【摘要】：目的:研究IGF-1對(duì)油酸誘導(dǎo)的脂肪變肝細(xì)胞p38MAPK表達(dá)及其生化指標(biāo)的影響,旨在探討IGF-1在非酒精性脂肪性肝病中的作用,進(jìn)而為NAFLD的臨床防治提供新思路。方法:人肝癌細(xì)胞株HepG2,用含10%的胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。然后以不同濃度油酸誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞發(fā)生脂肪變性,采用MTT法探索最佳造模濃度。進(jìn)行所有實(shí)驗(yàn)之前,均將HepG2細(xì)胞置于無血清DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)12 h。將HepG2細(xì)胞隨機(jī)分為3組:正常對(duì)照組、油酸誘導(dǎo)組、油酸聯(lián)合IGF-1組。采用油紅O染色觀察各組細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積情況;Western Blot檢測(cè)各組p38MAPK、p-p38MAPK蛋白的表達(dá);采用生化試劑盒檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)TG(甘油三酯)及上清液中ALT、AST的水平。結(jié)果:1、油酸對(duì)HepG2細(xì)胞株具有誘導(dǎo)作用,使其發(fā)生一定程度的脂肪變性,并可順利構(gòu)建肝細(xì)胞脂肪變模型。在油紅O染色之后,通過光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察,結(jié)果顯示肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積并沒有出現(xiàn)于正常對(duì)照組中;油酸誘導(dǎo)組在培養(yǎng)24h后可見細(xì)胞內(nèi)少量脂質(zhì)沉積,脂變率(10.37±1.79)%;隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加,脂肪變程度逐漸加重,48h后脂質(zhì)沉積增多,脂變率(34.26±7.04)%;72h后則出現(xiàn)大量脂質(zhì)沉積,脂變率(75.63±12.03)%。通過對(duì)上述3個(gè)培養(yǎng)時(shí)點(diǎn)的對(duì)比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。油酸聯(lián)合IGF-1組與油酸誘導(dǎo)組相比,培養(yǎng)24h后其脂變率無明顯差異(P0.05),48h、72h后油酸聯(lián)合IGF-1組的脂變率明顯降低,分別為(28.76±7.12)%、(37.67±6.89)%,差異分別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、各組脂肪變肝細(xì)胞內(nèi)TG水平的比較隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加,油酸誘導(dǎo)組、油酸聯(lián)合IGF-1組細(xì)胞內(nèi)TG含量均有所增高,油酸誘導(dǎo)組內(nèi)各時(shí)點(diǎn)進(jìn)行比較具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。油酸聯(lián)合IGF-1組和油酸誘導(dǎo)組各時(shí)點(diǎn)的TG含量明顯多于正常對(duì)照組,此差異比較明顯,具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。油酸聯(lián)合IGF-1組細(xì)胞在經(jīng)過48h、72h培養(yǎng)之后,細(xì)胞內(nèi)的TG含量明顯低于油酸誘導(dǎo)組,此差異比較明顯,具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、各組培養(yǎng)上清液中ALT、AST含量的比較隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加,油酸誘導(dǎo)組、油酸聯(lián)合IGF-1組細(xì)胞上清液中的AST和ALT的含量明顯增加,在油酸誘導(dǎo)組中各時(shí)點(diǎn)之間的差異比較明顯,具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。油酸聯(lián)合IGF-1組細(xì)胞在經(jīng)過48h、72h培養(yǎng)之后,細(xì)胞上清液中ALT、AST含量明顯低于油酸誘導(dǎo)組,此差異比較明顯,具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。4、各組細(xì)胞p-p38MAPK和p38MAPK蛋白表達(dá)水平的比較各組細(xì)胞分別培養(yǎng)24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)之后,p38MAPK蛋白表達(dá)都比較明顯,但是各組之間的差異不明顯,不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。油酸聯(lián)合IGF-1組以及油酸誘導(dǎo)組p-p38MAPK均有表達(dá),正常對(duì)照組無表達(dá)。油酸誘導(dǎo)組72h時(shí)p-p38MAPK蛋白表達(dá)與24h、48h相比明顯增高(P0.01);油酸聯(lián)合IGF-1組內(nèi)各時(shí)點(diǎn)進(jìn)行比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),然而與油酸誘導(dǎo)組培養(yǎng)72h后p-p38MAPK的蛋白表達(dá)(2.93±0.13)相比較,油酸聯(lián)合IGF-1組表達(dá)水平卻顯著降低(1.12±0.07),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:IGF-1可以改善肝細(xì)胞脂肪變的程度,明顯降低肪變肝細(xì)胞p-p38MAPK蛋白的表達(dá)水平,改善脂肪變肝細(xì)胞的生化指標(biāo),提示IGF-1可能通過p38MAPK信號(hào)通路參與肝細(xì)胞脂肪變的調(diào)節(jié),在非酒精性脂肪性肝病的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。
[Abstract]:Objective: To study the effect of IGF-1 on the expression of p38MAPK and its biochemical index in the induced fatty liver cells, and to explore the role of IGF-1 in non-alcoholic fatty liver disease and to provide a new way for the clinical prevention and treatment of NAFLD. Methods: Human liver cancer cell line HepG2 was cultured with DMEM medium containing 10% fetal bovine serum. Then, the fat degeneration of HepG2 cells was induced with oleic acid at different concentrations, and the best model concentration was explored by MTT method. HepG2 cells were cultured in serum-free DMEM medium for 12 h prior to all experiments. HepG2 cells were randomly divided into three groups: normal control group, oleic acid induction group, and oleic acid group IGF-1 group. The expression of p38MAPK and p-p38MAPK in each group was observed by oil-red O-staining. The levels of ALT and AST in the cells of each group were detected by a biochemical kit. Results: 1. The oleic acid has an induction effect on the HepG2 cell line, which makes it a certain degree of fat degeneration, and can successfully construct the hepatocyte fat-variable model. After the oil red O was stained, the results showed that the lipid deposition of the hepatocyte was not present in the normal control group; the oleic acid-induced group showed a small amount of lipid deposition in the cells after the culture of 24h, the lipid rate (10.37% 1.79)%, and with the increase of the culture time, The degree of fat change was gradually increased, the lipid deposition was increased after 48h, and the lipid rate (34. 26% 7. 04)%; after 72h, a large amount of lipid deposition was observed, and the lipid rate (70.63% 12.03)%. The difference of the three culture time points was statistically significant (P0.01). Compared with the group of oleic acid in the combination of oleic acid and IGF-1, there was no significant difference in the lipid rate of the combined group of oleic acid and the group of oleic acid (P0.05), and the lipid rate of the combined group of oleic acid and IGF-1 in the group was significantly lower than that of the group of oleic acid (P 0.05), 48 h, and 72h, respectively (28. 76% 7. 12)%, (37. 67% 6.89)%, and the difference was statistically significant (P0.05). The TG levels in the group of oleic acid and the group of oleic acid and IGF-1 increased with the increase of the culture time, and the TG level in the oleic acid group and the oleic acid group increased with the increase of the culture time, and there was a significant difference in the time points in the oleic acid-induced group (P0.01). The TG content of oleic acid combined with IGF-1 and oleic acid group was significantly higher than that in the normal control group, and the difference was significant (P0.01). The TG content of oleic acid combined with IGF-1 group was significantly lower than that of oleic acid induction group after 48 h and 72h culture, and the difference was significant (P0.05). The contents of AST and ALT in the supernatant of the combination of oleic acid and IGF-1 were significantly increased, and the difference between the time points in the oleic acid group was significant (P0.01). The content of ALT and AST in the supernatant of oleic acid combined with IGF-1 was significantly lower than that of the induction group of oleic acid, and the difference was significant (P0.01). The expression level of p-p38MAPK and p38 MAPK in each group was 24 h, 48 h and 72 h, respectively. The expression of p-p38 MAPK in the combination of oleic acid and IGF-1 and oleic acid group was not expressed in the normal control group. The expression of p-p38MAPK in oleic acid-induced group was significantly higher than that of 24h and 48h (P0.01), and the expression of p-p38MAPK in the group of oleic acid and IGF-1 was not statistically significant (P0.05). However, the expression of p-p38MAPK was compared with the expression of p-p38MAPK (2.93. The expression level of the combined oleic acid and IGF-1 group was significantly lower (1. 12-0. 07), and the difference was statistically significant (P0.01). Conclusion: IGF-1 can improve the level of hepatic steatosis, decrease the expression level of p-p38MAPK in the hepatocyte, and improve the biochemical index of the fat-variable hepatocytes. It is suggested that IGF-1 may be involved in the regulation of the changes of the liver cell fat through the p38 MAPK signal pathway. It plays an important role in the development of nonalcoholic fatty liver disease.
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575.5

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本文編號(hào)：2420298