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內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡的機制研究

發(fā)布時間:2017-01-02 16:33

  本文關(guān)鍵詞:內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡的機制研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。


《安徽醫(yī)科大學(xué)》 2014年

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡的機制研究

李曉慧  

【摘要】:肝纖維化(liver fibrosis)是多種慢性肝病發(fā)展的共同病理基礎(chǔ),其發(fā)病機制的中心環(huán)節(jié)是靜止的肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell, HSC)活化增殖,導(dǎo)致以膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)過度沉積。因此,促進活化的HSC凋亡是防治肝纖維化的重要手段。 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(Endoplasmic reticulum, ER)是調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成及合成后折疊、聚集的場所,同時也是調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣水平的場所。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(Endoplasmic reticulumstress, ERS)所誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡是近年來新被認(rèn)識的一種凋亡途徑,與經(jīng)典線粒體、死亡受體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡不同。ERS通過減少未折疊蛋白或錯誤折疊蛋白的沉積,ERS激活促凋亡信號通路與多種疾病密切相關(guān),但ERS在誘導(dǎo)活化肝星狀細(xì)胞凋亡的作用及機制尚不清楚。 本實驗選用大鼠肝星狀細(xì)胞系HSC-T6為研究對象,并以PDGF誘導(dǎo)其活化,探討ERS對HSC凋亡的調(diào)控及相關(guān)機制,主要研究內(nèi)容概括如下: 1. ERS促進活化的HSC凋亡 為了觀察ERS對活化的HSC凋亡的影響,給予PDGF體外誘導(dǎo)HSC-T6活化作為對照組,再分別給予內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的誘導(dǎo)劑毒胡蘿卜素(Thapsigargin, TG)處理,采用流式細(xì)胞儀檢測ERS對活化的HSC凋亡的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),TG組的細(xì)胞凋亡率明顯高于對照組,提示ERS可能參與活化HSC的凋亡。 2. ERS對活化HSC分泌α-SMA和Col1α1的影響 為了觀察ERS對活化的HSC分泌α-SMA和Col1α1的影響,給予PDGF體外誘導(dǎo)HSC活化作為對照組,再分別給予TG處理,采用Western blot法檢測肝纖維化標(biāo)志性蛋白α-SMA、Col1α1的表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn),PDGF體外誘導(dǎo)HSC活化,α-SMA與Col1α1蛋白的表達明顯上調(diào);與對照組相比,TG組α-SMA、Col1α1的表達顯著下調(diào)。提示ERS可能抑制活化HSC分泌α-SMA和Col1α1的表達。 3. ERS誘導(dǎo)活化HSC凋亡的調(diào)控及部分機制的研究 為了觀察Ca2+對ERS誘導(dǎo)活化的HSC凋亡的影響,以TG誘導(dǎo)活化的HSC作為模型組,再分別給予鈣離子螯合劑EGTA和BAPTA/AM處理,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率,采用Western blot法檢測Calpain、Capase-12、Capase-9、Capase-3和JNK/p38MAPK蛋白的表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與正常組比較,TG明顯促進HSC凋亡,同時發(fā)現(xiàn)TG能顯著促進HSC中Calpain、Capase-12、Capase-9、Capase-3和JNK/p38MAPK蛋白的表達及活化,而給予EGTA和BAPTA/AM干預(yù)后,HSC的凋亡明顯受到抑制,Calpain、Capase-12、Capase-9、Capase-3和JNK/p38MAPK蛋白表達及活性均受到抑制。提示ERS誘導(dǎo)的活化HSC凋亡機制可能與細(xì)胞內(nèi)鈣離子調(diào)節(jié)Calpain、Capase-12、Capase-9、Capase-3和JNK/p38MAPK蛋白的表達有關(guān)。 為了進一步探討ERS誘導(dǎo)活化HSC凋亡的機制,,分別給予Calpain抑制劑Calpeptin、Pan-Capase抑制劑z-VAD-FKM、JNK抑制劑SP600125及p38MAPK抑制劑SB202190處理,采用流式細(xì)胞術(shù)觀察HSC凋亡率,Western blot法檢測Calpain、Capase-12、Capase-9、Capase-3和JNK/p38MAPK蛋白的表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與正常組比較,C-Capase-12、Capase-9和C-Capase-3的蛋白表達明顯下降,而Pan-Capase抑制劑z-VAD-FKM組Calpain的蛋白表達無明顯變化。提示ERS誘導(dǎo)的活化HSC凋亡機制可能與細(xì)胞內(nèi)鈣離子調(diào)節(jié)Calpain、Capase-12、Capase-9、Capase-3和JNK/p38MAPK蛋白的表達有關(guān)。 4.腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TNF-related apoptosis inducing-ligand, TRAIL)通過ERS對活化的HSC凋亡的調(diào)控及部分機制的研究 前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn):在肝纖維化逆轉(zhuǎn)恢復(fù)期,枯否細(xì)胞可以通過分泌TRAIL誘導(dǎo)活化HSC凋亡。為了進一步探討TRAIL與ERS誘導(dǎo)的活化HSC凋亡的相互關(guān)聯(lián)。體外給予PDGF刺激活化的HSC,再分別給予TRAIL與ERS誘導(dǎo)劑衣霉素(Tunicamycin, TN)處理,觀察各組凋亡基因Bax mRNA、Caspase-3、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白Caspase-12,CHOP,GRP78的表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與PDGF刺激活化的HSC的對照組相比較,TRAIL組與TN組Bax mRNA表達明顯上調(diào)、Caspase-3的活化增加,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白Caspase-12,CHOP,GRP78的表達均明顯上調(diào)。提示ERS可能參與TRAIL調(diào)控活化的HSC凋亡。 以上結(jié)果提示,ERS參與活化HSC凋亡的調(diào)控,其機制可能與其釋放細(xì)胞內(nèi)鈣離子,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣離子升高,從而誘導(dǎo)Calpain/Caspase和JNK/p38MAPK激活有關(guān)。TRAIL可能通過誘導(dǎo)PDGF活化的HSC中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白CHOP,GRP78,Caspase-12的表達,從而促進HSC的凋亡。

【關(guān)鍵詞】:
【學(xué)位授予單位】:安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2014
【分類號】:R575
【目錄】:

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9 劉俊;王春瑩;陳永平;林鐲;陽韜;陸小蒟;;原肌球蛋白1在大鼠肝纖維化模型及肝星狀細(xì)胞中的動態(tài)表達及意義[A];第四屆中國醫(yī)師協(xié)會感染科醫(yī)師大會暨傳染病診治高峰論壇、浙江省醫(yī)學(xué)會肝病、感染病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

10 丁惠國;王興翠;尚宏偉;唐素珍;賈繼東;趙春惠;王寶恩;;復(fù)方中藥861對肝星狀細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)及細(xì)胞骨架蛋白的影響[A];2002全國中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2002年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李煥榮;[N];中國醫(yī)藥報;2002年

2 吳 亮 徐壽松;[N];中國工商報;2004年

3 劉燕玲 張引強中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院肝病科;[N];中國中醫(yī)藥報;2009年

4 黃遠軍;[N];大眾科技報;2009年

5 華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬同濟醫(yī)院肝病研究所 程勇衛(wèi) 唐望先 段瑞嫻 劉紅艷 林菊生 楊玉珍 武漢市第七人民醫(yī)院肝病所 虞滌霞;[N];保健時報;2009年

6 劉道安;[N];中國醫(yī)藥報;2001年

7 陶春祥;[N];中國醫(yī)藥報;2001年

8 ;[N];中國醫(yī)藥報;2003年

9 茅臺集團董事長、總工程師 季克良;[N];經(jīng)理日報;2005年

10 劍 鐘;[N];中國中醫(yī)藥報;2002年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王琳;復(fù)方861對人肝星狀細(xì)胞作用機理的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2004年

2 侯麗穎;保肝寧對leptin刺激HSC的增殖及其JAK_2-STAT_3信號通路影響的實驗研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2007年

3 劉麗;RGD依賴的整合素信號通路對肝纖維化大鼠、肝星狀細(xì)胞膠原代謝的調(diào)控作用及丹參單體干預(yù)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2003年

4 喻劍華;虎金顆粒及大黃素抗肝纖維化作用機理研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2006年

5 黃兆勝;虎金顆粒及其含藥血清抗肝纖維化作用機制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2006年

6 肖琳;轉(zhuǎn)化生長因子β1刺激肝星狀細(xì)胞差異表達基因研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2006年

7 姚冬梅;ET—1對肝硬化門脈高壓的作用及CNP、丹參對ET—1介導(dǎo)肝星狀細(xì)胞收縮的調(diào)控機制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2003年

8 董玲;甘草酸對大鼠肝星狀細(xì)胞TGF-β/smad信號傳導(dǎo)通路的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

9 唐曉明;大鼠肝纖維化恢復(fù)期肝星狀細(xì)胞凋亡的分子機制及來氟米特的調(diào)節(jié)作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2009年

10 郭敏;化濁解毒中藥血清及補骨脂素對肝星狀細(xì)胞生物活性的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王文兵;三七總皂甙抗肝纖維化機理研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2003年

2 周賢;黃芪注射液抗肝纖維化的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

3 陳娟;COX-2 shRNA對HSC甘油三酯、膽固醇、維生素A代謝的影響[D];南華大學(xué);2011年

4 梁梓宇;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)肝星狀細(xì)胞系凋亡[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

5 強銘;肝星狀細(xì)胞活化在早期放射性肝損傷中的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

6 龍素軍;異甘草酸鎂對大鼠肝星狀細(xì)胞TGF-β/smad信號表達的影響[D];南華大學(xué);2010年

7 曹平;Smad3沉默對IGFBPrP1誘導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞作用的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

8 陶忠樺;乙醛激活肝星狀細(xì)胞中Wnt與TGF-β信號通路的Crosstalk研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2010年

9 夏小春;白介素13和溶血磷脂酸對人肝星狀細(xì)胞合成Ⅰ型和Ⅲ型膠原的影響[D];南昌大學(xué);2010年

10 陳蓮香;神經(jīng)生長因子及其受體p75NTR對肝星狀細(xì)胞作用的初步研究[D];暨南大學(xué);2011年


  本文關(guān)鍵詞:內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡的機制研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。



本文編號:231979

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