本文關(guān)鍵詞：BAHD1在潰瘍性結(jié)腸炎中的作用及機(jī)制探討，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《浙江大學(xué)》 2015年

BAHD1在潰瘍性結(jié)腸炎中的作用及機(jī)制探討

朱華陀  

【摘要】：研究背景及目的： 潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis, UC)是累及結(jié)腸粘膜慢性非特異炎癥性疾病,病程漫長(zhǎng)且反復(fù)發(fā)作,甚至癌變。近年來(lái)我國(guó)UC發(fā)病率呈明顯增加趨勢(shì),構(gòu)成日益嚴(yán)重的社會(huì)健康問(wèn)題。UC發(fā)病機(jī)制尚未完全明確,目前主要認(rèn)為與遺傳、環(huán)境、免疫等因素有關(guān)；深入揭示UC發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制,并發(fā)掘潛在的干預(yù)治療靶點(diǎn),對(duì)提高UC防治水平有重要意義。 BAHD1(Bromo Adjacent Homology Domain-containing protein1)是通過(guò)轉(zhuǎn)錄譜印記關(guān)聯(lián)分析方法篩選出的可能與UC的發(fā)病可能密切相關(guān)的106種蛋白分子之一,其參與異染色質(zhì)形成并維持細(xì)胞正常分化及胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)。研究發(fā)現(xiàn)腸道上皮細(xì)胞BAHD1在宿主抗病原微生物感染過(guò)程中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用,包括BAHD1在內(nèi)的新型基因沉默復(fù)合物對(duì)干擾素誘導(dǎo)的下游基因(interferon stimulated genes, ISGs)表達(dá)調(diào)控具有普適性。 作一種為新近發(fā)現(xiàn)的核蛋白,BAHD1是否參與調(diào)控UC的發(fā)生發(fā)展尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)告。本研究旨在通過(guò)體內(nèi)驗(yàn)證結(jié)合體外探索分子機(jī)制的方法,探討B(tài)AHD1在UC發(fā)生發(fā)展中的可能調(diào)控作用及其中所涉及的分子機(jī)制。 方法： (1)急性UC動(dòng)物模型建立：用含硫酸鹽葡聚糖鈉(dextran sodium sulfate,DSS)高壓滅菌水喂養(yǎng)8-10周齡C57BL/6系小鼠,構(gòu)建小鼠急性UC模型,通過(guò)小鼠結(jié)腸炎疾病活動(dòng)指數(shù)、結(jié)腸炎病理評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)動(dòng)物模型建模情況。 (2)構(gòu)建細(xì)胞模型模擬結(jié)腸細(xì)胞炎癥環(huán)境：炎癥介質(zhì)TNF-α、IFN-γ、L-1β及LPS混合物刺激Caco-2細(xì)胞,模擬結(jié)腸上皮細(xì)胞炎癥環(huán)境,用以研究結(jié)腸上皮細(xì)胞胞內(nèi)炎癥信號(hào)變化。 (3)收集UC病人及對(duì)照健康(為手術(shù)病人癌旁或癌遠(yuǎn)端)結(jié)腸組織切片,通過(guò)免疫組化法檢測(cè)BAHD1在結(jié)腸上皮細(xì)胞中的定位以及UC中的表達(dá)變化。 (4) siBAHD1轉(zhuǎn)染Caco-2細(xì)胞：應(yīng)用脂質(zhì)體Lipofectamine3000將siRNA轉(zhuǎn)入Caco-2細(xì)胞,設(shè)立陰性對(duì)照組,于轉(zhuǎn)染48h后構(gòu)建細(xì)胞模型。 (5) ELISA檢測(cè)：留取培養(yǎng)基上清及小鼠UC模型及對(duì)照組遠(yuǎn)端結(jié)腸,檢測(cè)各組相關(guān)炎癥因子表達(dá)變化。 (6) qRT-PCR檢測(cè)：轉(zhuǎn)錄譜印記分析法預(yù)測(cè)分子在UC動(dòng)物模型中的表達(dá)驗(yàn)證；BAHD1表達(dá)下降后細(xì)胞因子包括促炎癥因子、趨化因子以及粘附因子在mRNA水平的表達(dá)變化。 (7) Western blot檢測(cè)：BAHD1表達(dá)下調(diào)對(duì)包括IKK/NF-κB及MAPK (JNK/AP-1, p-P38及p-ERK)經(jīng)典炎癥通路中關(guān)鍵蛋白及Caspase-8激活的影響,對(duì)上游TNFR1的表達(dá)影響。 結(jié)果： (1)動(dòng)物模型建立：成功建立DSS誘導(dǎo)小鼠急性結(jié)腸炎模型,DSS組小鼠結(jié)腸炎疾病活動(dòng)指數(shù)及結(jié)腸炎病理評(píng)分明顯高于對(duì)照組； (2)細(xì)胞模型模擬結(jié)腸細(xì)胞炎癥環(huán)境：炎癥介質(zhì)(TNF-α、IFN-γ、IL-1β及LPS)混合物刺激Caco-2細(xì)胞產(chǎn)生明顯的胞內(nèi)炎癥反應(yīng)； (3) BAHD1在小鼠與人的結(jié)腸上皮細(xì)胞中普遍表達(dá),且與健康結(jié)腸組織比較,UC病人及DSS造模小鼠的結(jié)腸中BAHD1表達(dá)下降； (4)敲低結(jié)腸上皮細(xì)胞BAHD1對(duì)細(xì)胞因子表達(dá)的影響：與模型對(duì)照組相比,siBAHD1組相關(guān)的細(xì)胞因子表達(dá)水平上升明顯。 (5)在炎癥介質(zhì)刺激下,經(jīng)典炎癥通路IKK/NF-κB、JNK/AP-1及Caspase-8在siBAHD1組激活更加明顯；TNFR1表達(dá)水平征siBAHD1組上升明顯。 (6)BAHD1通過(guò)調(diào)控TNFR1表達(dá)介導(dǎo)TNF信號(hào)通路。 結(jié)論： 轉(zhuǎn)錄譜印記分析預(yù)測(cè)分子BAHD1可能參與維持腸道細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài),其表達(dá)異�？赡茉赨C的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用： (1) BAHD1在體內(nèi)外模型及UC病人中表達(dá)下調(diào)； (2)BAHD1下調(diào)介導(dǎo)腸道細(xì)胞過(guò)度、持續(xù)性的免疫反應(yīng)； (3)BAHD1可能通過(guò)調(diào)控TNFR1的表達(dá)維持腸道細(xì)胞穩(wěn)態(tài)；

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R574.62
【目錄】：

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4 趙芯梅;潰瘍性結(jié)腸炎分子標(biāo)志物的篩查和發(fā)病機(jī)制的初步探討[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

5 王再見(jiàn);潰瘍性結(jié)腸炎緩解期腸易激樣癥狀的作用機(jī)制研究[D];四川大學(xué);2005年

6 陳宏輝;不同腸道益生菌株治療急性潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型的作用及其機(jī)制[D];中南大學(xué);2007年

7 樸恩姬;結(jié)腸靈治療潰瘍性結(jié)腸炎實(shí)驗(yàn)研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2001年

8 劉敬軍;中西醫(yī)結(jié)合灌腸治療潰瘍性結(jié)腸炎的臨床分析和實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2006年

9 柳越冬;潰瘍性結(jié)腸炎的臨床分期及綜合治療方案的研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2006年

10 陳曦;過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-γ在大鼠潰瘍性結(jié)腸炎中的動(dòng)態(tài)表達(dá)及中藥腸康顆粒的干預(yù)作用[D];吉林大學(xué);2008年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 席向陽(yáng);防風(fēng)對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎治療作用的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2009年

2 郭雁冰;中醫(yī)藥抗?jié)冃越Y(jié)腸炎復(fù)發(fā)的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2006年

3 李洋;姜樹(shù)民教授治療潰瘍性結(jié)腸炎經(jīng)驗(yàn)總結(jié)[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2011年

4 宮穎迪;中西醫(yī)結(jié)合治療潰瘍性結(jié)腸炎的薈萃分析[D];吉林大學(xué);2012年

5 吳登峰;福建省潰瘍性結(jié)腸炎住院病人病情分析[D];福建醫(yī)科大學(xué);2009年

6 周紅兵;焦慮和抑郁對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎的影響[D];中南大學(xué);2008年

7 金晶;氣藥灌腸法治療潰瘍性結(jié)腸炎對(duì)血清NO和腸道菌群的影響[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2009年

8 柳潔;自擬結(jié)腸靈治療潰瘍性結(jié)腸炎（脾腎虛弱型）的臨床研究[D];長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué);2010年

9 曹玲莉;131例潰瘍性結(jié)腸炎住院患者病情回顧性分析[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

10 張春陽(yáng);中藥口服結(jié)合灌腸治療大腸濕熱型潰瘍性結(jié)腸炎的臨床觀察[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：BAHD1在潰瘍性結(jié)腸炎中的作用及機(jī)制探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：220139