本文關(guān)鍵詞：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《安徽醫(yī)科大學(xué)》 2014年

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究

李曉慧  

【摘要】：肝纖維化（liver fibrosis）是多種慢性肝病發(fā)展的共同病理基礎(chǔ)，其發(fā)病機(jī)制的中心環(huán)節(jié)是靜止的肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cell, HSC）活化增殖，導(dǎo)致以膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix, ECM）過(guò)度沉積。因此，促進(jìn)活化的HSC凋亡是防治肝纖維化的重要手段。 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（Endoplasmic reticulum, ER）是調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成及合成后折疊、聚集的場(chǎng)所，同時(shí)也是調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣水平的場(chǎng)所。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（Endoplasmic reticulumstress, ERS）所誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡是近年來(lái)新被認(rèn)識(shí)的一種凋亡途徑，與經(jīng)典線(xiàn)粒體、死亡受體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡不同。ERS通過(guò)減少未折疊蛋白或錯(cuò)誤折疊蛋白的沉積，ERS激活促凋亡信號(hào)通路與多種疾病密切相關(guān)，但ERS在誘導(dǎo)活化肝星狀細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制尚不清楚。 本實(shí)驗(yàn)選用大鼠肝星狀細(xì)胞系HSC-T6為研究對(duì)象，并以PDGF誘導(dǎo)其活化，探討ERS對(duì)HSC凋亡的調(diào)控及相關(guān)機(jī)制，主要研究?jī)?nèi)容概括如下： 1. ERS促進(jìn)活化的HSC凋亡 為了觀察ERS對(duì)活化的HSC凋亡的影響，給予PDGF體外誘導(dǎo)HSC-T6活化作為對(duì)照組，再分別給予內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的誘導(dǎo)劑毒胡蘿卜素（Thapsigargin, TG）處理，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)ERS對(duì)活化的HSC凋亡的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TG組的細(xì)胞凋亡率明顯高于對(duì)照組，提示ERS可能參與活化HSC的凋亡。 2. ERS對(duì)活化HSC分泌α-SMA和Col1α1的影響 為了觀察ERS對(duì)活化的HSC分泌α-SMA和Col1α1的影響，給予PDGF體外誘導(dǎo)HSC活化作為對(duì)照組，再分別給予TG處理，采用Western blot法檢測(cè)肝纖維化標(biāo)志性蛋白α-SMA、Col1α1的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PDGF體外誘導(dǎo)HSC活化，α-SMA與Col1α1蛋白的表達(dá)明顯上調(diào)；與對(duì)照組相比，TG組α-SMA、Col1α1的表達(dá)顯著下調(diào)。提示ERS可能抑制活化HSC分泌α-SMA和Col1α1的表達(dá)。 3. ERS誘導(dǎo)活化HSC凋亡的調(diào)控及部分機(jī)制的研究 為了觀察Ca2+對(duì)ERS誘導(dǎo)活化的HSC凋亡的影響，以TG誘導(dǎo)活化的HSC作為模型組，再分別給予鈣離子螯合劑EGTA和BAPTA/AM處理，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，采用Western blot法檢測(cè)Calpain、Capase-12、Capase-9、Capase-3和JNK/p38MAPK蛋白的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常組比較，TG明顯促進(jìn)HSC凋亡，同時(shí)發(fā)現(xiàn)TG能顯著促進(jìn)HSC中Calpain、Capase-12、Capase-9、Capase-3和JNK/p38MAPK蛋白的表達(dá)及活化，而給予EGTA和BAPTA/AM干預(yù)后，HSC的凋亡明顯受到抑制，Calpain、Capase-12、Capase-9、Capase-3和JNK/p38MAPK蛋白表達(dá)及活性均受到抑制。提示ERS誘導(dǎo)的活化HSC凋亡機(jī)制可能與細(xì)胞內(nèi)鈣離子調(diào)節(jié)Calpain、Capase-12、Capase-9、Capase-3和JNK/p38MAPK蛋白的表達(dá)有關(guān)。 為了進(jìn)一步探討ERS誘導(dǎo)活化HSC凋亡的機(jī)制，，分別給予Calpain抑制劑Calpeptin、Pan-Capase抑制劑z-VAD-FKM、JNK抑制劑SP600125及p38MAPK抑制劑SB202190處理，采用流式細(xì)胞術(shù)觀察HSC凋亡率，Western blot法檢測(cè)Calpain、Capase-12、Capase-9、Capase-3和JNK/p38MAPK蛋白的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常組比較，C-Capase-12、Capase-9和C-Capase-3的蛋白表達(dá)明顯下降，而Pan-Capase抑制劑z-VAD-FKM組Calpain的蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化。提示ERS誘導(dǎo)的活化HSC凋亡機(jī)制可能與細(xì)胞內(nèi)鈣離子調(diào)節(jié)Calpain、Capase-12、Capase-9、Capase-3和JNK/p38MAPK蛋白的表達(dá)有關(guān)。 4.腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TNF-related apoptosis inducing-ligand, TRAIL）通過(guò)ERS對(duì)活化的HSC凋亡的調(diào)控及部分機(jī)制的研究 前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在肝纖維化逆轉(zhuǎn)恢復(fù)期，枯否細(xì)胞可以通過(guò)分泌TRAIL誘導(dǎo)活化HSC凋亡。為了進(jìn)一步探討TRAIL與ERS誘導(dǎo)的活化HSC凋亡的相互關(guān)聯(lián)。體外給予PDGF刺激活化的HSC，再分別給予TRAIL與ERS誘導(dǎo)劑衣霉素（Tunicamycin, TN）處理，觀察各組凋亡基因Bax mRNA、Caspase-3、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白Caspase-12，CHOP，GRP78的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與PDGF刺激活化的HSC的對(duì)照組相比較，TRAIL組與TN組Bax mRNA表達(dá)明顯上調(diào)、Caspase-3的活化增加，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白Caspase-12，CHOP，GRP78的表達(dá)均明顯上調(diào)。提示ERS可能參與TRAIL調(diào)控活化的HSC凋亡。 以上結(jié)果提示，ERS參與活化HSC凋亡的調(diào)控，其機(jī)制可能與其釋放細(xì)胞內(nèi)鈣離子，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣離子升高，從而誘導(dǎo)Calpain/Caspase和JNK/p38MAPK激活有關(guān)。TRAIL可能通過(guò)誘導(dǎo)PDGF活化的HSC中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白CHOP，GRP78，Caspase-12的表達(dá)，從而促進(jìn)HSC的凋亡。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R575
【目錄】：

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【參考文獻(xiàn)】

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3 謝加力;李俊;黃艷;黃成;章圣朋;林珍;季俊虬;;大鼠肝纖維化進(jìn)程中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的動(dòng)態(tài)變化研究[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2012年09期

【共引文獻(xiàn)】

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中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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9 張迪;肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其機(jī)制的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

10 黃成;c-FLIP_L在肝纖維化形成與逆轉(zhuǎn)過(guò)程中的表達(dá)及對(duì)TRAIL誘導(dǎo)HSC凋亡的調(diào)控作用研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 江福生;李凌;吳其愷;聶廣;;肝星狀細(xì)胞凋亡的機(jī)理、意義及檢測(cè)[A];第九次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2000年

2 陳永平;程瑗;金曉芝;歐陽(yáng)韜;王春瑩;劉俊;鄭明華;;CD4+CD25+CD127dim/-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖及功能的影響[A];第四屆中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)感染科醫(yī)師大會(huì)暨傳染病診治高峰論壇、浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)肝病、感染病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2011年

3 孫嫵弋;魏偉;王玲;;芍藥苷對(duì)血小板衍生生長(zhǎng)因子介導(dǎo)的大鼠肝星狀細(xì)胞增殖的影響及其與G蛋白-cAMP信號(hào)通路的關(guān)系[A];第十屆全國(guó)抗炎免疫藥理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2010年

4 毛子旭;;MEF2調(diào)節(jié)肝星狀細(xì)胞的活化和生長(zhǎng)[A];第十二次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2003年

5 劉成;趙俊芳;劉成海;胡義揚(yáng);徐列明;劉平;;丹參酸乙對(duì)TGF-β1刺激肝星狀細(xì)胞胞內(nèi)Smad3蛋白表達(dá)的影響[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2003年

6 李萬(wàn)平;任美萍;李曉冰;劉明華;章卓;;氯沙坦對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖和凋亡的作用[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)心血管生理學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

7 劉俊;王春瑩;陳永平;林鐲;陽(yáng)韜;陸小蒟;;原肌球蛋白1在大鼠肝纖維化模型及肝星狀細(xì)胞中的動(dòng)態(tài)表達(dá)及意義[A];第二十次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

8 陳紅;李俊峰;趙正斌;張立婷;岳偉;程小龍;;維生素E和C對(duì)瘦素誘導(dǎo)肝星狀細(xì)胞的增殖和組織抑制基質(zhì)金屬蛋白酶-1的影響[A];第四屆中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)感染科醫(yī)師大會(huì)暨傳染病診治高峰論壇、浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)肝病、感染病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2011年

9 劉俊;王春瑩;陳永平;林鐲;陽(yáng)韜;陸小蒟;;原肌球蛋白1在大鼠肝纖維化模型及肝星狀細(xì)胞中的動(dòng)態(tài)表達(dá)及意義[A];第四屆中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)感染科醫(yī)師大會(huì)暨傳染病診治高峰論壇、浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)肝病、感染病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2011年

10 丁惠國(guó);王興翠;尚宏偉;唐素珍;賈繼東;趙春惠;王寶恩;;復(fù)方中藥861對(duì)肝星狀細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)及細(xì)胞骨架蛋白的影響[A];2002全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李煥榮;[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2002年

2 吳 亮 徐壽松;[N];中國(guó)工商報(bào);2004年

3 劉燕玲 張引強(qiáng)中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院肝病科;[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2009年

4 黃遠(yuǎn)軍;[N];大眾科技報(bào);2009年

5 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院肝病研究所 程勇衛(wèi) 唐望先 段瑞嫻 劉紅艷 林菊生 楊玉珍 武漢市第七人民醫(yī)院肝病所 虞滌霞;[N];保健時(shí)報(bào);2009年

6 劉道安;[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2001年

7 陶春祥;[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2001年

8 ;[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

9 茅臺(tái)集團(tuán)董事長(zhǎng)、總工程師 季克良;[N];經(jīng)理日?qǐng)?bào);2005年

10 劍　鐘;[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2002年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王琳;復(fù)方861對(duì)人肝星狀細(xì)胞作用機(jī)理的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2004年

2 侯麗穎;保肝寧對(duì)leptin刺激HSC的增殖及其JAK_2-STAT_3信號(hào)通路影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2007年

3 劉麗;RGD依賴(lài)的整合素信號(hào)通路對(duì)肝纖維化大鼠、肝星狀細(xì)胞膠原代謝的調(diào)控作用及丹參單體干預(yù)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2003年

4 喻劍華;虎金顆粒及大黃素抗肝纖維化作用機(jī)理研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2006年

5 黃兆勝;虎金顆粒及其含藥血清抗肝纖維化作用機(jī)制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2006年

6 肖琳;轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1刺激肝星狀細(xì)胞差異表達(dá)基因研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2006年

7 姚冬梅;ET—1對(duì)肝硬化門(mén)脈高壓的作用及CNP、丹參對(duì)ET—1介導(dǎo)肝星狀細(xì)胞收縮的調(diào)控機(jī)制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2003年

8 董玲;甘草酸對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞TGF-β/smad信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

9 唐曉明;大鼠肝纖維化恢復(fù)期肝星狀細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制及來(lái)氟米特的調(diào)節(jié)作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2009年

10 郭敏;化濁解毒中藥血清及補(bǔ)骨脂素對(duì)肝星狀細(xì)胞生物活性的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王文兵;三七總皂甙抗肝纖維化機(jī)理研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2003年

2 周賢;黃芪注射液抗肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

3 陳娟;COX-2 shRNA對(duì)HSC甘油三酯、膽固醇、維生素A代謝的影響[D];南華大學(xué);2011年

4 梁梓宇;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)肝星狀細(xì)胞系凋亡[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

5 強(qiáng)銘;肝星狀細(xì)胞活化在早期放射性肝損傷中的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

6 龍素軍;異甘草酸鎂對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞TGF-β/smad信號(hào)表達(dá)的影響[D];南華大學(xué);2010年

7 曹平;Smad3沉默對(duì)IGFBPrP1誘導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞作用的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

8 陶忠樺;乙醛激活肝星狀細(xì)胞中Wnt與TGF-β信號(hào)通路的Crosstalk研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2010年

9 夏小春;白介素13和溶血磷脂酸對(duì)人肝星狀細(xì)胞合成Ⅰ型和Ⅲ型膠原的影響[D];南昌大學(xué);2010年

10 陳蓮香;神經(jīng)生長(zhǎng)因子及其受體p75NTR對(duì)肝星狀細(xì)胞作用的初步研究[D];暨南大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：231979