本文關(guān)鍵詞：潰瘍性結(jié)腸炎患者結(jié)腸黏膜ARE結(jié)合活性與HO-1表達的變化，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《河北醫(yī)科大學》 2015年

潰瘍性結(jié)腸炎患者結(jié)腸黏膜ARE結(jié)合活性與HO-1表達的變化

張蕊  

【摘要】：潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)是一種病因尚不十分清楚、以結(jié)腸黏膜連續(xù)性、彌漫性炎癥改變?yōu)橹饕攸c的慢性非特異性炎癥性疾病。其主要臨床癥狀為持續(xù)或反復發(fā)作的腹痛、腹瀉、黏液膿血便、里急后重等,病變主要侵犯遠端結(jié)腸及直腸,并向近端結(jié)腸擴展,甚至累及整個結(jié)腸。近十余年來隨著人們生活方式及飲食結(jié)構(gòu)的改變,大量臨床研究資料表明該病的發(fā)病率呈上升趨勢。由于UC病因和發(fā)病機制尚不十分明確,病理生理機制復雜,臨床上治愈率低,被WHO認定為最難診治的疾病之一。近年來研究發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激(Oxidative Stress)與UC的發(fā)生有密切關(guān)系,氧化應(yīng)激引起的氧自由基的過量表達及脂質(zhì)過氧化在疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。另外研究發(fā)現(xiàn)免疫紊亂也是UC發(fā)生發(fā)展機制中的重要因素。Keap1/Nrf2/ARE路徑是迄今研究發(fā)現(xiàn)的最重要的自身抗氧化應(yīng)激反應(yīng)通路之一,在全身多個系統(tǒng)疾病的發(fā)病機制方面均起重要作用,參與人體抗腫瘤、抗細胞凋亡、抗炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)心腦血管反應(yīng)、抗動脈粥樣硬化等。Nrf2(NF-E2 related factor 2)屬于CNC(cap'n'collar)轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一,廣泛存在于機體多個組織器官中,Kelch樣環(huán)氧氯丙烷結(jié)合蛋白1(Kelch-like epichlorohydrin associating protein 1,Keap 1)是Nrf2的重要受體,生理狀態(tài)下,Nrf2位于細胞質(zhì)中,與Keap l結(jié)合,處于被抑制狀態(tài),當受到氧化應(yīng)激信號刺激后,Nrf2迅速與變構(gòu)的Keap1解耦連,以穩(wěn)定狀態(tài)轉(zhuǎn)位進入細胞核,與小Maf蛋白結(jié)合形成異二聚物,并與一順式作用元件即抗氧化反應(yīng)元件(antioxidant response element,ARE)結(jié)合,結(jié)合ARE上的GCTGAGTCA位點,參與下游一系列Ⅱ相解毒酶及抗氧化酶基因的轉(zhuǎn)錄與調(diào)控。ARE是一個特異的DNA啟動子結(jié)合序列,位于所調(diào)控的抗氧化酶基因和Ⅱ相解毒酶基因的5’端啟動序列。1991年Rushmore等證實,ARE轉(zhuǎn)錄所必須的一段基因序列是TGACnnn GC。隨后的研究又發(fā)現(xiàn)了一系列抗氧化應(yīng)激基因,在它們的啟動子區(qū)域有以上相同的一段序列,并且都可以結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子Nrf2。越來越多的研究表明,ARE對包括Ⅱ相酶在內(nèi)的許多抗氧化基因誘導和轉(zhuǎn)錄起到極其重要的作用。ARE驅(qū)動的靶基因包括谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-glutamyl cysteine synthetase,γ-GCS),谷胱甘肽-s-轉(zhuǎn)移酶(GST),苯鯤還原酶1(NQO1),UDP-葡萄糖苷酸轉(zhuǎn)移酶(UDP-glucuronosyltransferases,UGT),血紅素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)等。這些蛋白的表白均能有效的阻止自由基的產(chǎn)生,從而起到抗氧化應(yīng)激的作用。HO-1是抗氧化應(yīng)激反應(yīng)中極其重要的Ⅱ相解毒酶,HO是血紅素分解代謝的起始酶和限速酶,可以將血紅素分解產(chǎn)生為等摩爾量的膽綠素(biliverdin,BV)、游離鐵(Fe2+)和一氧化碳(carbon monoxide,CO),在哺乳動物中膽綠素隨之被膽綠素還原酶轉(zhuǎn)化為膽紅素(bilirubin,BR),Fe2+可以誘導體內(nèi)鐵蛋白的生成。HO有三個同工酶:HO-1、HO-2、HO-3。HO-1的表達可有效對抗機體氧化應(yīng)激、炎癥、缺血/再灌注損傷、細胞凋亡、移植排斥反應(yīng)等病理狀態(tài),在多種疾病中均起到抗氧化應(yīng)激的保護作用。多項研究發(fā)現(xiàn),Nrf2與炎癥性疾病關(guān)系密切,參與炎癥的發(fā)生發(fā)展。在炎癥性腸病尤其是潰瘍性結(jié)腸炎的研究中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)Nrf2在UC患者的結(jié)腸黏膜組織中高表達,且Nrf2與UC的嚴重程度呈正相關(guān)。目前尚無對UC中ARE及HO-1的研究,我們將就UC患者中ARE的結(jié)合活性及HO-1的表達與UC患者病情的嚴重程度進行進一步研究。目的:檢測UC患者結(jié)腸黏膜中ARE的結(jié)合活性及HO-1表達的變化,分析ARE、HO-1分別與UC病情嚴重程度的相關(guān)性。方法:本實驗共收集臨床確診為潰瘍性結(jié)腸炎活動期患者42例作為病例組,結(jié)腸息肉患者25例作為對照組,結(jié)腸鏡下活檢直-乙交界處結(jié)腸黏膜組織4塊。按照Sutherland DAI評分標準對UC患者進行評分后進行分組(對照組25例=A組,輕中度組22例=B組、重度組20例=C組),采用凝膠電泳遷移率分析實驗方法(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA法)檢測結(jié)腸粘膜組織中ARE的結(jié)合活性,免疫組織化學方法檢測結(jié)腸粘膜組織中HO-1的表達。結(jié)果:1依據(jù)Sutherland DAI評分、UC病情活動度Truelove和Witts分級,將UC患者分為輕度、中度、重度3組,3個組的評分均數(shù)依次為4.8±0.2分、8.6±0.7分、11.5±0.4分。入選患者的臨床資料見Table1。2 HE染色結(jié)果:細胞核呈紫藍色,細胞漿、基底膜及膠原纖維呈粉紅色。正常對照組結(jié)腸黏膜上皮結(jié)構(gòu)完整,可見少量炎性細胞浸潤,腺體細胞排列整齊,杯狀細胞較多;UC組黏膜可見大量炎性細胞如嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、淋巴細胞、巨噬細胞等浸潤,隱窩結(jié)構(gòu)紊亂,隱窩內(nèi)、隱窩上皮均可見炎性細胞浸潤,黏膜上皮杯狀細胞減少,偶可見潘氏細胞化生,重度者出現(xiàn)黏膜上皮缺失、脫落。3結(jié)腸黏膜組織中ARE結(jié)合活性的檢測結(jié)果UC組結(jié)腸組織中ARE的結(jié)合活性均高于正常對照組,各組ARE結(jié)合活性程度依次為:重度活動組輕中度活動組對照組。任意兩組間相比,差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。4結(jié)腸粘膜組織中HO-1的檢測結(jié)果結(jié)腸黏膜HO-1免疫組化顯示HO-1在正常粘膜較少表達,主要位于細胞漿中,而UC組HO-1表達明顯增多,細胞核、胞漿中均有表達;各組HO-1表達水平:重度活動組輕中度活動組對照組,任意兩組間相比差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。5相關(guān)性分析UC患者中ARE結(jié)合活性的變化與HO-1表達的變化呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)為0.946,P0.01,具有顯著統(tǒng)計學意義。結(jié)論:隨著潰瘍性結(jié)腸炎患者病情嚴重程度的進一步加強,結(jié)腸黏膜組織中ARE的結(jié)合活性不斷增強,免疫組織化學方法檢測HO-1的表達也不斷增加,ARE與HO-1的關(guān)系呈正相關(guān),ARE的結(jié)合活性及HO-1的表達強度在一定程度上可以反映UC的病情嚴重程度,UC的發(fā)病機制與Keap1/Nrf2/ARE/HO-1信號通路有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R574.62
【目錄】：

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