本文關(guān)鍵詞：廣州地區(qū)丙型肝炎患者的HCV基因型相關(guān)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《廣州醫(yī)科大學(xué)》 2014年

廣州地區(qū)丙型肝炎患者的HCV基因型相關(guān)研究

肖桂娥  

【摘要】：研究背景 丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus，HCV）感染可導(dǎo)致75%-85%感染者發(fā)展為慢性肝病，是慢性肝炎、肝硬化及肝癌的重要病因，嚴(yán)重危害人類的健康和生命。全球HCV感染率約3.0%，即有1.7-2.0億的HCV感染者；我國的HCV感染率約為2.5-4.9%，感染人數(shù)已超過3000萬。 HCV可經(jīng)靜脈吸毒、輸血、性傳播、垂直傳播、或經(jīng)破損的皮膚粘膜傳播如手術(shù)、紋身、拔牙、共用衛(wèi)生器具等。發(fā)達(dá)國家以靜脈吸毒傳播為主，我國早期以輸血和血制品傳播為主，在實(shí)行血液篩查HCV制度后，此傳播途徑大幅下降。但隨著我國吸毒人群增多，經(jīng)靜脈吸毒感染HCV的比例增大。 HCV基因型繁多，目前國內(nèi)外常采用Simmonds命名法，將HCV分為6種基因型和80多種基因亞型。基因型分布有明顯的地域差異性，la、lb、2a、2b、3a型呈全球廣泛分布，其中1b型分布最廣；中國以1b和2a型多見，其中以1b型為主，2a型主要分布在中國北部，3型主要分布在云南等西南地區(qū)，4型、5型報(bào)道罕見，6型主要見于香港、澳門及南方邊境省份，6亞型最復(fù)雜，變異株最多，到目前為止，6型已發(fā)現(xiàn)有23個(gè)亞型。有報(bào)導(dǎo)廣東地區(qū)獻(xiàn)血員和靜脈吸毒人群中，以1b和6a型為主，并發(fā)現(xiàn)新的6型變異株。而本地區(qū)丙型肝炎患者的HCV基型變化有待進(jìn)一步研究。 不同基因型的HCV對肝臟損傷程度不同，1b型對肝臟的損傷嚴(yán)重度大于其他基因型。目前多采用聚乙二醇干擾素（PEG-IFN）α聯(lián)合利巴韋林（RBV）進(jìn)行抗病毒治療，不同基因型感染者療效不一，1、4型病毒應(yīng)答率低于2、3型，因此，準(zhǔn)確診斷HCV基因型對HCV抗病毒治療方案選擇及療效判斷至關(guān)重要。 為了精準(zhǔn)分型，國際上對HCV基因分型技術(shù)進(jìn)行了長期研究。目前，HCV基因分型技術(shù)包括基因測序法、型特異性引物擴(kuò)增法、探針雜交法、基因芯片法、限制性片段長度多態(tài)性分析（RELP）、異源分子遷移率分析法（HMA）等。對HCV全基因組測序是最準(zhǔn)確的方法，但難度大、費(fèi)時(shí)、成本高，臨床上難以實(shí)行，而部分基因測序法相對簡單易行，目前已將HCV基因NSB5區(qū)測序分型法視為“金標(biāo)準(zhǔn)”。但我們臨床上常規(guī)采用國產(chǎn)商業(yè)試劑(探針雜交法)對HCV基因分型，此法只能分出1型與非1型，且準(zhǔn)確率較低。 鑒于基因分型方法存在的問題和廣東地區(qū)HCV基因型的復(fù)雜性，為配合臨床丙型肝炎診療的需求，本研究以廣州地區(qū)丙型肝炎患者為主體，對其HCV基因相關(guān)問題進(jìn)行了研究，包括臨床切實(shí)可行的兩種基因分型方法的準(zhǔn)確性比較和HCV分子流行病學(xué)研究兩部分內(nèi)容。 第一部分臨床切實(shí)可行的兩種基因分型法（部分基因測序法與探針雜交法）的準(zhǔn)確性比較 研究內(nèi)容及目的 比較臨床常規(guī)使用的HCV部分基因測序法和探針雜交法對HCV基因分型的準(zhǔn)確性，為臨床選擇HCV基因分型方法、基因型診斷和制定抗病毒治療策略及HCV分子流行病學(xué)研究提供可靠依據(jù)。 研究方法 收集2012-2013年在廣州市第八人民醫(yī)院就診的191例臨床丙型肝炎患者，其血清標(biāo)本已采用國產(chǎn)探針雜交法進(jìn)行了HCV基因分型。以國際HCV基因庫中HCV全基因序列代表株的分型結(jié)果為“金標(biāo)準(zhǔn)”，設(shè)計(jì)C區(qū)和NS5B區(qū)基因序列擴(kuò)增引物，分別擴(kuò)增HCV C區(qū)和NS5B區(qū)基因，基因產(chǎn)物的測序結(jié)果與“金標(biāo)準(zhǔn)”共建系統(tǒng)進(jìn)化樹進(jìn)行基因分型，分型結(jié)果與患者的探針雜交法分型結(jié)果進(jìn)行對比。 研究結(jié)果 1.從國際HCV基因庫中共獲得92個(gè)代表株，涵蓋7個(gè)基因型、54個(gè)基因亞型和5個(gè)重組基因型。分別構(gòu)建代表株的全基因、C區(qū)和NS5B區(qū)的系統(tǒng)進(jìn)化樹，結(jié)果顯示，92個(gè)代表株的全基因序列分型結(jié)果與其C區(qū)和NS5B區(qū)基因分型結(jié)果一致。 2.用HCV C區(qū)和NS5B區(qū)擴(kuò)增引物分別檢測191例臨床丙型肝炎患者的HCV基因，結(jié)果顯示兩區(qū)均擴(kuò)增成功的有171例，其中167例C區(qū)和NS5B區(qū)HCV基因分型結(jié)果一致。 3.167例基因測序分型結(jié)果與患者的探針雜交法分型結(jié)果對比顯示，總符合率為84.43%（141/167）。探針雜交法誤檢的26例中，23例6a型誤檢為1型；2例1b和1例1a型被誤檢為非1型。171例患者中另外4例（2.34%）的C區(qū)與NS5B區(qū)HCV分型結(jié)果不一致，其中3例C區(qū)分型為6a而NS5B區(qū)分型為1b，另外1例C區(qū)分型為1b而NS5B分型為6a，4例患者的探針雜交結(jié)果顯示，2例與C區(qū)結(jié)果一致；另外2例與NS5B區(qū)結(jié)果一致。 結(jié)論 1.目前臨床上常規(guī)使用的國產(chǎn)商業(yè)試劑（探針雜交法）誤檢率高，且易在1型和6型間出現(xiàn)誤檢。 2.建立了更精確的基因分型法：C區(qū)和NS5B區(qū)基因同時(shí)測序可使分型結(jié)果更加準(zhǔn)確，兩區(qū)分型結(jié)果一致時(shí)可以取代HCV全基因測序分型，兩區(qū)分型結(jié)果不一致時(shí)，提示可能存在混合株或重組株感染，需做進(jìn)一步分析。 第二部分廣州地區(qū)丙型肝炎患者的HCV分子流行病學(xué)研究研究內(nèi)容及目的 研究廣州地區(qū)丙型肝炎患者HCV基因型特點(diǎn)及其與患者年齡、性別、傳播途徑及HCV病毒載量的相關(guān)性，以便了解本地區(qū)丙肝臨床HCV分子流行病學(xué)變化趨勢及對臨床預(yù)后的影響。 研究方法 收集2012-2013年在廣州市第八人民醫(yī)院就診的207例HCV RAN陽性的丙型肝炎患者血清，分別提取病毒RNA，反轉(zhuǎn)錄生成cDNA。對其HCV C區(qū)和NS5B區(qū)基因序列進(jìn)行RT-NPCR擴(kuò)增，兩區(qū)擴(kuò)增成功的PCR產(chǎn)物進(jìn)行基因測序，測序結(jié)果分別與相應(yīng)的參照株序列比對，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，兩區(qū)基因分型結(jié)果一致者確定HCV基因亞型，分析廣州地區(qū)HCV基因型特點(diǎn)及傳播途徑。并采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析性別、年齡、HCV病毒載量與基因型的相關(guān)性。 研究結(jié)果 1.179例結(jié)果納入分析 207例標(biāo)本分別進(jìn)行HCV C區(qū)及NS5B區(qū)巢式PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物分別為401bp，375bp，目的條帶清晰且單一，無非特異性雜帶。有185例HCV C區(qū)和NS5B區(qū)都擴(kuò)增成功，其中179例兩區(qū)基因分型結(jié)果一致。 2. HCV基因型特點(diǎn) 1）179例HCV基因特點(diǎn) 共檢出1型、2型、3型、6型四種基因型和八種基因亞型，以1b和6a為主。各亞型所占比例為：1b型40.78﹪(73/179)，6a型27.37﹪(49/179)，3b型11.73﹪(21/179)，3a型8.94﹪(16/179)，2a型6.15﹪(11/179)，1a型3.91﹪(7/179)，2b型0.56﹪(1/179)，6n型0.56﹪(1/179)。未發(fā)現(xiàn)新的6型變異株。 2）1b和6a型系統(tǒng)進(jìn)化樹特點(diǎn) 1b株主要分為在A、B、C三簇，A簇與中國廣泛流行1b株同源性高、B簇與中國中部及南部地區(qū)流行1b株同源性高；6a型株分為Ⅰ、Ⅱ兩大簇，與廣東地區(qū)獻(xiàn)血人群及靜脈吸毒人群中HCV6a型感染株同源性高。 3.流行病學(xué)特點(diǎn)： 1）傳播途徑 患者主要通過靜脈吸毒、輸血和血制品感染HCV。靜脈吸毒感染者中主要以6a型為主，占57.45%（27/47），其次為3a型，占21.28%（10/47）；通過輸血和血制品感染者中主要以1b型為主，占78.95%（30/38）。 2）性別 6組基因亞型間患者的性別比例有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.002）。 3）年齡 6組基因亞型間患者年齡分布有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.007），2a型患者平均年齡最大（53.45±11.02歲），與其他組相比，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均為P0.05），而其他組兩兩比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 4）病毒載量 6組基因亞型間患者的病毒載量有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.000），1b型患者病毒載量平均水平最高（6.51±0.90log10IU/ml），與其他組相比，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均為P0.05），而其他組兩兩比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 5)合并HIV感染患者特點(diǎn) 179例患者中，有30例患者合并HIV感染，其中以6a型患者最多，，達(dá)51.51%（17/33）。采用獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，比較單純HCV與合并HIV感染者的HCV載量均值，結(jié)果顯示，兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.691）。 結(jié)論： 1.廣州地區(qū)丙型肝炎患者HCV基因型存在多種亞型；以1b、6a、3型為主，1b型株包含中國大部分地區(qū)的1b型株，6a、3型已取代2a型分別成為第二、三主要流行基因型；未發(fā)現(xiàn)其他文獻(xiàn)報(bào)道的或未曾發(fā)現(xiàn)的6型變異株。 2.丙型肝炎患者性別比例、年齡、病毒載量在基因亞型上均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其中2a型平均年齡水平最高。1b型病毒載量最高，這與1b型比其他基因型有更強(qiáng)的致病性等報(bào)道是相符的。輸血及血制品傳播中以lb型為主，靜脈吸毒傳播中以6a型為主。 3. HCV/HIV共感染者以6a型占主要，其病毒載量與單純HCV感染者相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R512.63
【目錄】：

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5 龔玲;江宇;張友才;;慢性丙型肝炎患者血清鐵蛋白的變化與聚乙二醇干擾素應(yīng)答的關(guān)系[A];第十七次全國中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

6 師令嫻;任姍;王莉琳;馬麗娜;金怡;何智敏;張小丹;張永宏;陳新月;;HCV感染患者T細(xì)胞免疫的相關(guān)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第四次全國艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全國熱帶病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

7 趙平;王江濱;焦健;;慢性丙型肝炎患者肝外自身免疫現(xiàn)象合并狀況調(diào)查及自身抗體分析在其與自身免疫性肝炎鑒別診斷中的意義[A];中華醫(yī)學(xué)會第11屆全國內(nèi)科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

8 李秋蓮;;慢性丙型肝炎患者軀體癥狀與肝臟功能及氣質(zhì)類型的相關(guān)性分析[A];第三屆全國重型肝病及人工肝血液凈化學(xué)術(shù)年會論文集（上冊）[C];2007年

9 李忠培;張德慶;孟光源;;丙型肝炎患者血清的探討sTNFR水平及其臨床意義[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2008年

10 王小紅;;HCV RNA檢測在丙型肝炎患者治療管理中的應(yīng)用[A];第二屆全國病毒性肝炎慢性化重癥化基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 北京西城 曹淑芬;[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2013年

2 記者 高原;[N];新華每日電訊;2011年

3 守瑤;[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

4 高勇;[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2007年

5 方進(jìn);[N];保健時(shí)報(bào);2005年

6 段英　邢卉春;[N];中國醫(yī)藥報(bào);2011年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 武文斌;丙型肝炎患者抗-F流行率及F蛋白對細(xì)胞（抑）癌基因的調(diào)節(jié)作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

2 楊江華;慢性丙型肝炎患者CD4～+CD25～+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的檢測及免疫學(xué)意義[D];南京醫(yī)科大學(xué);2006年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 張繚云;丙型肝炎患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群及可溶性白細(xì)胞介素-2受體變化的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2003年

2 齊棟;延邊地區(qū)丙型肝炎患者合并IT病毒感染的檢測[D];延邊大學(xué);2005年

3 陳麗英;慢性丙型肝炎患者糖尿病并發(fā)率調(diào)查及其臨床特征分析[D];吉林大學(xué);2005年

4 謝文劍;慢性丙型肝炎患者外周血Th1/Th2細(xì)胞的檢測及其臨床意義的初步研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2003年

5 肖桂娥;廣州地區(qū)丙型肝炎患者的HCV基因型相關(guān)研究[D];廣州醫(yī)科大學(xué);2014年

6 劉芳;丙型肝炎患者血清IL-17與ALT、AST、TBil的相關(guān)性分析[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2013年

7 宋鑒清;丙型肝炎患者血清IL-6、IL-12與血清HCV病毒載量及ALT的相關(guān)性研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2004年

8 歐陽奕;慢性丙型肝炎患者血清丙型肝炎病毒核心抗原定性及定量檢測的臨床意義[D];中南大學(xué);2006年

9 王琰;TNF-α系統(tǒng)在HCV感染中的臨床意義及其與病毒基因型的關(guān)系[D];山西醫(yī)科大學(xué);2007年

  本文關(guān)鍵詞：廣州地區(qū)丙型肝炎患者的HCV基因型相關(guān)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：177827