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  本文關(guān)鍵詞：潰瘍性結(jié)腸炎患者結(jié)腸黏膜ARE結(jié)合活性與HO-1表達(dá)的變化，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《河北醫(yī)科大學(xué)》 2015年

潰瘍性結(jié)腸炎患者結(jié)腸黏膜ARE結(jié)合活性與HO-1表達(dá)的變化

張蕊  

【摘要】：潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)是一種病因尚不十分清楚、以結(jié)腸黏膜連續(xù)性、彌漫性炎癥改變?yōu)橹饕攸c(diǎn)的慢性非特異性炎癥性疾病。其主要臨床癥狀為持續(xù)或反復(fù)發(fā)作的腹痛、腹瀉、黏液膿血便、里急后重等,病變主要侵犯遠(yuǎn)端結(jié)腸及直腸,并向近端結(jié)腸擴(kuò)展,甚至累及整個(gè)結(jié)腸。近十余年來隨著人們生活方式及飲食結(jié)構(gòu)的改變,大量臨床研究資料表明該病的發(fā)病率呈上升趨勢。由于UC病因和發(fā)病機(jī)制尚不十分明確,病理生理機(jī)制復(fù)雜,臨床上治愈率低,被WHO認(rèn)定為最難診治的疾病之一。近年來研究發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激(Oxidative Stress)與UC的發(fā)生有密切關(guān)系,氧化應(yīng)激引起的氧自由基的過量表達(dá)及脂質(zhì)過氧化在疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。另外研究發(fā)現(xiàn)免疫紊亂也是UC發(fā)生發(fā)展機(jī)制中的重要因素。Keap1/Nrf2/ARE路徑是迄今研究發(fā)現(xiàn)的最重要的自身抗氧化應(yīng)激反應(yīng)通路之一,在全身多個(gè)系統(tǒng)疾病的發(fā)病機(jī)制方面均起重要作用,參與人體抗腫瘤、抗細(xì)胞凋亡、抗炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)心腦血管反應(yīng)、抗動脈粥樣硬化等。Nrf2(NF-E2 related factor 2)屬于CNC(cap'n'collar)轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一,廣泛存在于機(jī)體多個(gè)組織器官中,Kelch樣環(huán)氧氯丙烷結(jié)合蛋白1(Kelch-like epichlorohydrin associating protein 1,Keap 1)是Nrf2的重要受體,生理狀態(tài)下,Nrf2位于細(xì)胞質(zhì)中,與Keap l結(jié)合,處于被抑制狀態(tài),當(dāng)受到氧化應(yīng)激信號刺激后,Nrf2迅速與變構(gòu)的Keap1解耦連,以穩(wěn)定狀態(tài)轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞核,與小Maf蛋白結(jié)合形成異二聚物,并與一順式作用元件即抗氧化反應(yīng)元件(antioxidant response element,ARE)結(jié)合,結(jié)合ARE上的GCTGAGTCA位點(diǎn),參與下游一系列Ⅱ相解毒酶及抗氧化酶基因的轉(zhuǎn)錄與調(diào)控。ARE是一個(gè)特異的DNA啟動子結(jié)合序列,位于所調(diào)控的抗氧化酶基因和Ⅱ相解毒酶基因的5’端啟動序列。1991年Rushmore等證實(shí),ARE轉(zhuǎn)錄所必須的一段基因序列是TGACnnn GC。隨后的研究又發(fā)現(xiàn)了一系列抗氧化應(yīng)激基因,在它們的啟動子區(qū)域有以上相同的一段序列,并且都可以結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子Nrf2。越來越多的研究表明,ARE對包括Ⅱ相酶在內(nèi)的許多抗氧化基因誘導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄起到極其重要的作用。ARE驅(qū)動的靶基因包括谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-glutamyl cysteine synthetase,γ-GCS),谷胱甘肽-s-轉(zhuǎn)移酶(GST),苯鯤還原酶1(NQO1),UDP-葡萄糖苷酸轉(zhuǎn)移酶(UDP-glucuronosyltransferases,UGT),血紅素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)等。這些蛋白的表白均能有效的阻止自由基的產(chǎn)生,從而起到抗氧化應(yīng)激的作用。HO-1是抗氧化應(yīng)激反應(yīng)中極其重要的Ⅱ相解毒酶,HO是血紅素分解代謝的起始酶和限速酶,可以將血紅素分解產(chǎn)生為等摩爾量的膽綠素(biliverdin,BV)、游離鐵(Fe2+)和一氧化碳(carbon monoxide,CO),在哺乳動物中膽綠素隨之被膽綠素還原酶轉(zhuǎn)化為膽紅素(bilirubin,BR),Fe2+可以誘導(dǎo)體內(nèi)鐵蛋白的生成。HO有三個(gè)同工酶:HO-1、HO-2、HO-3。HO-1的表達(dá)可有效對抗機(jī)體氧化應(yīng)激、炎癥、缺血/再灌注損傷、細(xì)胞凋亡、移植排斥反應(yīng)等病理狀態(tài),在多種疾病中均起到抗氧化應(yīng)激的保護(hù)作用。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn),Nrf2與炎癥性疾病關(guān)系密切,參與炎癥的發(fā)生發(fā)展。在炎癥性腸病尤其是潰瘍性結(jié)腸炎的研究中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)Nrf2在UC患者的結(jié)腸黏膜組織中高表達(dá),且Nrf2與UC的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。目前尚無對UC中ARE及HO-1的研究,我們將就UC患者中ARE的結(jié)合活性及HO-1的表達(dá)與UC患者病情的嚴(yán)重程度進(jìn)行進(jìn)一步研究。目的:檢測UC患者結(jié)腸黏膜中ARE的結(jié)合活性及HO-1表達(dá)的變化,分析ARE、HO-1分別與UC病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性。方法:本實(shí)驗(yàn)共收集臨床確診為潰瘍性結(jié)腸炎活動期患者42例作為病例組,結(jié)腸息肉患者25例作為對照組,結(jié)腸鏡下活檢直-乙交界處結(jié)腸黏膜組織4塊。按照Sutherland DAI評分標(biāo)準(zhǔn)對UC患者進(jìn)行評分后進(jìn)行分組(對照組25例=A組,輕中度組22例=B組、重度組20例=C組),采用凝膠電泳遷移率分析實(shí)驗(yàn)方法(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA法)檢測結(jié)腸粘膜組織中ARE的結(jié)合活性,免疫組織化學(xué)方法檢測結(jié)腸粘膜組織中HO-1的表達(dá)。結(jié)果:1依據(jù)Sutherland DAI評分、UC病情活動度Truelove和Witts分級,將UC患者分為輕度、中度、重度3組,3個(gè)組的評分均數(shù)依次為4.8±0.2分、8.6±0.7分、11.5±0.4分。入選患者的臨床資料見Table1。2 HE染色結(jié)果:細(xì)胞核呈紫藍(lán)色,細(xì)胞漿、基底膜及膠原纖維呈粉紅色。正常對照組結(jié)腸黏膜上皮結(jié)構(gòu)完整,可見少量炎性細(xì)胞浸潤,腺體細(xì)胞排列整齊,杯狀細(xì)胞較多;UC組黏膜可見大量炎性細(xì)胞如嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等浸潤,隱窩結(jié)構(gòu)紊亂,隱窩內(nèi)、隱窩上皮均可見炎性細(xì)胞浸潤,黏膜上皮杯狀細(xì)胞減少,偶可見潘氏細(xì)胞化生,重度者出現(xiàn)黏膜上皮缺失、脫落。3結(jié)腸黏膜組織中ARE結(jié)合活性的檢測結(jié)果UC組結(jié)腸組織中ARE的結(jié)合活性均高于正常對照組,各組ARE結(jié)合活性程度依次為:重度活動組輕中度活動組對照組。任意兩組間相比,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。4結(jié)腸粘膜組織中HO-1的檢測結(jié)果結(jié)腸黏膜HO-1免疫組化顯示HO-1在正常粘膜較少表達(dá),主要位于細(xì)胞漿中,而UC組HO-1表達(dá)明顯增多,細(xì)胞核、胞漿中均有表達(dá);各組HO-1表達(dá)水平:重度活動組輕中度活動組對照組,任意兩組間相比差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。5相關(guān)性分析UC患者中ARE結(jié)合活性的變化與HO-1表達(dá)的變化呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)為0.946,P0.01,具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:隨著潰瘍性結(jié)腸炎患者病情嚴(yán)重程度的進(jìn)一步加強(qiáng),結(jié)腸黏膜組織中ARE的結(jié)合活性不斷增強(qiáng),免疫組織化學(xué)方法檢測HO-1的表達(dá)也不斷增加,ARE與HO-1的關(guān)系呈正相關(guān),ARE的結(jié)合活性及HO-1的表達(dá)強(qiáng)度在一定程度上可以反映UC的病情嚴(yán)重程度,UC的發(fā)病機(jī)制與Keap1/Nrf2/ARE/HO-1信號通路有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R574.62
【目錄】：

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8 樸恩姬;結(jié)腸靈治療潰瘍性結(jié)腸炎實(shí)驗(yàn)研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2001年

9 劉敬軍;中西醫(yī)結(jié)合灌腸治療潰瘍性結(jié)腸炎的臨床分析和實(shí)驗(yàn)研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2006年

10 陳曦;過氧化物酶體增殖物激活受體-γ在大鼠潰瘍性結(jié)腸炎中的動態(tài)表達(dá)及中藥腸康顆粒的干預(yù)作用[D];吉林大學(xué);2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄭容容;血小板計(jì)數(shù)評價(jià)潰瘍性結(jié)腸炎活動度及嚴(yán)重度的Meta分析[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張蕊;潰瘍性結(jié)腸炎患者結(jié)腸黏膜ARE結(jié)合活性與HO-1表達(dá)的變化[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 劉國慶;蘋果多酚50%乙醇提取物對抗?jié)冃越Y(jié)腸炎的作用及其機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 趙志敏;化濁解毒愈瘍湯對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠TNF-α、SOD的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 王亮;硫氧還蛋白及超氧化物歧化酶在潰瘍性結(jié)腸炎中的表達(dá)及作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 雷蕾;重度潰瘍性結(jié)腸炎患者巨細(xì)胞病毒感染情況及抗病毒治療對其影響的Meta分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

7 滕天立;豨薟草提取物對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的作用及機(jī)制研究[D];浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

8 俞敬;濾泡輔助性T細(xì)胞和白細(xì)胞介素-21對小鼠潰瘍性結(jié)腸炎的影響研究[D];蘇州大學(xué);2015年

9 張艷麗;阿托伐他汀對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠炎癥因子和血管內(nèi)皮的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

10 劉帥;阿托伐他汀潰瘍性結(jié)腸炎小鼠氧化應(yīng)激及血管內(nèi)皮功能的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：潰瘍性結(jié)腸炎患者結(jié)腸黏膜ARE結(jié)合活性與HO-1表達(dá)的變化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：186750