì)胞的殺傷。結(jié)果成功構(gòu)建肝細(xì)胞特異性殺傷載體,該載體轉(zhuǎn)染后對(duì)正常肝臟細(xì)胞具有殺傷作用,提示該載體可用于探索MSC治療肝損傷的機(jī)制。結(jié)論成功構(gòu)建能特異性殺傷肝細(xì)胞的載體。
[Abstract]:Aim Mesenchymal stem cells (MSC) play an important role in immunomodulation and tissue regeneration, but the mechanism of its treatment for liver injury is still unclear. It is possible to regulate inflammation through paracrine factors and to differentiate directly into hepatocytes. In order to clarify these two mechanisms, the co-expression plasmid of cytomegalovirus (CMV) promoter-driven green fluorescent protein (GFP) and albumin promoter-regulated PE40 toxin was constructed in order to kill and transfect the cells transformed into hepatocytes in MSC. Methods the transmembrane gene fragments of GFP and DLL1 (Delta-like-1) were obtained by PCR, and the GFP gene was fused into a membrane to locate the GFP gene and inserted into the pFlag-CMV-1 vector. The albumin gene promoter and PE40 gene fragment were inserted into the downstream of the constructed membrane-located GFP sequence to construct the eukaryotic expression vector. The expression of GFP was detected by fluorescence microscope. Human normal liver cells expressing albumin were used to detect the killing effect of the vector on hepatocytes. Results Hepatocyte-specific killing vector was successfully constructed. After transfection, the vector could kill normal liver cells, suggesting that the vector could be used to explore the mechanism of MSC in the treatment of liver injury. Conclusion the vector which can kill hepatocytes specifically was constructed successfully.
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部醫(yī)學(xué)遺傳與發(fā)育生物學(xué)教研室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金重大研究計(jì)劃培育項(xiàng)目(91029731);國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(81030010)
【分類(lèi)號(hào)】：R575

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2468217