【摘要】：背景和目的:近年來,非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的全球患病率隨著人們生活水平的提高及生活方式的轉(zhuǎn)變逐年上升。大量研究表明,NAFLD與肥胖、高脂血癥及糖尿病等慢性疾病密切相關(guān),其對人類身體健康及生活質(zhì)量帶來極大的威脅是顯而易見的。然而,NAFLD發(fā)病機(jī)制目前仍不清楚,且治療手段也極為有限。因此,明確NAFLD的病因及早期預(yù)防尤為重要。幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)是一種革蘭陰性微需氧菌,其全球人群感染率很高,是人類最常見的胃腸道感染性病原體之一,已被公認(rèn)是胃腸道疾病包括慢性胃炎、消化性潰瘍、胃黏膜相關(guān)性淋巴組織(MALT)淋巴瘤及胃癌等重要的環(huán)境致病因素。隨著研究的不斷深入,越來越多的臨床資料表明Hp感染也可能與多種胃腸外疾病包括血液系統(tǒng)疾病、心血管疾病及代謝類疾病等有關(guān)。近來不少研究報(bào)道Hp感染可能與NAFLD的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。NAFLD作為代謝綜合癥(metabolism syndrome,MS)在肝臟的表現(xiàn)之一,胰島素抵抗(insulin resistance,IR)介導(dǎo)的肝臟脂肪異位沉積為其致病的中心環(huán)節(jié)。大量研究表明Hp感染在IR發(fā)生中發(fā)揮著極為重要的作用。因此,Hp持續(xù)感染是否會引發(fā)NAFLD?高脂飲食作為NAFLD重要的環(huán)境致病因素與Hp感染是否具有協(xié)同作用導(dǎo)致NAFLD?如果Hp感染會導(dǎo)致NAFLD的發(fā)生,其可能的致病機(jī)制是什么?這一系列問題仍有待進(jìn)一步研究。材料與方法:1.建立Hp(SS1、NCTC11637)標(biāo)準(zhǔn)菌株感染C57BL/6小鼠的動(dòng)物模型,分別給予普通飲食和高脂飲食。2.檢測不同飲食干預(yù)24周后Hp感染組和非感染組小鼠的體重、血脂及肝酶的水平。應(yīng)用全自動(dòng)生化儀檢測血脂包括總膽固醇(total cholesterol,T-CHOL)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL-C)、甘油三酯(triglyceride,TG),及肝功能轉(zhuǎn)氨酶包括天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)。3.于不同飲食干預(yù)24周后處死動(dòng)物,分離肝臟組織,稱重,并計(jì)算質(zhì)量指數(shù),HE染色觀察肝臟組織形態(tài)學(xué)改變,并采用NAS評分系統(tǒng)對肝臟組織脂肪變性及炎癥情況進(jìn)行評分,油紅O染色直接觀察肝臟組織脂肪沉積情況,并采用甘油三酯試劑盒法對肝臟組織甘油三酯含量進(jìn)行定量檢測。4.采用Western blot法測定肝臟組織IRS/PI3K/Akt信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá);采用Real-time PCR方法檢測肝臟組織脂肪合成相關(guān)酶(PPARγ,FASN,SREBP1)的mRNA水平。結(jié)果:1.不同飲食干預(yù)后Hp感染對C57BL/6小鼠體重及血生化指標(biāo)的影響(1)高脂飲食組小鼠體重明顯高于普通飲食組(p0.01),而Hp感染組與非感染組間小鼠體重?zé)o差異(p0.05)。(2)高脂飲食組小鼠血漿LDL-C明顯高于普通飲食組(p0.01),其中高脂飲食中HpSS1感染組小鼠血漿LDL-C也明顯高于非感染組(p0.01);而普通飲食中Hp感染組與非感染組無明顯差異(p0.05)。(3)高脂飲食組小鼠血漿T-CHOL明顯高于普通飲食組(p0.01),而Hp感染組與未感染組間小鼠血漿T-CHOL無明顯差異(p0.05);無論是高脂飲食組與普通飲食組間還是Hp感染組與非感染組間小鼠血漿TG均無明顯差異(p0.05)。(4)高脂飲食組中HpSS1感染亞組血清ALT較普通飲食組中HpSS1感染亞組明顯增大(p0.01);在高脂飲食中HpSS1感染組小鼠血清ALT較非感染組明顯增大(p0.01);而普通飲食中Hp感染組血清ALT與非感染組比無明顯差異(p0.05)。高脂飲食組小鼠血清AST與普通飲食組比無明顯差異(p0.05);無論是高脂飲食組與普通飲食組間Hp感染組與未感染組間血清AST均無明顯差異(p0.05)。2.不同飲食干預(yù)后Hp感染對C57BL/6小鼠肝臟脂肪含量的影響(1)高脂飲食組小鼠肝臟重量與普通飲食組比無明顯差異(p0.05),高脂飲食組中HpSS1感染組與非感染組比也無明顯差異(p0.05)。(2)高脂飲食組肝臟組織HE染色可見彌漫分布的脂滴,而普通飲食組未見明顯異常,且高脂飲食組中HpSS1感染組與非感染組比肝臟細(xì)胞脂滴更大數(shù)量更多,NAS評分具有明顯差異(p0.01)。(3)肝臟組織油紅O染色后可見高脂飲食組小鼠較普通飲食組比脂質(zhì)累積更明顯,且高脂飲食組中HpSS1感染組較非感染組也更明顯。(4)高脂飲食組小鼠肝臟TG含量明顯高于普通飲食組(p0.01),且高脂飲食中HpSS1感染組較非感染組比明顯增高(p0.05);而普通飲食組中Hp感染組與非感染組無明顯差異(p0.05)。3.不同飲食干預(yù)后Hp感染對C57BL/6小鼠肝組織IRS/PI3K/Akt信號通路及肝臟組織脂肪代謝關(guān)鍵酶表達(dá)的影響(1)單純高脂飲食組或單純HpSS1感染組與對照組比小鼠肝組織p-Akt(Ser473)的表達(dá)均無明顯差異(p0.05),而高脂飲食聯(lián)合HpSS1感染組與對照組比顯著下降(p0.01)。(2)單純高脂飲食組或單純HpSS1感染組小鼠肝組織IRS1的表達(dá)與對照組比無明顯差異(p0.05);且高脂飲食聯(lián)合HpSS1感染組較對照組比也無明顯差異(p0.05)。(3)單純高脂飲食組或單純HpSS1感染組小鼠肝組織p-IRS1(Tyr896)的表達(dá)與對照組比無明顯差異(p0.05);而高脂飲食聯(lián)合HpSS1感染組較對照組小鼠肝組織p-IRS1(Tyr896)的表達(dá)顯著下降(p0.01)。(4)單純高脂飲食組或單純HpSS1感染組與對照組比,小鼠肝臟組織PPARγ、SREBP1及FASN的mRNA表達(dá)水平均無明顯差異(p0.05),而高脂飲食聯(lián)合HpSS1感染組小鼠肝臟PPARγmRNA表達(dá)水平明顯高于對照組(p0.01)。肝臟SREBP1及FASN的mRNA表達(dá)水平在高脂飲食聯(lián)合Hp感染組中較對照組有明顯增高的趨勢。結(jié)論:1.在高脂飲食條件下Hp感染可進(jìn)一步加重NAFLD。2.Hp感染聯(lián)合高脂飲食導(dǎo)致NAFLD與抑制肝臟組織IRS-1/PI3K/Akt信號通路有關(guān)。
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【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R575.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2274104