【摘要】：目的:非酒精性脂肪肝(NAFLD)是一類除外酒精和其他明確損肝因素導(dǎo)致的以肝細(xì)胞內(nèi)脂肪蓄積為主要特點(diǎn)的臨床病理綜合征。隨著人民生活水平的提高,我國NAFLD患病率正在逐年上升。目前研究認(rèn)為,NAFLD是由多種因素平行作用導(dǎo)致,飲食習(xí)慣、遺傳因素和環(huán)境因素可共同影響脂肪代謝,少數(shù)患者可因肝細(xì)胞炎癥而進(jìn)展為肝纖維化、肝硬化、肝細(xì)胞肝癌。本研究室前期采用飛行質(zhì)譜技術(shù)(MALDI-TOF MS)在慢性乙型肝炎患者血清中檢測到一種含有16個(gè)氨基酸的差異性多肽片段:脫精氨酸補(bǔ)體C3f(DRC3f),該多肽在輕度和中度的病人血清中表達(dá)高于重度病人。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)DRC3f具有抑制肝細(xì)胞增殖的作用,其對免疫性肝損傷、肝纖維化均有保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)室前期關(guān)于DRC3f對非酒精性脂肪肝保護(hù)性作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)DRC3f可減少高脂飲食聯(lián)合四氯化碳導(dǎo)致的大鼠肝臟空泡樣變,改善血清學(xué)指標(biāo),但是DRC3f發(fā)揮保護(hù)作用的具體分子機(jī)制尚不完全明確。本研究通過AMPK通路、PPAR/LXR通路和PI3K/Akt通路從脂肪代謝機(jī)制的角度來探索DRC3f對非酒精性脂肪肝的保護(hù)作用,為非酒精性脂肪肝的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:本研究選擇前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中血清學(xué)指標(biāo)和肝組織切片病理學(xué)指標(biāo)均較好的DRC3f 200μg/kg組(DRC3f組)以及正常對照組(正常組)、高脂飲食聯(lián)合四氯化碳誘導(dǎo)大鼠NAFLD模型組(模型組)、復(fù)方甘草酸苷陽性對照組(灌胃給予復(fù)方甘草酸苷,復(fù)方甘草酸苷組)、降脂通絡(luò)軟膠囊陽性對照組(灌胃給予降脂通絡(luò)軟膠囊,降脂通絡(luò)軟膠囊組)的留存肝組織樣本作為研究對象。1應(yīng)用qRT-PCR方法測定凍存大鼠肝組織中的AMPK信號(hào)通路相關(guān)指標(biāo):adiponectin、LKB1、AMPKα1、AMPKα2、ACC、CPT1、SREBP-1c、PNPLA3、FAS;PPAR和LXR脂代謝相關(guān)通路的指標(biāo):PPARα、LXRα、PPARγ;炎癥、纖維化和細(xì)胞增殖相關(guān)因子:IL-6、TGF-β1、collagen1、PCNA的基因表達(dá)水平。2應(yīng)用western-blot方法測定正常組、模型組、drc3f組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組肝組織的p-ampkα/ampkα、pi3k、p-akt/akt蛋白相對表達(dá)水平。結(jié)果:1ampk信號(hào)通路的相關(guān)基因及蛋白表達(dá)水平模型組ampkα1、ampkα2mrna相對表達(dá)量與正常組相比均降低(p0.001),drc3f組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組與模型組比,ampkα1、ampkα2mrna相對表達(dá)量均升高(p0.01),且drc3f組ampka1和ampkα2mrna表達(dá)量高于復(fù)方甘草酸苷組和降脂通絡(luò)軟膠囊組(p0.001)。與正常組比,模型組p-ampkα/ampkα蛋白相對表達(dá)量降低(p0.01),drc3f組與模型組比p-ampkα/ampkα蛋白相對表達(dá)量升高(p0.05)。模型組adiponectin、lkb1mrna相對表達(dá)量與正常組相比均降低(p0.05)。與模型組相比,drc3f組adiponectin、lkb1mrna相對表達(dá)量均升高(p0.01),且drc3f組adiponectin、lkb1mrna表達(dá)量均高于復(fù)方甘草酸苷組和降脂通絡(luò)軟膠囊組(p0.05)。模型組cpt1mrna相對表達(dá)與正常組相比降低(p0.05),accmrna相對表達(dá)升高(p0.001)。與模型組相比,drc3f組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組accmrna相對表達(dá)量降低(p0.001),cpt1mrna相對表達(dá)量升高(p0.01)。模型組srebp-1c、pnpla3、fasmrna相對表達(dá)量與正常組相比均升高(p0.001)。與模型組比,drc3f組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組srebp-1c、pnpla3、fasmrna相對表達(dá)量均降低(p0.01),但是drc3f組srebp-1cmrna表達(dá)水平高于降脂通絡(luò)軟膠囊組(p0.001),而pnpla3、fasmrna與降脂通絡(luò)軟膠囊組和復(fù)方甘草酸苷組之間無顯著性差別。2pparα、lxrα、pparγ的基因表達(dá)水平各組之間pparα與lxrαmrna相對表達(dá)量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。模型組與正常組比,pparγmrna相對表達(dá)量升高(p0.001);降脂通絡(luò)軟膠囊組與模型組比pparγmrna相對表達(dá)量降低(p0.05),但是drc3f組與模型組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.118)。3胰島素相關(guān)PI3K、p-Akt/Akt的蛋白表達(dá)水平Western blot結(jié)果顯示,正常組、模型組、DRC3f組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組PI3K和p-Akt/Akt的蛋白相對表達(dá)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4炎癥、纖維化和細(xì)胞增殖相關(guān)因子IL-6、TGF-β1、collagen1、PCNA的表達(dá)水平模型組IL-6、TGF-β1、collagen1 mRNA相對表達(dá)量與正常組相比均升高(P0.001)。與模型組相比,DRC3f組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組IL-6、TGF-β1 mRNA相對表達(dá)量均降低(P0.05);DRC3f組、復(fù)方甘草酸苷組、降脂通絡(luò)軟膠囊組collagen1 mRNA相對表達(dá)水平降低(P0.05),且DRC3f組collagen1 mRNA相對表達(dá)量低于復(fù)方甘草酸苷組和降脂通絡(luò)軟膠囊組(P0.01)。各組之間PCNA mRNA相對表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:1 DRC3f對高脂飲食聯(lián)合四氯化碳誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝的保護(hù)作用可能是通過上調(diào)adiponectin、LKB1激活A(yù)MPK,從而調(diào)節(jié)ACC、CPT1促進(jìn)脂肪酸氧化以及通過激活A(yù)MPK抑制SREBP-1c、PNPLA3、FAS使脂肪合成減少來發(fā)揮,DRC3f可在一定程度上減輕由高脂飲食聯(lián)合四氯化碳誘導(dǎo)的大鼠肝臟炎癥反應(yīng)和纖維化。2 DRC3f的治療作用可能與PPAR/LXR通路無關(guān)。DRC3f的治療作用可能與PI3K/Akt通路無關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R575.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2281339