本文關鍵詞：血清miRNA表達譜用于隱匿性乙型肝炎診斷的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

血清miRNA表達譜用于隱匿性乙型肝炎診斷的研究

時間:13-06-20

 【摘要】 目的乙肝表面抗原(HBsAg)血清學檢測的大范圍推廣,在很大程度上提高了輸血的安全性,但這并不能完全杜絕HBV經(jīng)輸血途徑的傳播,在一些特殊的情況下, HBsAg陰性的血液也能造成HBV的傳播,如在急性感染中的血清清除期,或者獻血者患有隱匿性乙型肝炎感染(OBI)。OBI具有血清中檢測不到HBsAg但有低水平病毒復制活動的特點,因而成為威脅輸血安全和器官移植安全的一大隱患。本課題的目的是驗證一個設想,即OBI患者血清中存在特異性的miRNA表達譜,而這種表達譜可以用作檢測OBI感染的診斷標志物。方法由于OBI患者的血清樣本很難獲得,因此,我們首先研究了慢性乙型肝炎患者血清中特異性的miRNA表達譜。我們首先用Solexa測序技術分別對30例慢性乙肝患者和30例正常對照的混合血清中全部miRNA進行了初篩,然后用qRT-PCR技術對初篩中差異表達的miRNA進行驗證。以這種方法,我們發(fā)現(xiàn)了13個HBV特異性的血清miRNA。最后,我們利用基于Taqman探針的qRT-PCR技術檢測了這13個miRNA在OBI患者血清中的表達水平。結(jié)果我們在30例正常對照、29例慢性乙肝患者和11例OBI患者的血清中檢測了13個HBV特異性miRNA的表達情況,我們發(fā)現(xiàn)了4個miRNA(1et-7c,miR-23b,miR-122和miR-150)在OBI患者血清中的表達量顯著高于正常對照中。這組4個miRNA的表達譜能夠精確地把OBI患者(AUC=0.999)和慢性乙肝患者(AUC=0.989)與正常對照區(qū)分開來。聚類分析的結(jié)果也表明這4個]miRNA可用于區(qū)分OBI患者和正常對照。標志物,且具有很高的靈敏性和特異性。 

【關鍵詞】 隱匿性乙型肝炎； 慢性乙型肝炎； 血清miRNA表達譜； 生物標志物； Solexa測序技術； 實時定量PCR技術； 

摘要 4-6

Abstract 6-7

縮略詞表 8-9

目錄 9-11

第1章 研究背景綜述 11-25

    1.1 miRNA研究進展概述 11-22

        1.1.1 miRNA的發(fā)現(xiàn)歷程 11-12

        1.1.2 miRNA的結(jié)構(gòu)特征 12-13

        1.1.3 miRNA的加工成熟過程 13-14

        1.1.4 miRNA的作用方式 14-16

        1.1.5 miRNA的生物學意義及其與癌癥的關系 16-22

    1.2 肝臟相關miRNA研究進展概述 22-25

        1.2.1 miRNA與肝臟的發(fā)育與功能 22-23

        1.2.2 miRNA與肝炎 23-24

        1.2.3 miRNA與肝癌 24-25

第2章 慢性乙型肝炎患者血清miRNA的Solexa測序 25-32

    2.1 前言 25-26

    2.2 材料與方法 26-28

        2.2.1 研究對象 26

        2.2.2 相關儀器與試劑 26-27

        2.2.3 實驗方法 27-28

    2.3 實驗結(jié)果與分析 28-30

    2.4 討論 30-32

第3章 慢性乙型肝炎特異性miRNA表達譜的驗證 32-40

    3.1 前言 32

    3.2 材料與方法 32-36

        3.2.1 研究對象 32

        3.2.2 相關儀器與試劑 32-34

        3.2.3 實驗方法 34-36

    3.3 實驗結(jié)果與分析 36-37

        3.3.1 Training Set 36-37

        3.3.2 Validation Set 37

    3.4 討論 37-40

第4章 隱匿性乙型肝炎特異性miRNA表達譜的研究 40-49

    4.1 前言 40-41

    4.2 材料與方法 41-43

        4.2.1 研究對象 41-42

        4.2.2 相關儀器與試劑 42

        4.2.3 實驗方法 42-43

    4.3 實驗結(jié)果與分析 43-47

    4.4 討論 47-49

結(jié)論 49-50

參考文獻 50-58

論文發(fā)表情況 58-59

致謝 59-61

附錄 61

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