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  本文關(guān)鍵詞：肝纖維化發(fā)生發(fā)展及逆轉(zhuǎn)過程中kupffer細(xì)胞表型的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《河北醫(yī)科大學(xué)》 2013年

NLRP3炎癥小體在肝纖維化大鼠肝組織中的表達(dá)及其作用機(jī)制

李艾迪  

【摘要】：肝纖維化是對(duì)各種原因?qū)е碌穆愿闻K損傷的一種損傷愈合應(yīng)答反應(yīng)，如果持續(xù)存在將導(dǎo)致肝功能衰竭，肝硬化甚至肝癌。肝星狀細(xì)胞的活化，各種致炎因子的釋放，并最終導(dǎo)致各種細(xì)胞外基質(zhì)包括膠原、蛋白多糖、糖粘連蛋白等過度沉積在肝纖維化發(fā)生過程中起到關(guān)鍵作用。由于肝纖維化是一個(gè)可逆的過程，因此，尋求新的生物標(biāo)記物及有效的治療靶點(diǎn)，將有助于肝纖維化的預(yù)防及逆轉(zhuǎn)，最大限度的避免各種嚴(yán)重后果的發(fā)生。 固有免疫是機(jī)體第一道屏障系統(tǒng)，對(duì)外來病原體的清除和誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生有效地免疫應(yīng)答反應(yīng)發(fā)揮重要組成作用，固有免疫通過模式識(shí)別系統(tǒng)（PRRs）識(shí)別病原相關(guān)分子模式（PAMP），，NOD樣受體（NLR）屬于PRRs,既能夠識(shí)別病原相關(guān)分子模式（PAMP），也能夠識(shí)別損傷相關(guān)分子模式（DAMP）部分NOD樣受體激活后，可以形成巨大的蛋白復(fù)合體即炎癥小體。根據(jù)不同的N端結(jié)構(gòu)域，又可以將NLR家族分為CIITA、NOD、NLRP及IPAF/NAIP等4個(gè)亞家族。NLRP亞家族有NLRP1～NLRP14等14個(gè)成員， NLRP分子激活后與銜接分子ASC(apoptosis-associatedspeck-like protein containing a CARD)及效應(yīng)分子pro-caspase-1形成炎癥小體。炎癥小體是固有免疫的重要組成部分，在機(jī)體免疫和疾病發(fā)生過程中起到重要作用，能夠識(shí)別各種危險(xiǎn)信號(hào)，通過誘導(dǎo)細(xì)胞活化、細(xì)胞因子及炎癥介質(zhì)釋放，引起炎癥反應(yīng)。由于能被多種類型的病原體或危險(xiǎn)信號(hào)所激活，炎癥小體在多種疾病過程中都發(fā)揮了關(guān)鍵作用。NLRP3炎癥小體是目前研究最多的一種炎癥小體，作為半胱氨酸蛋白激酶1（caspase-1-）的活化分子平臺(tái)，當(dāng)感知到各種危險(xiǎn)信號(hào)存在時(shí)，炎癥小體便會(huì)聚集并并裂解caspase-1前體形成其活化形式，繼而活化的caspase-1以蛋白水解的方式裂解炎癥介質(zhì)pro-IL-1β和pro-IL-1成其成熟狀態(tài)，并分泌到細(xì)胞外。隨著研究的逐漸深入，人們發(fā)現(xiàn)NLRP3炎癥小體與多種組織包括肺，肝臟，皮膚的膠原沉積有很大關(guān)系。而Watanabe et al的研究表明，炎癥小體激活劑MSU能提高體外培養(yǎng)的肝星狀細(xì)胞中TGF-β1和一型膠原的表達(dá)，誘導(dǎo)肌動(dòng)蛋白的重組,提示其可能與誘導(dǎo)星狀細(xì)胞活化從而促進(jìn)肝纖維化發(fā)生有關(guān)，但作用機(jī)制尚不明確。 本課題擬通過BDL（膽總管結(jié)扎）的方法造成大鼠肝纖維化模型，通過檢測(cè)組成成分NLRP3及ASC表達(dá)水平，探討B(tài)DL介導(dǎo)大鼠肝纖維化組織中NLRP3炎癥小體的表達(dá)情況。并通過檢測(cè)其下游caspase-1活性及IL-1等炎癥因子表達(dá)情況，探討NLRP3參與肝纖維化過程的可能機(jī)制，從而為肝纖維化的發(fā)病機(jī)制和有效治療提供理論依據(jù)。 目的：探討大鼠肝纖維化組織中NLRP3炎癥小體的表達(dá)情況并探討NLRP3參與肝纖維化發(fā)生過程的可能機(jī)制，從而為肝纖維化的發(fā)病機(jī)制和有效治療提供理論依據(jù)。 方法：采用成年健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠48只，隨機(jī)分成正常對(duì)照組（簡稱N）6只、假手術(shù)組(簡稱S)6只，BDL手術(shù)組（簡稱B，分為B1，B2，B3組，分別于術(shù)后1w，2w，3w取肝臟組織，每組8只）。運(yùn)用BDL方法建立大鼠肝纖維化模型，模型組分別于術(shù)后1wk、2wk、3wk取材，假手術(shù)組與術(shù)后3w取材。組織切片經(jīng)HE和天狼星紅，Masson三色染色檢測(cè)模型建立過程中的動(dòng)態(tài)病理變化；測(cè)定血清ALT、AST、膽紅素含量；羥脯氨酸試劑盒檢測(cè)羥脯氨酸含量；Western Blot方法檢測(cè)A-SMA，ASC在肝組織的表達(dá)；免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)NLRP3，ASC的表達(dá); caspase-1活性試劑盒檢測(cè)caspase-1的活性; ELISA法檢測(cè)活性IL-1β和活性IL-18表達(dá)情況。 結(jié)果：①HE染色和天狼星紅，Masson三色染色結(jié)果證明BDL誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化模型建立成功。BDL模型肝臟可見膽管增生明顯，大量膠原沉積在小膽管周圍，肝臟廣泛纖維結(jié)締組織增生包繞分割肝小葉形成假小葉。手術(shù)組大鼠于造模3w血清ALT、AST、膽紅素及肝臟組織羥脯氨酸含量均較正常對(duì)照組及假手術(shù)組明顯升高（P0.05）；②肝組織中有NLRP3，ASC的表達(dá)，且在手術(shù)組B1~B3組中NLRP3，ASC表達(dá)逐漸升高且高于正常對(duì)照組及假手術(shù)組（P0.05）；③在BDL誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化模型中，caspase-1活性明顯該高于假手術(shù)組及正常對(duì)照組（P0.05）；④在BDL誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化模型中,活性IL-1β和活性IL-18表達(dá)明顯高于假手術(shù)組及正常對(duì)照組（P0.05）。 結(jié)論：在BDL誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠的肝臟組織中，NLRP3炎癥小體以及其下游分子caspase-1活性升高，IL-1β，IL-18表達(dá)升高，說明其可能促進(jìn)肝纖維化的發(fā)生，其作用機(jī)制既可能是通過IL-1β，IL-18等炎癥因子發(fā)揮作用，也可能是直接通過caspase-1直接參與肝細(xì)胞凋亡實(shí)現(xiàn)的，利用轉(zhuǎn)基因鼠和特異性抑制劑有助于進(jìn)一步明確，從而為肝纖維化的靶向治療提供分子依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R575.2
【目錄】：

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10 廖丹;TGF-β1和smad4mRNA在病毒性肝炎肝纖維化中的表達(dá)及意義[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2003年

  本文關(guān)鍵詞：肝纖維化發(fā)生發(fā)展及逆轉(zhuǎn)過程中kupffer細(xì)胞表型的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：240396