本文關(guān)鍵詞：二烯丙基二硫誘導(dǎo)大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6凋亡的作用及機(jī)制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《南華大學(xué)》 2015年

二烯丙基二硫誘導(dǎo)大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6凋亡的作用及機(jī)制

唐美英  

【摘要】：目的:觀察二烯丙基二硫(DADS)在體外對大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)凋亡的影響,并探討DADS是否通過抑制bcl-2、促進(jìn)bax的表達(dá)來誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,從而起抗肝纖維化作用。方法:1.分別用不同濃度的DADS(0、50、100、200、400、800μmol/L)處理HSC-T6細(xì)胞不同時(shí)間(24、48、72h)后,CCK-8法檢測DADS對細(xì)胞的增殖抑制作用,得出最適濃度范圍及作用時(shí)間,并根據(jù)此結(jié)果調(diào)整后續(xù)實(shí)驗(yàn)的藥物濃度及作用時(shí)間;2.光學(xué)倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)后,Hoechst33342染色法觀察細(xì)胞核凋亡形態(tài)學(xué)變化;3.流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期(PI單染法)和細(xì)胞凋亡率(Annexin-FITC/PI雙染法);4.分別用Western Blot及免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測不同濃度DADS對Bcl-2、Bax表達(dá)的影響。結(jié)果:1.DADS對HSC-T6體外增殖抑制作用明顯,呈濃度依賴性,并得出藥物作用48h后效果最佳,其IC50為292μmol/L,調(diào)整后續(xù)實(shí)驗(yàn)藥物濃度為0、150、300、600μmol/L;2.DADS能引起細(xì)胞學(xué)形態(tài)顯著變化。光學(xué)倒置顯微鏡下可見藥物組細(xì)胞貼壁不均勻,縮小呈類圓形,胞核固縮,部分細(xì)胞碎裂成片,且隨著濃度增加,形態(tài)改變更明顯;3.DADS能阻滯細(xì)胞周期于S期:隨藥物濃度的增加,G0/G1期、G2/M期細(xì)胞比例減少,而S期細(xì)胞比例明顯增加,提示細(xì)胞周期阻滯于S期;4.DADS能促進(jìn)細(xì)胞凋亡:①Hoechst33342染色后熒光顯微鏡下可見胞核呈凋亡形態(tài)學(xué)改變,表現(xiàn)為核固縮呈強(qiáng)藍(lán)色熒光致密團(tuán)塊、染色質(zhì)濃縮邊聚向核膜靠攏形成半月形、部分細(xì)胞發(fā)生核碎裂、凋亡小體形成等;②流式細(xì)胞術(shù)檢測到細(xì)胞凋亡率與DADS作用濃度呈正相關(guān);5.免疫細(xì)胞化學(xué)法與Western Blot法均證實(shí)藥物組Bcl-2較對照組表達(dá)減弱,而Bax表達(dá)增強(qiáng)。結(jié)論1.DADS能顯著抑制HSC-T6體外增殖;2.DADS可明顯誘導(dǎo)HSC-T6凋亡,其機(jī)制可能與減弱bcl-2、增強(qiáng)bax的蛋白表達(dá)相關(guān)。3.DADS可能通過抑制HSC-T6增殖與誘導(dǎo)其凋亡,從而起抗纖維化作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R575.2
【目錄】：

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