【摘要】：目的間充質干細胞(MSC)有重要的免疫調節(jié)和組織再生作用,但其治療肝損傷的機制尚不完全清楚,既可能通過旁分泌因子調節(jié)炎癥,也可直接轉分化為肝細胞。為明確這兩種機制,擬構建巨細胞病毒(CMV)啟動子驅動的膜定位綠色熒光蛋白(GFP)與白蛋白啟動子調控的PE40毒素的共表達質粒,以期殺傷轉染MSC中向肝細胞轉分化的細胞。方法用PCR獲得GFP以及DLL1(Delta-like 1)跨膜區(qū)基因片段,融合成膜定位GFP基因并插入pFlag-CMV-1載體。將白蛋白基因啟動子和PE40基因片段插入已構建好的膜定位GFP序列下游,構建真核表達載體,熒光顯微鏡檢測GFP的表達。應用可表達白蛋白的人正常肝臟細胞檢測該載體對肝細胞的殺傷。結果成功構建肝細胞特異性殺傷載體,該載體轉染后對正常肝臟細胞具有殺傷作用,提示該載體可用于探索MSC治療肝損傷的機制。結論成功構建能特異性殺傷肝細胞的載體。
[Abstract]:Aim Mesenchymal stem cells (MSC) play an important role in immunomodulation and tissue regeneration, but the mechanism of its treatment for liver injury is still unclear. It is possible to regulate inflammation through paracrine factors and to differentiate directly into hepatocytes. In order to clarify these two mechanisms, the co-expression plasmid of cytomegalovirus (CMV) promoter-driven green fluorescent protein (GFP) and albumin promoter-regulated PE40 toxin was constructed in order to kill and transfect the cells transformed into hepatocytes in MSC. Methods the transmembrane gene fragments of GFP and DLL1 (Delta-like-1) were obtained by PCR, and the GFP gene was fused into a membrane to locate the GFP gene and inserted into the pFlag-CMV-1 vector. The albumin gene promoter and PE40 gene fragment were inserted into the downstream of the constructed membrane-located GFP sequence to construct the eukaryotic expression vector. The expression of GFP was detected by fluorescence microscope. Human normal liver cells expressing albumin were used to detect the killing effect of the vector on hepatocytes. Results Hepatocyte-specific killing vector was successfully constructed. After transfection, the vector could kill normal liver cells, suggesting that the vector could be used to explore the mechanism of MSC in the treatment of liver injury. Conclusion the vector which can kill hepatocytes specifically was constructed successfully.
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學基礎部醫(yī)學遺傳與發(fā)育生物學教研室;
【基金】：國家自然科學基金重大研究計劃培育項目(91029731);國家自然科學基金重點項目(81030010)
【分類號】：R575

【參考文獻】

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1 Michalis Mastri;Huey Lin;Techung Lee;;WJSC 6~(th) Anniversary Special Issues(2):Mesenchymal stem cells Enhancing the efficacy of mesenchymal stem cell therapy[J];World Journal of Stem Cells;2014年02期

2 Hu-Cheng Ma;Xiao-Lei Shi;Hao-Zhen Ren;Xian-Wen Yuan;Yi-Tao Ding;;Targeted migration of mesenchymal stem cells modified with CXCR4 to acute failing liver improves liver regeneration[J];World Journal of Gastroenterology;2014年40期

【共引文獻】

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1 畢涌;洪娟;李佳;張旭;;調節(jié)性T細胞緩解帕金森病中多巴胺神經元炎性損傷[J];國際神經病學神經外科學雜志;2013年04期

2 李陳;肖玉周;;不同來源的間充質干細胞生物學特性差異研究進展[J];創(chuàng)傷外科雜志;2014年01期

3 王嗣予;金磊;李元元;黃輝煌;徐若男;福軍亮;張政;王福生;;人臍帶間充質干細胞治療慢性HIV感染者的回顧性研究[J];傳染病信息;2014年01期

4 鐘藝;舒暢;符州;;間充質干細胞通過旁分泌抑制肺纖維化的分子機制[J];重慶醫(yī)學;2014年25期

5 王煥麗;熊兵;陳華德;賴文;鄭少逸;卞徽寧;劉族安;黃志鋒;孫傳偉;馬亮華;李漢華;魏麗君;陳瀚熙;;骨髓間充質干細胞對巨噬細胞分泌炎癥因子的影響[J];南方醫(yī)科大學學報;2014年09期

6 涂雪松;;神經干細胞移植治療神經疾病機制的基礎研究[J];神經損傷與功能重建;2014年06期

7 Jin-Feng Yang;Hong-Cui Cao;Qiao-Ling Pan;Jiong Yu;Jun Li;Lan-Juan Li;;Mesenchymal stem cells from the human umbilical cord ameliorate fulminant hepatic failure and increase survival in mice[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2015年02期

8 王曉輝;惠玲;楊霄鵬;王鯤;楊雯;哈小琴;;人臍帶間充質干細胞體外培養(yǎng)、鑒定及其誘導分化的研究[J];解放軍醫(yī)藥雜志;2013年10期

9 陳黎明;徐若男;呂颯;于雙杰;張政;王福生;;臍帶間充質干細胞對肝星狀細胞活化、凋亡的調控作用研究[J];解放軍醫(yī)學雜志;2014年01期

10 秦力維;張寧坤;郭建巍;彭秀軍;王桂琴;曹利群;田春雨;崔蓓;王靜;高原;;人臍帶間充質干細胞的高效分離及對小鼠免疫功能的影響[J];轉化醫(yī)學雜志;2014年06期

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1 郝紹瑞;李氏人工肝系統(tǒng)治療乙肝慢加急性肝衰竭的療效和預后評價[D];浙江大學;2013年

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3 許靖;骨髓間充質干細胞對高氧誘導小鼠肺損傷的治療研究[D];南方醫(yī)科大學;2013年

4 王雙雙;骨髓間充質干細胞移植對易損斑塊穩(wěn)定性的影響及機制研究[D];南方醫(yī)科大學;2013年

5 梅亞波;人臍帶間充質干細胞TLR4信號通路及與BV-2細胞共培養(yǎng)研究[D];第二軍醫(yī)大學;2013年

6 侯靜;間充質干細胞在輻射損傷后干性維持的機制研究[D];第二軍醫(yī)大學;2013年

7 張潤;骨髓間充質干細胞移植治療腦損傷抗炎及免疫調節(jié)機制研究[D];南方醫(yī)科大學;2014年

8 袁淑芳;骨髓間充質干細胞治療大鼠急性肝衰竭的作用研究[D];新疆醫(yī)科大學;2013年

9 劉慧瑩;臍帶間充質干細胞及氣體治療急性肺損傷的實驗研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2014年

10 劉玲英;人臍帶間充質干細胞促進嚴重燒傷大鼠創(chuàng)面愈合及其機制的研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2014年

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1 馬欣;模擬肝臟組織微環(huán)境對人臍帶間充質干細胞向肝細胞樣細胞分化的影響[D];河北醫(yī)科大學;2013年

2 王永霞;臍帶間充質干細胞誘導分化成肝樣細胞的研究[D];大連醫(yī)科大學;2012年

3 蘭亞;間充質干細胞通過誘導2型kupffercell激活對CCL4誘導的小鼠肝硬化影響的實驗研究[D];延安大學;2013年

4 羅茜;肝星狀細胞干細胞特性的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學;2013年

5 王曉輝;HGF促進hUCMSCs血管新生的體外研究[D];第四軍醫(yī)大學;2013年

6 鄭林華;IL-17在骨髓干細胞促進肝損傷修復中的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學;2013年

7 何微;Vimentin影響五指山小型豬間充質干細胞遷移的研究[D];中國農業(yè)科學院;2013年

8 尋權;人羊膜上皮細胞移植治療肝硬化大鼠的初步研究[D];中南大學;2013年

9 李陳;人臍血間充質干細胞源性的類許旺細胞與人胎兒坐骨神經許旺細胞差異蛋白組學的研究[D];蚌埠醫(yī)學院;2014年

10 陳明星;臍血來源的間充質干細胞的分化潛能研究[D];寧波大學;2013年

【二級參考文獻】

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1 Li-Hsuen Chen;Chia-Yu Hsu;Ching-Feng Weng;;Involvement of P53 and Bax/Bad triggering apoptosis in thioacetamide-induced hepatic epithelial cells[J];World Journal of Gastroenterology;2006年32期

2 Techung Lee;;Stem cell therapy independent of stemness[J];World Journal of Stem Cells;2012年12期

【相似文獻】

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1 劉敏;王群興;楊東亮;;肝細胞表達的免疫相關分子與肝臟疾病[J];免疫學雜志;2013年01期

2 常彬霞;貌盼勇;游紹莉;李保森;辛紹杰;;轉染重組質粒pBudCE4.1-CYP3A4-GSTA1的肝細胞系的建立及功能評價[J];世界華人消化雜志;2012年13期

3 胡春光,王旭東,程雷,楊明,姜金蘭,馬杰,常淑芳,顏煒群;豬肝細胞的分離與原代培養(yǎng)[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2004年03期

4 戴霞紅;趙樹山;蕭梅芳;劉洪波;章保新;黃澤炳;周蓉蓉;胡關勝;范學工;;LPS誘導肝細胞L02釋放HMGB1蛋白的研究[J];生命科學研究;2011年03期

5 楊倩;鄧志華;賀丹丹;;乙肝病毒X蛋白對不同肝細胞系凋亡的誘導作用[J];中國腫瘤生物治療雜志;2012年04期

6 張錦生;大鼠α-谷氨酰轉肽酶陽性肝細胞在無血清培養(yǎng)液中的生長[J];上海醫(yī)科大學學報;1993年05期

7 張斌;萬謨彬;;用于生物人工肝治療的肝細胞研究進展[J];現代診斷與治療;2001年01期

8 喬雍;常路絲;魏紅蓮;肖凡;郝曉花;張仁雯;成軍;魏紅山;;功能未知基因C16orf68在不同肝細胞系內的表達特征[J];胃腸病學和肝病學雜志;2011年04期

9 王曉茜;唐南洪;李秀金;陳燕凌;;構建特異高表達人谷氨酰胺合成酶基因的肝細胞[J];中華實驗外科雜志;2007年07期

10 劉敏;郝友華;胡斌;宋景嬌;馬德強;徐春利;陸蒙吉;楊東亮;;三種常見肝細胞系免疫相關分子的表達[J];肝臟;2010年04期

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1 胡春光;姜金蘭;宿曉云;王芳;楊春偉;顏煒群;;豬肝細胞的原代分離與培養(yǎng)[A];“加入WTO和科學技術與吉林經濟發(fā)展——機遇·挑戰(zhàn)·責任”吉林省第二屆科學技術學術年會論文集（下）[C];2002年

2 潘小平;李蘭娟;杜維波;郝邵瑞;曹紅翠;陳瑜;盛國平;章益民;朱春俠;李君;盛吉芳;;永生化豬肝細胞的建立及其鑒定[A];中華醫(yī)學會全國第九次感染病學學術會議論文匯編[C];2006年

3 于靜雯;徐艷花;張振;陳容平;楊銳;陳宏;;真核過表達載體共轉染3個胰島發(fā)育關鍵基因在小鼠胎肝細胞內的表達[A];中華醫(yī)學會第十一次全國內分泌學學術會議論文匯編[C];2012年

4 李俊剛;周吉軍;王宇明;;不同N-糖基化HBV前-S／S抗原表達肝細胞系的建立[A];中華醫(yī)學會全國第九次感染病學學術會議論文匯編[C];2006年

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1 吳一福;四軍醫(yī)大首次構建成永生化胚胎肝細胞系[N];中國醫(yī)藥報;2006年

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1 劉敏;乙型肝炎病毒對肝細胞表達免疫相關分子的影響[D];華中科技大學;2011年

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1 楊芳;人外周血干細胞向肝細胞轉化的研究[D];大連醫(yī)科大學;2011年

2 于新蕾;乙型肝炎病毒對肝細胞中β-干擾素表達的影響[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2011年

3 黃珊;血管緊張素Ⅱ/血管緊張素1-7在肝細胞上皮—間質表型轉換中的作用及機制[D];南方醫(yī)科大學;2012年

4 劉春艷;PCBP2在病毒誘導肝細胞產生Ⅰ型干擾素中的作用[D];湖南大學;2013年

5 楊倩;乙肝病毒X蛋白對不同肝細胞系凋亡的誘導作用[D];山西醫(yī)科大學;2012年

6 朱慶玲;離體條件下銅對草魚和黃顙魚肝細胞脂代謝影響的研究[D];華中農業(yè)大學;2014年

7 張文雍;血管緊張素轉換酶2對血管緊張素Ⅱ誘導的肝細胞上皮—間質轉換的調控作用[D];南方醫(yī)科大學;2013年

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