本文關(guān)鍵詞：血紅素加氧酶-1干預(yù)乙肝病毒復(fù)制及菊苣酸類天然產(chǎn)物抗乙肝研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國計量學(xué)院》 2013年

血紅素加氧酶-1干預(yù)乙肝病毒復(fù)制及菊苣酸類天然產(chǎn)物抗乙肝研究

張虹莉  

【摘要】：乙型肝炎是一種能引起多種并發(fā)癥的肝臟疾病，慢性乙肝病毒（HBV）感染是世界公共衛(wèi)生的一大難題，而我國是HBV感染高發(fā)地區(qū)，HBV攜帶者占總?cè)丝诒壤哌_(dá)10%，其中慢性乙肝患者約3000萬例，每年約有35萬人死于慢性乙肝相關(guān)疾病，但至今尚無根治的藥物和方法�，F(xiàn)有抗乙肝藥物其療效距離清除病毒感染、治愈絕大多數(shù)乙肝患者及病毒攜帶者的目標(biāo)尚有很長的距離。因此，深入開展抗乙肝治療潛在靶點(diǎn)及創(chuàng)新藥物研究具有重要意義。 本課題研究內(nèi)容分為兩個部分，第一部分：采用血晶素誘導(dǎo)HBV基因轉(zhuǎn)染的HepG2.2.15細(xì)胞超量表達(dá)血紅素加氧酶-1（HO-1），探討了HO-1誘導(dǎo)表達(dá)與HBV復(fù)制（包括HBV抗原和HBV-DNA水平）的關(guān)系。第二部分：采用D-氨基半乳糖（D-GalN）誘導(dǎo)的人正常組織來源HL-7702肝細(xì)胞損傷模型和HBV基因轉(zhuǎn)染的HepG2.2.15細(xì)胞模型，研究了菊苣酸等天然提取物的抗肝細(xì)胞損傷和抗乙肝病毒作用，包括對HBV抗原表達(dá)和HBV-DNA復(fù)制的影響。以期為HO-1作為抗乙肝潛在靶點(diǎn)和研制新型抗乙肝藥物提供理論依據(jù)和新思路。 一、HO-1誘導(dǎo)表達(dá)及其抗HBV作用研究 將血晶素用濃氨水及超純水配制成不同濃度的試驗(yàn)所需溶液，與HepG2.2.15細(xì)胞分別作用1-6天，提取HepG2.2.15細(xì)胞Total RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，采用RT-PCR法同時檢測HO-1及β-actin基因的表達(dá)；提取HepG2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)上清，采用酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg和HBeAg分泌量；采用熒光定量PRC法檢測HBV-DNA復(fù)制量。結(jié)果顯示血晶素可誘導(dǎo)HepG2.2.15細(xì)胞中的HO-1表達(dá)，HO-1表達(dá)上升的同時，HBsAg和HBeAg的分泌量下降，HBV-DNA的復(fù)制也受到了抑制，而且隨著血晶素與細(xì)胞作用時間的延長，這種抑制作用更為明顯。 二、菊苣酸等天然提取物抗HBV作用研究 本研究檢測了菊苣酸類天然產(chǎn)物體外抗肝細(xì)胞損傷和抗乙肝病毒作用。采用D-氨基半乳糖（D-GalN）誘導(dǎo)肝細(xì)胞損傷模型，四甲基偶氮唑（MTT）法檢測細(xì)胞增殖；將試驗(yàn)藥物與陽性藥物拉米夫定（3TC）作用于轉(zhuǎn)染HBV基因的HepG2細(xì)胞，，提取HepG2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)上清，采用酶聯(lián)免疫法檢測HBsAg和HBeAg分泌量；采用熒光定量PRC法檢測HBV-DNA復(fù)制量。結(jié)果表明，試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，與D-GalN模型組相比，所有試驗(yàn)藥物均能不同程度提高細(xì)胞活力，相同劑量下的保護(hù)效果優(yōu)于陽性對照藥物水飛薊賓；試驗(yàn)藥物作用于HepG2.2.15細(xì)胞之后，對培養(yǎng)上清中HBsAg、HBeAg的表達(dá)均有抑制作用，且具有劑量和時間依賴性，相同濃度時抑制作用優(yōu)于陽性對照。 總之，本論文采用血晶素誘導(dǎo)HepG2.2.15細(xì)胞中HO-1超量表達(dá)，探討了HO-1誘導(dǎo)與HBsAg、HBeAg表達(dá)和HBV DNA復(fù)制的關(guān)系，證明了HO-1具有直接抗HBV作用，為HO-1作為抗乙肝藥物研究和抗乙肝治療的潛在靶點(diǎn)提供了部分科學(xué)依據(jù)。同時，利用HepG2.2.15細(xì)胞和D-GalN誘導(dǎo)的HL-7702肝細(xì)胞損傷模型研究了菊苣酸等天然提取物的抗HBV和抗肝細(xì)胞損傷作用，為酚酸類化合物，尤其是咖啡酰類成分的開發(fā)利用打下了基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：中國計量學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R512.62
【目錄】：

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3 谷文英;外源一氧化氮調(diào)控菊苣鹽適應(yīng)性機(jī)制研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2013年

4 王景玲;自發(fā)乙型肝炎E抗原/抗體雙陽性的患者特征和形成機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

5 秦恩強(qiáng);HBeAg陽性慢性乙型肝炎患者外周血NK細(xì)胞高表達(dá)TRAIL與肝損傷關(guān)系的研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2009年

6 吳娟;HBV前C基因W28STOP突變對HBeAg陽性慢性乙型肝炎患者干擾素治療早期應(yīng)答的影響[D];中南大學(xué);2013年

7 王亞東;NK細(xì)胞介導(dǎo)的抗HBV感染免疫作用及其機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

8 陸慧琦;抗HBs Fab-IFNα對HBV感染作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

9 秦艷麗;B基因型與C基因型乙型肝炎病毒部分生物學(xué)特性的比較[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

10 張玉;農(nóng)桿菌介導(dǎo)菊苣遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立及富硫氨基酸基因的導(dǎo)入和表達(dá)定位[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 許勇;不同血清HBeAg水平慢性乙型肝炎患者臨床特征比較[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

2 柳海濤;菊苣根提取物的提取工藝優(yōu)化與抗氧化和抗菌活性關(guān)系的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2012年

3 梁娟;HBeAg陰性慢性乙型肝炎患者的臨床特征分析[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

4 謝志偉;干擾素α和恩替卡韋治療HBeAg陽性慢性乙型肝炎療效預(yù)測因素的分析[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

5 張健;干擾素相關(guān)的HBeAg/抗-HBe同時陽性的臨床特征及可能機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

6 解寶;能源草菊苣的化感活性研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2012年

7 余青;HBeAg陽性慢性乙型肝炎患者血清HBeAg水平與肝組織病理的相關(guān)性研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

8 紀(jì)永健;HBeAg早期下降對聚乙二醇干擾素α-2a治療HBeAg陽性慢性乙型肝炎的療效預(yù)測[D];山東大學(xué);2013年

9 許曉梅;1、HBeAg能上調(diào)新生兒臍帶血中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表達(dá) 2、慢性乙型肝炎患者接受核苷（酸）類似物治療48周時ALT未復(fù)常的影響因素分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

10 杜云;加味扶正散邪方聯(lián)合替比夫定治療HBeAg陽性慢性乙型肝炎肝郁脾虛證[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：血紅素加氧酶-1干預(yù)乙肝病毒復(fù)制及菊苣酸類天然產(chǎn)物抗乙肝研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：172233