本文選題：原發(fā)性膽汁性膽管炎 + B細胞�。� 參考：《南方醫(yī)科大學》2017年博士論文

【摘要】：背景原發(fā)性膽汁性膽管炎(primary biliary cholangitis,PBC)的血清學特點是存在高滴度和高特異性的的抗線粒體抗體(antimitochondrial antibodies,AMA),抗線粒體抗體的靶抗原位于丙酮酸脫氫酶復合體E2亞基的硫辛酰區(qū)�？咕�粒體抗體陽性是罹患PBC的征兆,目前普遍認為在PBC患者出現(xiàn)臨床癥狀或生化學檢查異常之前數(shù)年即可在血清中檢測到AMA。根據(jù)目前的檢測方法,超過95%的PBC患者AMA檢測陽性,而在普通人群中其陽性率較低,約為0.16%-1%。自身抗體在PBC中的致病和臨床意義尚不完全清楚。熊去氧膽酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)被批準用于PBC治療,UDCA治療1或2年后的血清堿性磷酸酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素和白蛋白水平可以預測無肝移植生存,而巴黎-Ⅰ標準具有很好的預測作用。雖然PBC患者不存在整體的免疫缺陷,但其B細胞功能紊亂,血清中存在大量免疫球蛋白M,且B細胞對胞嘧啶磷酸鳥甘的應答增強。B細胞免疫紊亂的機制尚不清楚。目的和意義本研究以尚未接受UDCA治療的橫向以及接受UDCA治療的縱向PBC患者為研究對象,分析B細胞免疫紊亂的特點,通過研究不同亞型AMA滴度的變化、B細胞亞群頻數(shù)、細胞因子微環(huán)境的作用及重要的輔助性T細胞的功能解析B細胞免疫紊亂在PBC病理機制中的作用,挖掘?qū)膊☆A測或治療具有重要價值的生物標志物,可對未來PBC的免疫治療提供新的線索。方法納入66例PBC患者,其中25例接受UDCA治療,并納入52例健康對照和41例慢性乙型病毒性肝炎患者作疾病對照。通過酶聯(lián)免疫吸附實驗(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測血清中 IgG-AMA、IgM-AMA和IgA-AMA滴度以及IL-4、IL-6、IL-10和IL-21、CXCL13等細胞因子水平,采用流式細胞術(shù)檢測CD19+B淋巴細胞亞群和CXCR5+CD4+T淋巴細胞頻數(shù),通過共培養(yǎng)實驗、胞內(nèi)因子染色和增殖實驗等分析B淋巴細胞和CXCR5+CD4+T淋巴細胞以及IL-21等細胞因子的功能,通過免疫組化染色檢測肝內(nèi)浸潤淋巴細胞的定位和IL-21、CXCL13的表達。將不同亞型AMA的滴度、淋巴細胞頻數(shù)和細胞因子水平與UDCA應答和血清堿性磷酸酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素水平進行相關(guān)性分析。結(jié)果對UDCA治療產(chǎn)生生化學應答的患者血清IgG-AMA滴度顯著下降(P=0.005)。與健康對照相比,PBC患者外周血總CD19+B細胞和漿母細胞的頻數(shù)顯著升高(P=0.001;P=0.001)。PBC患者血清和肝內(nèi)IL-21表達均增多(P0.001;P0.001),其能顯著促進B細胞增殖、STAT3磷酸化和AMA產(chǎn)生。值得注意的是,在重組線粒體抗原PDC-E2刺激下,PBC患者外周血中擴增和活化的CXCR5+CD4+T細胞能分泌大量IL-21(P=0.001),而分選的CXCR5+CD4+T細胞與自身CD19+B細胞共培養(yǎng)能促進B細胞分泌AMA。另外,發(fā)現(xiàn)CXCR5+細胞的趨化因子CXCL13在PBC患者肝內(nèi)匯管區(qū)周圍表達增多,同時伴有CD4+、CXCR5+、CD19+和CD38+細胞浸潤。結(jié)論趨化因子CXCL13促進CD19+B細胞和CXCR5+CD4+T細胞在PBC患者肝內(nèi)聚集,CXCR5+CD4+T細胞通過分泌IL-21促進CD19+B細胞分泌大量的AMA。本研究的發(fā)現(xiàn)反映了 PBC患者體液免疫紊亂的特點,也有助于開發(fā)潛在的治療策略。
[Abstract]:Background the serological characteristics of primary biliary cholangitis (PBC) are anti mitochondrial antibodies (antimitochondrial antibodies, AMA) with high titer and high specificity. The target antigen of anti mitochondrial antibody lies in the sulfonyl region of the pyruvate dehydrogenase complex E2 subunit. The anti mitochondrial antibody positive is PBC. The symptoms of AMA. are generally believed to be detected in serum for several years before PBC patients have clinical symptoms or abnormal chemical tests. According to the current detection methods, more than 95% of PBC patients are positive for AMA detection, while the positive rate is low in the general population, which is about the pathogenicity and clinical significance of 0.16%-1%. autoantibodies in PBC. It is clear that ursodeoxycholic acid (UDCA) is approved for PBC treatment. Serum alkaline phosphatase (ALP), gluten transaminase, bilirubin and albumin levels can predict no liver transplantation for 1 or 2 years after UDCA treatment, while the Paris - I standard has good predictive use. Although PBC patients do not have overall immune deficiency, but their B Cell dysfunction, a large number of immunoglobulin M exists in serum, and the mechanism of B cell response to cytosine phosphate Gump response to.B cell immune disorders is unclear. Purpose and significance of this study was to analyze the characteristics of B cell immune disorders in horizontal and longitudinal PBC patients who had not yet received UDCA treatment and received UDCA treatment. By studying the changes in the AMA titer of different subtypes, the frequency of the subsets of B cells, the role of the cytokine microenvironment and the function of the important auxiliary T cells, the role of the B cell immune disorder in the pathological mechanism of PBC is analyzed, and the biomarkers of important value for the prediction or treatment of the disease can be found, which can provide a new line for the immunotherapy of the future PBC. The method was included in 66 patients with PBC, of which 25 were treated with UDCA, and 52 healthy controls and 41 patients with chronic hepatitis B were treated as disease control. The serum IgG-AMA, IgM-AMA, IgA-AMA titer and IL-4, IL-6, IL-10, etc. were detected by enzyme linked immunosorbent assay (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA). CD19+B lymphocyte subsets and CXCR5+CD4+T lymphocyte frequency were detected by flow cytometry, and the function of B lymphocyte and CXCR5+CD4+T lymphocyte and IL-21 and other cytokines were analyzed by co culture experiment, intracellular factor staining and proliferation test. Immunocytochemical staining was used to detect infiltrating lymphocytes in the liver. Location and expression of IL-21, CXCL13. Correlation analysis of the titer, lymphocyte frequency and cytokine level of different subtypes of AMA with UDCA response and serum alkaline phosphatase, glutamic aminotransferase, bilirubin level. Results the serum IgG-AMA titer of patients with biochemical responses to UDCA decreased significantly (P=0.005). The frequency of total CD19+B cells and plasma mother cells in peripheral blood of PBC patients increased significantly (P=0.001; P=0.001), the expression of IL-21 in serum and liver increased (P0.001; P0.001) in.PBC patients, which could significantly promote B cell proliferation, STAT3 phosphorylation and AMA production. The activated CXCR5+CD4+T cells can secrete a large number of IL-21 (P=0.001), and the co culture of the selected CXCR5+CD4+T cells and their own CD19+B cells can promote the secretion of AMA. in B cells. It is found that the chemokine CXCL13 in CXCR5+ cells is increased around the intrahepatic sinks of the PBC patients, accompanied by CD4+, CXCR5+, and infiltration. SubCXCL13 promotes the aggregation of CD19+B cells and CXCR5+CD4+T cells in the liver of PBC patients. The discovery of CXCR5+CD4+T cells to secrete a large number of AMA. based on the secretion of IL-21 through the secretion of IL-21 reflects the characteristics of the humoral immunity disorder of the PBC patients, and also helps to develop potential therapeutic strategies.
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R575.2

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本文編號：1923154