【摘要】：目的通過(guò)建立小鼠酒精性脂肪肝(AFL)的模型,并采用肝臟原位灌流,分離出形態(tài)良好、具有生物學(xué)活性的庫(kù)普弗細(xì)胞(KCs),研究其在AFL中的作用。方法采用Lieber-DeC arli液體飲食加一次急性酒精灌胃,建立小鼠AFL模型。造模周期為16 d,于第16天灌胃9 h后處死小鼠,取小鼠肝臟、血清及KCs。檢測(cè)各組血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶/谷草轉(zhuǎn)氨酶(ALT/AST)、肝勻漿、血清中總膽固醇/三酰甘油(TG/TC)水平變化和肝臟病理切片HE、油紅染色。選取原位灌流的方法分離KCs,采用流式細(xì)胞術(shù)分析KCs表型及組成的改變。熒光實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)組織及提取細(xì)胞中各細(xì)胞因子水平。結(jié)果 ALT/AST、TG/TC等反應(yīng)肝損傷的指標(biāo)模型組顯著高于對(duì)照組,HE及油紅染色結(jié)果與之一致,表明小鼠AFL模型建立成功。肝臟原位灌流每只小鼠細(xì)胞得率約1.5×106~2.0×106個(gè)。以小鼠巨噬細(xì)胞表面標(biāo)記分子F4/80及白細(xì)胞共同抗原CD45雙標(biāo)設(shè)門,流式細(xì)胞術(shù)分析F4/80和CD45雙陽(yáng)性細(xì)胞,在模型中肝臟固有CD68+細(xì)胞顯著降低,并出現(xiàn)大量的浸潤(rùn)單核細(xì)胞。qRTPCR結(jié)果顯示,在肝組織及原代KCs中細(xì)胞因子,腫瘤壞死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、單核細(xì)胞趨化蛋白(MCP-1)水平顯著升高。結(jié)論小鼠AFL模型建立成功,肝臟原位灌流法細(xì)胞得率較高,AFL的發(fā)病可能與KCs構(gòu)成、表型改變,與細(xì)胞因子升高介導(dǎo)外周單核細(xì)胞浸潤(rùn)有關(guān)。
[Abstract]:Objective to establish a mouse model of alcoholic fatty liver (AFL) and to isolate the well-formed and biologically active Kupffer cells (KCs),) in AFL by in situ perfusion of the liver. Methods Lieber-DeC arli liquid diet and acute alcohol were used to establish AFL model in mice. The model period was 16 days. The mice were killed 9 hours after gavage on the 16th day. The liver, serum and KCs. were taken from the mice. Serum alanine aminotransferase / alanine aminotransferase (ALT/AST), liver homogenate, serum total cholesterol / triglyceride (TG/TC) levels and HE, oil red staining in pathological sections of liver were detected. KCs, was isolated by in situ perfusion. The phenotype and composition of KCs were analyzed by flow cytometry. Fluorescence real-time quantitative PCR (qRT-PCR) was used to detect the levels of cytokines in tissues and extracted cells. Results the results of HE and oil red staining showed that the model group with ALT/AST,TG/TC and other indexes of liver injury was significantly higher than that of the control group, which indicated that the AFL model of mice was established successfully. In situ perfusion of liver, the cell yield of each mouse was about 1.5 脳 10 ~ (6) ~ (2) 脳 10 ~ (6) ~ (2) 脳 10 ~ (6). Mouse macrophage surface marker F4 / 80 and leukocyte common antigen (CD45) were double labeled. F480 and CD45 double positive cells were detected by flow cytometry. In the model, the inherent CD68 cells in liver decreased significantly. The results of qRTPCR showed that the levels of cytokines, tumor necrosis factor (TNF- 偽), interleukin-6 (IL-6) and monocyte chemotactic protein (MCP-1) in liver tissue and primary KCs were significantly increased. Conclusion the AFL model of mice was established successfully, and the rate of cells obtained by in situ perfusion of liver was higher. The pathogenesis of AFL may be related to the composition and phenotype of KCs and the increase of cytokines to mediate the infiltration of peripheral monocytes.
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院;安徽醫(yī)科大學(xué)肝病研究所;安徽省創(chuàng)新藥物產(chǎn)業(yè)共性研究院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(編號(hào):81273526) 安徽省教育廳基金項(xiàng)目(編號(hào):KJ2012A156) 安徽省自然科學(xué)基金(編號(hào):1308085MH145) 安徽醫(yī)科大學(xué)博士科研啟動(dòng)基金(編號(hào):XJ201118)
【分類號(hào)】：R575.5

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2421657