本文關鍵詞：血紅素加氧酶-1干預乙肝病毒復制及菊苣酸類天然產(chǎn)物抗乙肝研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國計量學院》 2013年

血紅素加氧酶-1干預乙肝病毒復制及菊苣酸類天然產(chǎn)物抗乙肝研究

張虹莉  

【摘要】：乙型肝炎是一種能引起多種并發(fā)癥的肝臟疾病，慢性乙肝病毒（HBV）感染是世界公共衛(wèi)生的一大難題，而我國是HBV感染高發(fā)地區(qū)，HBV攜帶者占總人口比例高達10%，其中慢性乙肝患者約3000萬例，每年約有35萬人死于慢性乙肝相關疾病，但至今尚無根治的藥物和方法。現(xiàn)有抗乙肝藥物其療效距離清除病毒感染、治愈絕大多數(shù)乙肝患者及病毒攜帶者的目標尚有很長的距離。因此，深入開展抗乙肝治療潛在靶點及創(chuàng)新藥物研究具有重要意義。 本課題研究內容分為兩個部分，第一部分：采用血晶素誘導HBV基因轉染的HepG2.2.15細胞超量表達血紅素加氧酶-1（HO-1），探討了HO-1誘導表達與HBV復制（包括HBV抗原和HBV-DNA水平）的關系。第二部分：采用D-氨基半乳糖（D-GalN）誘導的人正常組織來源HL-7702肝細胞損傷模型和HBV基因轉染的HepG2.2.15細胞模型，研究了菊苣酸等天然提取物的抗肝細胞損傷和抗乙肝病毒作用，包括對HBV抗原表達和HBV-DNA復制的影響。以期為HO-1作為抗乙肝潛在靶點和研制新型抗乙肝藥物提供理論依據(jù)和新思路。 一、HO-1誘導表達及其抗HBV作用研究 將血晶素用濃氨水及超純水配制成不同濃度的試驗所需溶液，與HepG2.2.15細胞分別作用1-6天，提取HepG2.2.15細胞Total RNA，反轉錄成cDNA，采用RT-PCR法同時檢測HO-1及β-actin基因的表達；提取HepG2.2.15細胞培養(yǎng)上清，采用酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg和HBeAg分泌量；采用熒光定量PRC法檢測HBV-DNA復制量。結果顯示血晶素可誘導HepG2.2.15細胞中的HO-1表達，HO-1表達上升的同時，HBsAg和HBeAg的分泌量下降，HBV-DNA的復制也受到了抑制，而且隨著血晶素與細胞作用時間的延長，這種抑制作用更為明顯。 二、菊苣酸等天然提取物抗HBV作用研究 本研究檢測了菊苣酸類天然產(chǎn)物體外抗肝細胞損傷和抗乙肝病毒作用。采用D-氨基半乳糖（D-GalN）誘導肝細胞損傷模型，四甲基偶氮唑（MTT）法檢測細胞增殖；將試驗藥物與陽性藥物拉米夫定（3TC）作用于轉染HBV基因的HepG2細胞，，提取HepG2.2.15細胞培養(yǎng)上清，采用酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg和HBeAg分泌量；采用熒光定量PRC法檢測HBV-DNA復制量。結果表明，試驗濃度范圍內，與D-GalN模型組相比，所有試驗藥物均能不同程度提高細胞活力，相同劑量下的保護效果優(yōu)于陽性對照藥物水飛薊賓；試驗藥物作用于HepG2.2.15細胞之后，對培養(yǎng)上清中HBsAg、HBeAg的表達均有抑制作用，且具有劑量和時間依賴性，相同濃度時抑制作用優(yōu)于陽性對照。 總之，本論文采用血晶素誘導HepG2.2.15細胞中HO-1超量表達，探討了HO-1誘導與HBsAg、HBeAg表達和HBV DNA復制的關系，證明了HO-1具有直接抗HBV作用，為HO-1作為抗乙肝藥物研究和抗乙肝治療的潛在靶點提供了部分科學依據(jù)。同時，利用HepG2.2.15細胞和D-GalN誘導的HL-7702肝細胞損傷模型研究了菊苣酸等天然提取物的抗HBV和抗肝細胞損傷作用，為酚酸類化合物，尤其是咖啡酰類成分的開發(fā)利用打下了基礎。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：中國計量學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R512.62
【目錄】：

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