本文關鍵詞：草魚白細胞介素1β的克隆及其在腸道炎癥中的功能鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

碩士學位論文 論文題目 草魚白細胞介素1β的克隆及其在腸道炎癥 中的功能鑒定 研究生姓 卜云璇 指導教師姓 宋學宏 專 業(yè) 名稱 水生生物學 研 究 方 向 水生生物制品安全性 2015 4 論文提交日期 年 月 2 1 草魚白細胞介素 β的克隆及其在腸道炎癥中的功能鑒定 中文摘要 草魚白細胞介素1β的克隆及其在腸道炎癥中的功能鑒定 中文摘要 目的：白細胞介素-1β IL-1β）是一種促炎細胞因子，主要由活化的單核細胞和 巨噬細胞產(chǎn)生，可參與機體的多種生理及病理反應，在免疫細胞的成熟、活化、增殖 和免疫調(diào)節(jié)等過程中發(fā)揮重要作用。草魚是我國重要的淡水養(yǎng)殖經(jīng)濟魚類，但其易遭 受多種病原菌和病毒的危害，病原生物通常通過腸道進入草魚體內(nèi)，使其發(fā)生炎癥乃 至死亡，造成經(jīng)濟損失。本研究旨在通過克隆草魚IL-1β基因，分析其基因結(jié)構，明 確其在草魚生理及病理條件下的各組織的表達水平，揭示該基因在腸道炎癥發(fā)生過程 中的可能作用。 方法：運用RACE技術從草魚中克隆IL-1β全長cDNA，通過pET32a + 原核表 達系統(tǒng)表達IL-1β融合蛋白，并經(jīng)鎳柱純化獲得具有生物活性的蛋白。運用qPCR技 術分別檢測： 1）健康草魚各組織的IL-1β轉(zhuǎn)錄水平； 2）用細菌內(nèi)毒素 LPS）腹 4h 12h 24h 48h IL-1β 3 腔注射草魚后 ， ， 和 時各組織中 相對表達量。 ）肛灌不同劑 量重組IL-1β活性蛋白后炎癥發(fā)生過程中腸道組織內(nèi)的IL-1β、IL-1R2和TNF-α基因 相對表達水平。以割膠純化的草魚IL-1β重組蛋白為免疫原，制備草魚IL-1β多克隆抗 體，用瓊脂雙擴散法檢測抗體的效價、Westernblot驗證其特異性。采用肛灌嗜水氣 單胞菌誘導草魚產(chǎn)生腸道炎癥，誘導 12h后肛灌20ng/尾的草魚IL-1β多克隆抗體 rgcIL-1βpA

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