發(fā)布時(shí)間：2018-04-19 09:19

  本文選題：肝硬化 + 肝硬化合并糖尿病　； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的本課題利用高通量測序技術(shù)全面分析肝硬化以及肝硬化合并糖尿病患者腸道菌群變化,比較二者之間的菌群差異,在此基礎(chǔ)之上進(jìn)一步探討肝硬化合并糖尿病患者血糖水平與腸道菌群之間的關(guān)聯(lián)性以及肝硬化患者Child-Pugh評分相關(guān)的腸道菌群。方法選取2015年11月至2016年4月期間天津市第三中心醫(yī)院消化科住院病人35人,共分為兩組,其中一組為肝硬化病人20人,另一組為肝硬化合并糖尿病病人15人,對兩組患者進(jìn)行新鮮糞便標(biāo)本采集,并迅速置于-80℃冰箱冷凍保存,利用糞便DNA提取試劑盒提取35例患者糞便DNA,對提取后的DNA進(jìn)行純化,然后進(jìn)行瓊脂凝膠電泳檢測。對檢測合格的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,并對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行質(zhì)量檢測和純化,利用Roche454高通量測序平臺(tái)對兩組患者的糞便菌群16SrDNA的V3-V6區(qū)域進(jìn)行測序,根據(jù)測序結(jié)果總體分析比較肝硬化組和肝硬化合并糖尿病組兩組患者腸道菌群之間的相似性及差異性;將兩組患者分別根據(jù)病因分類,比較不同病因下腸道菌群的差異;比較相同病因下兩組腸道菌群的差異性;分析與肝硬化合并糖尿病患者空腹血糖具有相關(guān)性的腸道菌群以及與肝硬化患者Child-Pugh評分相關(guān)的腸道菌群。結(jié)果1.本課題所選取的20例肝硬化患者及15例肝硬化合并糖尿病患者在年齡、性別以及Child-Pugh評分之間無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,其中空腹血糖指標(biāo),肝硬化合并糖尿病組明顯高于肝硬化組(P=0.004)。2.35例樣本共獲得有效序列361887條,肝硬化組獲得有效序列總數(shù)是162499條,平均每個(gè)樣本有8125條序列;15例肝硬化合并糖尿病組有效序列總數(shù)是199388條,每個(gè)樣本平均有13293條序列。利用Uclust程序?qū)⑾嗨贫葹?7%的聚類為一個(gè)OTU,兩組共獲得13812個(gè)OTU,肝硬化組共7159個(gè)OTU,每個(gè)樣本平均333個(gè),肝硬化合并糖尿病組共6653個(gè)OTU,每個(gè)樣本平均477個(gè),且兩組OTU個(gè)數(shù)無差異。3.樣本多樣性分析顯示,肝硬化和肝硬化合并糖尿病兩組的chao1指數(shù)、Simpson指數(shù)以及shannon指數(shù)均無顯著差異;樣本內(nèi)復(fù)雜度分析顯示,各樣本的稀疏曲線隨著測序量的增加逐漸趨于平緩。樣本主成分分析顯示,35個(gè)樣本無法通過PC1-PC2-PC3坐標(biāo)系完全區(qū)分開來,說明兩組樣本在聚類上沒有明顯差別,腸道菌群結(jié)構(gòu)具有較大的相似性。4.從樣本群落結(jié)構(gòu)分析結(jié)果來看,肝硬化和肝硬化合并糖尿病兩組樣品在門、綱、目、科、屬五大分類水平中所含物種種類相似,但各水平物種分布仍存在明顯差異。在門的水平上,肝硬化合并糖尿病患者腸道菌群中的變形菌門比例顯著增加(8.8%vs2.4%,P=0.001),同時(shí)擬桿菌門與厚壁菌門的比值也稍大于肝硬化組的比值(3.3VS2.1,P=0.063);在綱的水平上,肝硬化合并糖尿病組患者腸道菌群中的γ-變形菌綱和β-變形菌綱所占比例均明顯大于肝硬化組(5.5%vs1.6%,P=0.001;1.5%vs0.5%,P0.001);在目的水平上,相比肝硬化合并糖尿病組,肝硬化組患者腸道菌群中的丹毒絲菌目和脫硫弧菌目占明顯優(yōu)勢(0.6%vs0.2%,P=0.016;0.2%vs0.1%,P=0.01),而肝硬化合并糖尿病患者腸道菌群中的伯克氏菌目和腸桿菌目比例顯著增加(1.5%vs0.6%,P0.001;6.5%vs2.6%,P=0.001),肝硬化合并糖尿組的巴斯德氏菌目所占比例稍多于肝硬化組(0.6%vs0.3%,P=0.075);在科的水平上,紫單胞菌科、腸桿菌科、韋榮球菌科、產(chǎn)堿菌科均在肝硬化合并糖尿病組占明顯優(yōu)勢(4.1%vs2.2%,P=0.005;6.5%vs1.3%,P=0.001;3.8%vs2.6%,P=0.019;1.5%vs0.6%,P0.001),肝硬化患者腸道菌群中的梭菌科、毛螺旋菌科、丹毒絲菌科、脫硫弧菌科所占比例顯著增加(0.3%vs0.2%,P=0.028;14.8%vs9.9%,P=0.016;0.5%vs0.2%,P=0.016;0.2%vs0.1%,P=0.016),肝硬化合并糖尿病組的擬桿菌科比例稍多于肝硬化組(51.6%vs41.9%,P=0.07);在屬水平中,肝硬化患者腸道菌群中相對富集的是Butyricimonas、Blautia、糞球菌屬、Dorea、Faecalibacterium、雙歧桿菌屬六種菌屬(0.3%vs0.1%,P=0.011;0.5%vs0.2%,P=0.017;0.6%vs0.2%,P=0.012;0.4%vs0.2%,P=0.022;6.4%vs2.2%,P=0.001;0.7%vs0%,P=0.001,);而parabacteroides、薩特氏菌屬、Roseburia、克雷伯氏菌屬在肝硬化合并糖尿病病人腸道菌群中所占比例較大(4.3%vs2.2%,P=0.002;1.5%vs0.5%,P0.001;1.6%vs0.1%,P0.001;0.7%vs0%,P0.001),毛螺菌屬肝硬化組稍多于肝硬化合并糖尿病組(3.3%vs1.6%,P=0.069)。5.通過Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)在本課題中在肝硬化組和肝硬化合并糖尿病組兩組中不同病因患者間腸道菌群在門、綱、目、科、屬五大水平中均無明顯差異。6.對具有相同病因的肝硬化和肝硬化合并糖尿病兩組患者腸道菌群進(jìn)行一一比較,經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)在乙肝病因組中,變形菌門、β-變形菌綱、伯克氏菌目、韋榮球菌科、產(chǎn)堿菌科、Parabacteroides、Roseburia、韋永氏球菌屬、薩特氏菌屬在乙肝肝硬化患者腸道中要明顯少于在乙肝肝硬化合并糖尿病患者的腸道菌群的比例(2.8%vs7.7%,P=0.007;0.5%vs2.2%,P=0.001;0.5%vs2.2%,P=0.001;2.7%vs6.8%,P=0.003;0.5%vs2.2%,P=0.001;2.7%vs5.2%,P=0.036;0.1%vs1.5%,P0.001;0.2%vs2.8%,P=0.011;0.5%vs2.2%,P=0.001),而鏈球菌科、梭菌科、Faecalibacterium、鏈球菌屬在乙肝肝硬化患者腸道中占優(yōu)勢(0.7%vs0.1%,P=0.021;0.4%vs0.2%,P=0.027;8.1%vs2.6%,P=0.044;0.7%vs0.1%,P=0.02);在自身免疫性病因中,自身免疫性肝硬化合并糖尿病患者腸道中的擬桿菌門、變形菌門、γ-變形菌綱、腸桿菌目、鏈球菌科、腸桿菌科、Roseburia、韋榮氏球菌屬、鏈球菌屬多于自身免疫性肝硬化患者(80.2%vs52.3%,P=0.044;8.6%vs2.5%,P=0.002;8.0%vs1.8%,P0.001;7.9%vs1.4%,P0.001;0.9%vs0.2%,P=0.015;7.9%vs1.4%,P0.001;1.0%vs0.2%,P=0.015;1.2%vs0.9%,P=0.012;0.9%vs0.2%,P=0.015),而自身免疫性肝硬化患者腸道的糞球菌屬較多(0.5%vs0.1%,P=0.001);丹毒絲菌目、毛螺旋菌科、Butyricimonas、Dorea的在不明原因性肝硬化患者腸道中所占的比例高于相同病因下合并糖尿病的患者(0.3%vs0.2%,P=0.026;15.7%10.8%,P=0.024;0.8%vs0.1%,P=0.004;0.2%vs0.1%,P=0.001);其余病因的比較兩組間未發(fā)現(xiàn)明顯差異。7.在肝硬化合并糖尿病患者腸道菌群中,γ-變形菌綱與空腹血糖呈正相關(guān),腸桿菌科、韋榮球菌科、克雷伯氏菌屬與空腹血糖近似正相關(guān)。8.在肝硬化合并糖尿病患者腸道菌群中,未發(fā)現(xiàn)與Child-Pugh評分相關(guān)的腸道菌群。9.在肝硬化患者腸道菌群中,Roseburia、Parabacteroides和紫單胞菌科的比例水平均與肝硬化患者Child-Pugh評分呈負(fù)相關(guān),韋榮氏球菌屬與Child-Pugh評分呈正相關(guān)。結(jié)論肝硬化與肝硬化合并糖尿病患者的腸道菌群結(jié)構(gòu)具有相似性但又存在各自的特異性,腸道菌群中存在某些與肝硬化合并糖尿病患者血糖水平相關(guān)的細(xì)菌以及與肝硬化患者病情相關(guān)的細(xì)菌,為臨床通過調(diào)節(jié)菌群結(jié)構(gòu)治療肝硬化和肝硬化合并糖尿病提供理論依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R575.2;R587.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1772501