發(fā)布時(shí)間：2016-11-23 07:06

  本文關(guān)鍵詞：扶正化瘀方對(duì)肝星形細(xì)胞和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中南大學(xué)》 2012年

扶正化瘀方對(duì)肝星形細(xì)胞和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究

余燕青  

【摘要】：背景：我國(guó)是肝病大國(guó),慢性乙型肝炎患者數(shù)量占全世界的三分之一,慢性乙肝所引起的肝硬化甚至肝癌嚴(yán)重威脅患者的健康。纖維化是慢性肝病一個(gè)共同的病理過(guò)程,具有可逆性,我們可以通過(guò)研究肝纖維化的發(fā)生機(jī)制,尋求有效的藥物阻止肝纖維化的進(jìn)展,從而減緩慢性肝病發(fā)展為肝硬化的進(jìn)程。 肝纖維化的研究較多,普遍肝星形細(xì)胞(hepatic stellate cell, HSC)活化是肝纖維化的中心事件,活化后的HSC產(chǎn)生大量的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM),而基質(zhì)金屬蛋白酶分泌不足及其抑制劑分泌過(guò)多,過(guò)多的細(xì)胞外基質(zhì)沉積在肝臟而形成的一個(gè)病理過(guò)程。早期HSC的活化主要是由肝中kupffer細(xì)胞、肝竇內(nèi)皮細(xì)胞、血小板等分泌各種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子引起,后期的持續(xù)活化則主要是由活化的HSC自分泌各種生長(zhǎng)因子維持,活化后的HSC源源不斷地產(chǎn)生ECM,促進(jìn)纖維化的進(jìn)一步發(fā)展,其中重要的生長(zhǎng)因子有轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor beta, TGF-β1、血小板源性生長(zhǎng)因子(Platelet-derived growth factor, PDGF)和結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor, CTGF)等。 在肝纖維化中,肝竇內(nèi)皮細(xì)胞(liver sinusoidal endothelial cell,SEC)的作用也受到越來(lái)越多的重視。SEC是肝竇壁的主要細(xì)胞成分,SEC是一種特殊的血管內(nèi)皮細(xì)胞,形態(tài)與功能都與普通的血管內(nèi)皮細(xì)胞有較大的差別,首先SEC胞質(zhì)上有排列成篩狀的窗孔結(jié)構(gòu),有利于肝細(xì)胞和血竇中各種成分進(jìn)行交換。其次肝竇是一種不連續(xù)的毛細(xì)血管,內(nèi)皮下沒(méi)有基底膜的存在,僅有少量纖維結(jié)締組織,SEC也不表達(dá)普通血管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志物,它有自身獨(dú)特的標(biāo)志物如CD4和CD14等。肝纖維化時(shí),肝竇內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生毛細(xì)血管化,即失去窗孔結(jié)構(gòu),并有內(nèi)皮下連續(xù)性基底膜的形成,此時(shí)表型也發(fā)生較大的改變,失去自身的標(biāo)志物并開始表達(dá)普通血管內(nèi)皮的標(biāo)志物,如第Ⅷ因子相關(guān)抗原(Von Willebrand factor, vWF)、CD31和CD34等。 目前,肝纖維化沒(méi)有特效的治療藥物,我國(guó)中藥及其復(fù)方因副作用小、多途徑、多靶點(diǎn)作用等特點(diǎn),在肝纖維化治療中取得了較好的效果。扶正化瘀方(又稱319方)由丹參、蟲草菌絲、桃仁、絞股藍(lán)、五味子、松花粉組成,針對(duì)肝纖維化“瘀血阻絡(luò)、正氣虛弱”的基本中醫(yī)病因研制而成,有研究表明其具有保護(hù)肝細(xì)胞、抗脂質(zhì)過(guò)氧化、抑制促肝纖維化細(xì)胞因子生成、抑制肝星形細(xì)胞增殖活化和膠原生成等作用。本實(shí)驗(yàn)以肝星形細(xì)胞和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞為出發(fā)點(diǎn),研究扶正化瘀方抗肝纖維化的作用機(jī)制,為其臨床應(yīng)用提供進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。IFN-γ和β-雌激素是研究較多的抗纖維化藥物,研究表明均具有良好的抗纖維化作用,本實(shí)驗(yàn)γ-干擾素和β-雌二醇作為陽(yáng)性對(duì)照藥物。 目的：探討扶正化瘀方對(duì)肝星形細(xì)胞和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響,從細(xì)胞水平證實(shí)扶正化瘀方的抗纖維化作用。 方法：扶正化瘀方藥物粉末以0.46g/10ml的容積配制成懸液,以0.46g/kg大鼠體重的劑量灌胃SD大鼠,采取二次重復(fù)給藥方式,即第一次灌胃2小時(shí)后再次灌胃,第二次灌胃后1小時(shí)心臟采血,并離心全血提取藥物血清,對(duì)照組是在相同條件下灌胃三蒸水并提取對(duì)照組血清,將兩組血清以10%的濃度分別配制成的扶正化瘀方藥物組培基(簡(jiǎn)稱319組)和對(duì)照組培基。同時(shí)在對(duì)照組培基中分別加入γ-干擾素、β-雌二醇作為陽(yáng)性對(duì)照藥物培基,四組培基分別作用于HSC和SEC48小時(shí),用下列方法檢測(cè)藥物對(duì)兩種細(xì)胞的影響：1.免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)HSC表達(dá)a-SMA、Desmin的情況；2.Western blot方法檢測(cè)HSC表達(dá)a-SMA、Desmin. TGF-β1, CTGF蛋白的情況；3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HSC的增殖活性；4.免疫細(xì)胞化學(xué)和Western blot方法共同檢測(cè)SEC vWF、CD31的表達(dá)情況；5.掃描電鏡觀察SEC表面窗孔結(jié)構(gòu)的改變。 結(jié)果：1.免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示319組HSC表達(dá)a-SMA、Desmin均較對(duì)照組明顯下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而319組、γ-干擾素組和β-雌二醇組組間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；2.Western blot結(jié)果顯示319組HSC α-SMA、 desmin、 TGF-β1、 CTGF蛋白的表達(dá)均較對(duì)照組明顯下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而319組、γ-干擾素組和β-雌二醇組組間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；3.流式細(xì)胞術(shù)顯示319組HSC增殖活力較對(duì)照組降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而319組、γ-干擾素組和β-雌二醇組組間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；4.免疫細(xì)胞化學(xué)和Western blot結(jié)果顯示319組SEC vWF、CD31蛋白的表達(dá)均較對(duì)照組表達(dá)下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而319組、γ-干擾素組及β-雌二醇組組間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；5.掃描電鏡顯示對(duì)照組SEC大部分窗孔處于閉塞甚至消失狀態(tài),而經(jīng)扶正化瘀方治療后SEC表面窗孔的明顯增多。 結(jié)論：1.扶正化瘀方可以下調(diào)活化的肝星形細(xì)胞a-SMA、 Desmin、 CTGF、 TGF-β1的表達(dá)和降低其增殖活性。2.扶正化瘀方可以下調(diào)肝竇內(nèi)皮細(xì)胞vWF、CD31的表達(dá),及增加細(xì)胞表面的窗孔結(jié)構(gòu),從而逆轉(zhuǎn)肝竇的毛細(xì)血管化。3.扶正化瘀方可能是通過(guò)下調(diào)HSC分泌ECM和抑制HSC增殖及逆轉(zhuǎn)肝竇的毛細(xì)血管化發(fā)揮抗纖維化作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R285.5;R575
【目錄】：

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【參考文獻(xiàn)】

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4 王曉玲,劉平,劉成海,劉成,顧宏圖;含藥血清藥理法觀察扶正化瘀方抗肝纖維化的配伍作用[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;1999年06期

5 劉成,劉平,劉成海,朱秀琴,季光;扶正化瘀方對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞、肝細(xì)胞、成纖維細(xì)胞膠原合成的影響[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合脾胃雜志;1998年01期

6 季光,曹承樓,劉平,胡義揚(yáng),劉成;扶正化瘀方影響肝硬化大鼠肝細(xì)胞增殖的病理及免疫組化研究[J];中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志;2001年02期

7 姜春萌,劉成,劉成海,胡義揚(yáng);扶正化瘀方對(duì)大鼠CCl_4損傷肝Kupffer細(xì)胞功能的影響[J];中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志;2000年05期

8 季光,劉平,劉成,徐列明,洪嘉禾;扶正化瘀方藥物血清對(duì)原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞增殖及膠原生成率的影響[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;1997年03期

9 朱秀琴,劉成,劉平,徐列明,張學(xué)軍;扶正化瘀方對(duì)3T3細(xì)胞增殖和膠原生成的影響[J];中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志;1998年S1期

10 劉成海,劉成,劉平,徐列明;扶正化瘀方對(duì)大鼠肝貯脂細(xì)胞增殖的影響[J];中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志;1996年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 沈丹萍;王清蘭;沈麗;閆秀川;楊莉;劉成海;;扶正化瘀方中丹參水溶性入血成分分析及其對(duì)肝細(xì)胞凋亡與星狀細(xì)胞增殖的影響[A];第二十二屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議暨消化疾病診治進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2010年

2 呂靖;劉成海;;扶正化瘀方抑制血管新生的抗肝纖維化作用機(jī)制[A];第二十次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

3 王清蘭;呂靖;陶艷艷;閆秀川;李俊霞;劉成海;;扶正化瘀方調(diào)節(jié)差異microRNAs表達(dá)的抗肝纖維化作用機(jī)制研究[A];第三屆江浙滬中西醫(yī)結(jié)合高峰論壇論文匯編[C];2011年

4 崔紅燕;姜哲浩;劉成;劉成海;;扶正化瘀方對(duì)肝纖維化大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶活性的影響[A];第十二次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2003年

5 崔紅燕;姜哲浩;劉成;劉成海;;扶正化瘀方對(duì)肝纖維化大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶活性的影響[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2003年

6 潘傳芳;劉成海;;扶正化瘀方對(duì)瘦素促大鼠星狀細(xì)胞活化、胞內(nèi)信號(hào)分子活化的影響[A];第二十次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議暨消化疾病診治進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2008年

7 陳倩;呂靖;王清蘭;陳園;彭淵;陶艷艷;劉成海;;扶正化瘀方對(duì)纖維化大鼠血管生成的影響[A];第十八次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

8 劉成海;劉平;劉成;胡義揚(yáng);徐列明;;扶正化瘀方抗肝纖維化的作用機(jī)制研究[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2003年

9 劉鶯;劉平;劉成海;徐列明;陳云飛;胡義楊;劉成;都廣禮;王兵;慕永平;;大鼠肝纖維化組織蛋白質(zhì)組表達(dá)改變及扶正化瘀方的調(diào)節(jié)作用[A];中國(guó)蛋白質(zhì)組學(xué)首屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2003年

10 劉成;姜春萌;劉平;;扶正化瘀方對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞旁分泌活化途徑的抑制作用[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)第十三次全國(guó)消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2001年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 ;[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2005年

2 賀用和;[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

3 程書權(quán);[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2004年

4 特約記者 郝成濤;[N];解放軍報(bào);2009年

5 ;[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

6 張建中 宋國(guó)梵;[N];健康報(bào);2005年

7 程書權(quán) 姜黃素;[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2004年

8 王姿英;[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

9 ;[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2005年

10 本報(bào)記者蒲晶整理;[N];烏魯木齊晚報(bào);2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉杰;肝硬化模型比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究及扶正化瘀方對(duì)血漿蛋白質(zhì)組影響[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

2 常翠芳;大鼠再生肝中星形細(xì)胞的基因表達(dá)譜分析[D];新疆大學(xué);2011年

3 侯玉芳;小鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)譜的構(gòu)建[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

4 王桂琴;核心蛋白聚糖DECORIN在肝纖維化形成機(jī)制中的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2000年

5 常實(shí);同種異體肝細(xì)胞移植對(duì)大鼠肝臟纖維化的影響[D];中南大學(xué);2007年

6 陳曉光;大鼠肝再生中基因組范圍內(nèi)的竇內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)錄譜動(dòng)態(tài)分析[D];新疆大學(xué);2011年

7 李怡;C型凝集素LSECtin作為丙型肝炎病毒受體的系統(tǒng)分析[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2006年

8 董曉靈;VEGF對(duì)大鼠肝部分移植術(shù)后肝功能及肝臟再生的影響[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

9 王洪超;肝臟缺血再灌注損傷機(jī)制的探討及丹參單體保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2002年

10 趙利峰;肝臟細(xì)胞生長(zhǎng)相關(guān)基因在大鼠肝再生中表達(dá)模式和作用分析[D];中國(guó)海洋大學(xué);2008年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 余燕青;扶正化瘀方對(duì)肝星形細(xì)胞和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2012年

2 沈丹萍;抗肝纖維化中藥扶正化瘀方體內(nèi)效應(yīng)成分研究[D];華東理工大學(xué);2011年

3 桑賢良;扶正化瘀方抗肝纖維化作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

4 鄭艷麗;IGF-1在大鼠肝纖維化過(guò)程中的動(dòng)態(tài)變化及扶正化瘀方對(duì)肝纖維化的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

5 張永晶;肝星形細(xì)胞的生長(zhǎng)因子信號(hào)通路相關(guān)基因與大鼠肝再生的相關(guān)性研究[D];河南師范大學(xué);2010年

6 趙海軍;復(fù)方鱉甲軟肝方藥物血清干預(yù)肝竇內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)肝星形細(xì)胞增殖和活化影響的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2006年

7 孟明輝;JAK/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在肝纖維化發(fā)病機(jī)制中作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

8 張瑋;復(fù)方鱉甲軟肝方藥物血清對(duì)大鼠離體肝星形細(xì)胞作用機(jī)理研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2003年

9 于海霞;腸源性內(nèi)毒素血癥與肝星形細(xì)胞在肝纖維化發(fā)生中的作用[D];山西醫(yī)科大學(xué);2005年

10 張莎莎;單細(xì)胞水平黃芪多糖對(duì)肝竇內(nèi)皮細(xì)胞微區(qū)力學(xué)影響的研究[D];中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院;2012年

  本文關(guān)鍵詞：扶正化瘀方對(duì)肝星形細(xì)胞和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：187711