本文關(guān)鍵詞：HCN1在調(diào)控胃腸運(yùn)動(dòng)機(jī)制中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《第四軍醫(yī)大學(xué)》 2012年

HCN1在調(diào)控胃腸運(yùn)動(dòng)機(jī)制中的作用

章鵬宇  

【摘要】：胃腸運(yùn)動(dòng)受到腦-腸軸的影響。腦-腸軸由中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）、自主神經(jīng)和腸神經(jīng)系統(tǒng)(ENS)組成，參與調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)。胃腸平滑肌細(xì)胞（SMC）存在著節(jié)律性收縮，其特征是慢波（SW）。研究表明，ICCs（Cajal間質(zhì)細(xì)胞）是平滑肌慢波活動(dòng)的起搏細(xì)胞，ICCs根據(jù)其所在位置不同分為4種，其中位于環(huán)形肌和縱形肌之間的肌層間ICC（IC-MY）被證實(shí)是胃腸道產(chǎn)生節(jié)律性慢波的起搏細(xì)胞。抑制性自主神經(jīng)釋放抑制性神經(jīng)遞質(zhì)后，ICCs存在的一氧化氮合成酶（NOS）釋放NO，產(chǎn)生胃腸道運(yùn)動(dòng)的抑制作用。哺乳動(dòng)物獨(dú)具的離子通道--超極化激活環(huán)核苷酸門(mén)控陽(yáng)離子通道(HCN)具有內(nèi)在的超激化激活電流（Ih）活性，已證實(shí)HCN為慢波起搏通道，并且心臟起搏和神經(jīng)活動(dòng)依賴(lài)HCN的活性。HCN分為4個(gè)亞型，關(guān)于HCN1在胃腸的分布以及運(yùn)動(dòng)方面的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)室前期采用了超微結(jié)構(gòu)、免疫熒光雙標(biāo)方法，發(fā)現(xiàn)大鼠胃腸道ICCs上有自律性節(jié)律產(chǎn)生離子通道--超極化激活性環(huán)核苷酸門(mén)控陽(yáng)離子通道HCN1的特異分布；采用蛋白胚胎發(fā)育表達(dá)方法觀察到，在大鼠胃腸道產(chǎn)生穩(wěn)定胃腸蠕動(dòng)的關(guān)鍵時(shí)期表達(dá)升高，預(yù)示HCN1在ICC產(chǎn)生自發(fā)節(jié)律電活動(dòng)中的可能存在重要意義；在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步采用胃腸離體肌條，在給予HCN1特異性阻斷劑ZD7288阻斷HCN1的功能后，離體肌條的收縮顯著降低。故此證明，HCN1可能是胃腸動(dòng)力起搏的始發(fā)離子通道。臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，胃腸道缺血性改變可以明顯造成患者胃腸動(dòng)力障礙，那么其產(chǎn)生的機(jī)制是否與HCN1存在關(guān)系，目前未見(jiàn)明確報(bào)道�；诖�，本研究通過(guò)建立大鼠胃腸道缺血模型，采用雙重免疫熒光標(biāo)記方法，分別觀察實(shí)驗(yàn)組及正常參照組大鼠HCN1在胃腸道的表達(dá)變化以及與胃腸道運(yùn)動(dòng)相關(guān)遞質(zhì)的共存情況，并采用通道阻斷技術(shù)進(jìn)一步觀察HCN1在胃腸道缺血性改變過(guò)程中的作用和可能的機(jī)制，為治療胃腸動(dòng)力障礙疾病提供理論基礎(chǔ)。 方法 ①建立小腸缺血的動(dòng)物模型；②采用電生理學(xué)的方法，檢測(cè)模型大鼠的胃電以及小腸MMC的變化；③根據(jù)動(dòng)物模型建立的時(shí)間，找出胃電和小腸MMC變化的情況的規(guī)律。采用免疫熒光技術(shù)，同步觀察不同時(shí)段的模型動(dòng)物的小腸HCN1的變化情況，從中篩選出變化的典型時(shí)段，并對(duì)HCN1的表達(dá)與小腸MMC的變化做相關(guān)性分析；④以缺血?jiǎng)游锬Ｐ托∧c動(dòng)力變化的典型時(shí)段為基點(diǎn)，采用阻斷技術(shù)，給予HCN1的特異性阻斷劑ZD7288干預(yù)后，觀察缺血改變小腸的MMC的變化情況，進(jìn)一步驗(yàn)證HCN1的―始發(fā)‖離子通道的作用；⑤采用免疫熒光技術(shù)，對(duì)典型時(shí)段的小腸組織分別進(jìn)行HCN1與SP、CGRP免疫熒光雙標(biāo)記，從而驗(yàn)證HCN1與某些腦腸肽在胃腸道缺血改變中存在著遞質(zhì)共存。⑥對(duì)典型時(shí)段的模型動(dòng)物給予抑制性遞質(zhì)NO的干預(yù)，分別觀察SP、CGRP的表達(dá)以及組織和血漿中其水平的變化以及小腸MMC的變化。 結(jié)果 1.胃腸道缺血性改變可以導(dǎo)致胃腸動(dòng)力的變化。在不完全缺血的條件下，在缺血改變的初期胃腸動(dòng)力處于紊亂和減低的狀況，隨著缺血時(shí)間延長(zhǎng)，胃腸道的動(dòng)力逐漸改善。在本研究中我們觀察到，在小腸缺血的初期，胃電和小腸MMC均產(chǎn)生降低，并處于紊亂狀態(tài)。而到缺血性改變的第5天，胃電和小腸MMC均逐漸趨于平穩(wěn)狀態(tài)；到第7天，胃電和小腸MMC與正常組相接近。MMC與c-kit和HCN1的表達(dá)的相關(guān)性分析顯示：隨著胃腸道缺血性改變的時(shí)間的延長(zhǎng)，c-kit和HCN1的表達(dá)狀況呈現(xiàn)線(xiàn)性正相關(guān)關(guān)系，提示胃腸道缺血性改變可導(dǎo)致胃腸動(dòng)力變化，胃腸道動(dòng)力可隨著c-kit和HCN1的逐漸恢復(fù)而使因胃腸道缺血所導(dǎo)致的胃腸道動(dòng)力障礙得到改善。 2． HCN1存在于在胃腸黏膜和平滑肌間隙中,與c-kit雙標(biāo)記陽(yáng)性，在胃腸道缺血狀況下表達(dá)明顯增高。當(dāng)HCN1的功能被阻斷，因缺血性改變而導(dǎo)致的胃腸道動(dòng)力改變可因HCN1的動(dòng)力起搏作用被阻斷而顯著降低，進(jìn)一步證實(shí)了HCN1的始發(fā)離子通道的作用。并且HCN1與調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力相關(guān)的腦腸肽SP和CGRP存在遞質(zhì)共存，這種共存關(guān)系不因HCN1的功能阻斷而產(chǎn)生影響。故此，進(jìn)一步提示，SP和CGRP可能在HCN的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。 3.當(dāng)給予外源性抑制胃腸動(dòng)力的腦腸肽NO進(jìn)行干預(yù)后，HCN1的表達(dá)以及SP、CGRP水平均降低，由此提示，離子通道HCN1是受到興奮性遞質(zhì)和抑制性遞質(zhì)的共同作用來(lái)調(diào)節(jié)其發(fā)揮―始發(fā)‖離子通道的作用，而且，當(dāng)抑制性遞質(zhì)作用增強(qiáng)的情況下，胃腸運(yùn)動(dòng)將受到明顯抑制。 結(jié)論 HCN1存在于胃腸黏膜及平滑肌間隙，在腸缺血后，，隨著側(cè)枝循環(huán)的不斷建立，胃腸動(dòng)力的起搏起始通道HCN1的活性表達(dá)升高，同時(shí)神經(jīng)遞質(zhì)SP、CGRP也表達(dá)于小腸肌間神經(jīng)叢并代償性增高，在抑制性遞質(zhì)NO作用后上述指標(biāo)均降低，提示HCN1可能在調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)方面起著重要的作用，，同時(shí)HCN1接受興奮性和抑制性遞質(zhì)的調(diào)節(jié)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R57
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2 李先偉;CGRP在大鼠肺動(dòng)脈高壓血管重構(gòu)和博萊霉素誘導(dǎo)肺纖維化中的作用及機(jī)制[D];中南大學(xué);2012年

3 李焰;降鈣素基因相關(guān)肽對(duì)成骨細(xì)胞一氧化氮信號(hào)通路調(diào)控的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

4 王宇;骨組織內(nèi)降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）免疫陽(yáng)性神經(jīng)在骨重建過(guò)程中的作用[D];吉林大學(xué);2010年

5 黨紅星;降鈣素基因相關(guān)肽對(duì)高氧肺損傷的影響和Sonic hedgehog信號(hào)通路的相關(guān)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

6 張毅民;內(nèi)皮源性降鈣素基因相關(guān)肽合成與釋放調(diào)節(jié)機(jī)制及其病理生理意義[D];中南大學(xué);2010年

7 于金錄;重組表達(dá)NT4-CGRP腺相關(guān)病毒的構(gòu)建及對(duì)雞胚血管痙攣的治療作用研究[D];吉林大學(xué);2011年

8 岳維;急性心肌缺血早期降鈣素基因相關(guān)肽和神經(jīng)生長(zhǎng)因子的表達(dá)[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

9 孫振濤;降鈣素基因相關(guān)肽基因?qū)雽?duì)腦死亡大鼠的肺保護(hù)作用[D];鄭州大學(xué);2012年

10 張友燦;降鈣素基因相關(guān)肽刺激角質(zhì)形成細(xì)胞分泌趨化因子CCL27及其機(jī)制的相關(guān)研究[D];山東大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 章鵬宇;HCN1在調(diào)控胃腸運(yùn)動(dòng)機(jī)制中的作用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2012年

2 李忠新;CGRP及其受體拮抗劑對(duì)急性肝損傷小鼠肝臟微循環(huán)的干預(yù)和治療[D];山東大學(xué);2010年

3 張亞琴;內(nèi)源性CGRP在應(yīng)激性視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡中的作用及感覺(jué)神經(jīng)因素的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

4 曹瑩瑩;CGRP在初級(jí)感覺(jué)信息調(diào)制中的作用研究[D];石河子大學(xué);2009年

5 任麗潔;多疣壁虎α型降鈣素基因相關(guān)肽（α-CGRP）基因的克隆及其表達(dá)分析[D];南通大學(xué);2009年

6 郝媛媛;通腑湯對(duì)急性肺損傷大鼠肺、腸組織CGRP的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2010年

7 許兵;支配眼部三叉神經(jīng)神經(jīng)元CGRP表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2011年

8 劉婷;頭痛寧對(duì)電刺激三叉神經(jīng)節(jié)大鼠腦膜血流與CGRP的影響[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

9 周孝錢(qián);Caveolae/Caveolin-1參與CGRP對(duì)氧化損傷HUVECs的保護(hù)作用[D];南華大學(xué);2011年

10 吳夢(mèng);CGRP作用下的MG63蛋白質(zhì)差異表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：HCN1在調(diào)控胃腸運(yùn)動(dòng)機(jī)制中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：194222