【摘要】：目的：研究外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)內(nèi)和肝組織內(nèi)雄激素受體(androgen receptor, AR)和雌激素受體a (estrogen receptor a, ERa)表達水平與慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者肝組織病理狀態(tài)、乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)病毒復(fù)制及其抗原表達水平、CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞(regulatory T cell, Treg)/輔助性T細胞17 (T helper cell 17,Th17)的相關(guān)性。資料與方法：1研究對象：1.1 入選標(biāo)準：參照2010年中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會、中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會制訂的《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》中的診斷標(biāo)準,按照住院時間選取經(jīng)過肝穿刺活檢的CHB患者94例,性別、年齡不限。1.2排除標(biāo)準：1)既往經(jīng)過抗病毒治療的患者；2)合并酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病、丙型肝炎、藥物性肝炎、自身免疫性肝病、膽汁淤積性肝病、淤血性肝病、肝豆?fàn)詈俗冃�、血色病及其他病毒性肝炎的患者�?)近半年內(nèi)曾經(jīng)使用激素、或激素替代藥物、或激素拮抗藥物、或甘草酸類藥物、或抗肝纖維化藥物的患者；4)肝硬化失代償期患者；5)性腺疾病、內(nèi)分泌與其他可能影響體內(nèi)睪酮、雌二醇疾病的患者。2標(biāo)本的留取2.1PBMCs分離：Ficoll密度梯度離心法分離PBMCs,分離的細胞分成兩份,一份加入lml凍存液,另一份加入300此的RNAlater,-80℃冰箱凍存。2.2肝組織標(biāo)本留�。焊谓M織活檢采用1秒鐘經(jīng)皮肝穿刺法,抽取肝組織長度≥1.2cm；肝組織標(biāo)本采集后分成兩段,長度分別≥1.0cm和0.2cm,分別送病理送檢和用RNAlater浸沒放入-80℃冰箱凍存。3實驗方法3.1 PBMCs中Th17及Treg頻率：用流式細胞儀檢測Thl7細胞頻率(CD3+CD8-IL17+)及Treg細胞頻率(CD3+CD8-CD25+CD127-).3.2 PBMCs內(nèi)和肝組織內(nèi)AR mRNA、ERamRNA、叉狀／翅狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子3 (forkhead/winged helix transcription factor3, Foxp3)mRNA、維甲酸相關(guān)孤兒受體γt (retinoic acid related orphan receptor yt, RORyt) mRNA含量測定：采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)測定。3.3肝組織內(nèi)Foxp3+和IL-17+T細胞檢測：用免疫組化法(immunohisto-chemistry, IHC),并隨機挑取5個匯管區(qū)進行Foxp3+和IL-17+T計數(shù),取其平均數(shù)。3.4肝組織病理學(xué)診斷：蘇木素-伊紅(hematoxylin and eosin, HE)染色和網(wǎng)狀纖維染色(masson staining),資深病理科醫(yī)師進行組織病理學(xué)分級(grading,G)和分期(staging, S)。3.5肝組織HBsAg和HBcAg表達：用IHC測定。3.6血清乙肝病毒(hepatitis B virus, HBV)標(biāo)記物及HBsAg定量檢測：采用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法檢測。3.7血清HBV DNA定量檢測：采用RT-PCR測定。結(jié)果：1 HBeAg陽性患者,PBMCs內(nèi)ERa mRNA含量與分級呈顯著正相關(guān)(r=0.303,P=0.034)；肝組織內(nèi)AR mRNA含量與肝組織分級與分期均呈顯著負相關(guān)(r=-0.432, P=0.002; r=-0.353, P=0.014)。HBeAg陰性患者,PBMCs內(nèi)AR mRNA含量與肝組織分級與分期均呈顯著負相關(guān)(r=-0.362, P=0.019; r=-0.346, P=0.025),肝組織內(nèi)AR mRNA含量與肝組織分級與分期均呈顯著負相關(guān)(r=-0.592, P=0.000; r=-0.472, P=0.001)。2無論HBeAg陽性或HBeAg陰性患者,PBMCs及肝組織內(nèi)AR mRNA和ER mRNA含量與肝臟HBsAg水平和HBcAg水平、血清HBsAg水平和HBVDNA載量之間均無顯著相關(guān)性(P0.05)。3 HBeAg陽性患者, PBMCs內(nèi)ERa mRNA含量與PBMCs內(nèi)Foxp3 mRNA、 RORyt mRNA含量之間均呈顯著正相關(guān)(r=0.557, P=0.000; r=0.610, P=0.000),肝組織內(nèi)ERa mRNA含量與肝組織內(nèi)RORyt mRNA、RORyt mRNA/Foxp3 mRNA含量之間均呈顯著正相關(guān)(r=0.550, P=0.000; r=0.485, P=0.000)。HBeAg陰性患者,PBMCs內(nèi)ERa mRNA含量與PBMCs內(nèi)Foxp3 mRNA、RORyt mRNA含量之間均呈顯著正相關(guān)(r=0.478, P=0.001; r=0.585, P=0.000),肝組織內(nèi)ARmRNA含量與肝組織內(nèi)RORyt mRNA含量之間呈顯著負相關(guān)(r=-0.371,P=-0.013),肝組織內(nèi)ERa mRNA含量與PBMCs內(nèi)RORyt mRNA、RORyt mRNA/Foxp3 mRNA含量之間均呈顯著負相關(guān)(r=-0.509, P=0.001; r=-0.336,P=0.030),與肝組織內(nèi)RORyt mRNA含量之間呈顯著正相關(guān)(r=0.407,P=0.006)。4 HBeAg陽性患者,PBMCs內(nèi)Foxp3 mRNA含量與肝組織分級分期均呈顯著正相關(guān)(r=0.448, P=0.001; r=0.322, P=0.024); PBMCs內(nèi)RORyt mRNA含量與肝組織分級呈顯著正相關(guān)(r=0.342,P=0.016),肝組織內(nèi)RORyt mRNA/Foxp3 mRNA含量與病理分級和分期均呈顯著負相關(guān)(r=-0.649, P= 0.000; r=-0.568, P=0.000)。HBeAg陰性患者,肝組織內(nèi)Foxp3 mRNA含量與肝組織分級呈顯著正相關(guān)(r=0.348,P=0.021),肝組織內(nèi)RORγt mRNA含量與肝組織分級和分期均呈顯著正相關(guān)(r=0.410,P=0.006;r=0.381,P=0.011).結(jié)論：1 AR和ERα對CHB發(fā)病和進展的影響在HBeAg陽性患者和陰性患者之間可能有所不同；但不管是HBeAg陽性還是陰性患者,肝組織內(nèi)AR mRNA表達的減少可能是影響CHB發(fā)病和進展的獨立的危險因素。Treg細胞和Th17細胞也可能與CHB發(fā)病和進展密切相關(guān)。2 AR和ERα影響CHB發(fā)病和進展的機制可能并不是主要依賴于影響HBV的復(fù)制和抗原表達,其機制可能是依賴于影響Treg細胞和Th17細胞的活化和生成。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R512.62

【參考文獻】

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1 史慧慧;張小楠;張占卿;陸偉;沈芳;馮艷玲;袁正宏;;外周血單個核細胞內(nèi)性甾體激素受體與慢性乙型肝炎肝組織病理狀態(tài)的相關(guān)性[J];肝臟;2013年08期

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本文編號：2274122