本文選題：血管舒緩素　切入點(diǎn)：重癥急性胰腺炎　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:重癥急性胰腺炎(SAP)是臨床中較為兇險(xiǎn)的急癥,致死率較高。多種因素造成對(duì)胰腺組織的打擊,誘發(fā)多種炎癥介質(zhì)的瀑布樣級(jí)聯(lián)反應(yīng)和細(xì)胞因子應(yīng)激紊亂,導(dǎo)致全身炎性反應(yīng)綜合征(SIRS),隨之打破與之拮抗的代償性反應(yīng)綜合癥(CARS)的平衡,并直接引起多器官功能衰竭(MODS)。胰腺炎發(fā)病的共同通路是胰腺缺血再灌注損傷(IRI),尤其是在從急性水腫型胰腺炎(AP)即輕型胰腺炎,向重癥急性胰腺炎演變過程中起到至關(guān)重要的作用,具體表現(xiàn)為胰腺微血流降低、微血管通透性增加、血液流變學(xué)的變化及胰腺組織炎細(xì)胞的浸潤(rùn)等。預(yù)防和改善SAP合并IRI,對(duì)減輕胰腺組織壞死,阻止SIRS及MODS有重要意義。血管舒緩素(PK)作為一種活化因子,由18種氨基酸和4種糖所組成,其在人體內(nèi)逐漸降解激肽原釋放出大量激肽,激肽又對(duì)微血管和毛細(xì)血管起作用,促使二者擴(kuò)張,同時(shí)擴(kuò)大了血管網(wǎng)之間的交匯,對(duì)微血管的通透性有明顯改善作用,并增加血流量;同時(shí)可以抑制血管緊張素之間的轉(zhuǎn)化,減輕小血管收縮作用;通過改善凝血時(shí)間及抑制鈣離子,引起毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞PGI2的生成減少,減少血小板的聚集,尚可以使纖溶酶原激活成纖溶酶,降低纖維蛋白含量,預(yù)防微血管血栓形成;并能調(diào)控機(jī)體的炎癥反應(yīng)過程。本實(shí)驗(yàn)以雄性Wistar大鼠為研究對(duì)象,采用5%�；悄懰徕c逆行胰膽管注入結(jié)合脾動(dòng)脈30分鐘夾閉的方法,建立SAP合并IRI模型;并通過經(jīng)大鼠尾靜脈泵入PK的方法進(jìn)行藥物干預(yù)。應(yīng)用CHEMIX-800全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定大鼠血清AMY/LIP;以ELISA法測(cè)定大鼠血清TNF-a/IL-1β表達(dá)水平;大鼠血漿內(nèi)毒素水平以鱟試劑基質(zhì)偶氮顯色法檢測(cè);并通過胰腺組織肉眼觀察及使用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行胰腺病理評(píng)分;從四個(gè)方面檢測(cè)PK對(duì)SAP合并IRI大鼠病情的影響。胰腺微循環(huán)血流以Preflux4001雙通道激光多普勒血流儀進(jìn)行測(cè)定;胰腺微血管通透性通過伊文氏藍(lán)方法進(jìn)行測(cè)定;血液流變學(xué)改變以血液流變儀進(jìn)行測(cè)定;以流式細(xì)胞儀測(cè)定粘附因子CD18、CD54的水平;從以上四個(gè)方面探討PK對(duì)SAP合并IRI大鼠胰腺微循環(huán)影響的作用機(jī)制。方法:1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性Wistar大鼠,3-4月齡,體重300-350g,清潔級(jí),北京隆安實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖中心提供,自由飲水及進(jìn)食。2動(dòng)物分組實(shí)驗(yàn)第一部分:60只大鼠隨機(jī)分為兩大組,每大組30只。每大組大鼠再隨機(jī)分為3小組,每組10只,分別為假手術(shù)組、SAP合并IRI組,SAP合并IRI且PK干預(yù)組,所有大鼠均造模并給藥后12小時(shí)處死進(jìn)行檢測(cè)。第一組大鼠造模12小時(shí)后開腹,經(jīng)腹主動(dòng)脈采血5毫升,平均分為兩等份,一份檢測(cè)血清AMY/LIP;另一份檢測(cè)大鼠血清炎癥介質(zhì)TNF-a/IL-1β表達(dá)水平。第二組大鼠于造模12h后開腹,肉眼觀察胰腺組織大體變化;再經(jīng)腹主動(dòng)脈采血5毫升,檢測(cè)血漿內(nèi)毒素水平;最后處死大鼠,取100毫克胰腺組織,浸泡于10%福爾馬林,取出后包埋蠟塊,切成4um薄片,附于玻片并HE染色,進(jìn)行胰腺病理學(xué)評(píng)分。實(shí)驗(yàn)第二、三、四、五部分:每一個(gè)實(shí)驗(yàn)部分大鼠各30只,隨機(jī)各分為三組,每組大鼠10只,分別為假手術(shù)組、SAP合并IRI組,SAP合并IRI且PK干預(yù)組,所有大鼠均造模并給藥后12小時(shí)處死,分別檢測(cè)大鼠胰腺微循環(huán)血流;胰腺微血管通透性;血液流變學(xué);白細(xì)胞粘附因子CD18、血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子CD54表達(dá)水平。3實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕?.1 SAP合并IRI模型建立:采用改進(jìn)的Aho等的SAP造模方法,首先腹腔內(nèi)注射3%戊巴比妥鈉30mg/kg,麻醉成功后將大鼠固定于手術(shù)板,剪去腹部毛發(fā),常規(guī)消毒鋪巾。取上腹正中切口3cm逐層入腹,首先確認(rèn)十二指腸位置,片狀胰腺組織在其內(nèi)側(cè),打開十二指腸前壁并找到胰膽管。小號(hào)動(dòng)脈夾夾住肝十二指腸韌帶肝門側(cè)以阻斷膽管,于胰膽管開口處以24G針頭予以穿刺,針頭進(jìn)入胰膽管0.5cm后縫扎針頭予以固定,將針頭連接微量輸液泵,經(jīng)胰膽管逆行注入5%�；悄懰徕c,劑量0.1ml/kg,速度0.2ml/min。大約5-10min后胰腺組織充血水腫,壓迫穿刺點(diǎn)后縫合十二指腸前壁。參考Fujimoto等的IRI造模方法,SAP模型建立后,動(dòng)脈夾立即夾閉脾動(dòng)脈30min再松開,胰腺組織局部缺血,腹腔臟器復(fù)位后臨時(shí)關(guān)腹。大鼠造模前12小時(shí)禁食、4小時(shí)禁水,模型建立后立即背部皮下注入生理鹽水5毫升,允許自由飲水并注意保暖。3.2 SAP合并IRI且PK干預(yù)組模型建立:SAP合并IRI大鼠模型建立后,將大鼠四肢固定于木質(zhì)托盤上,40-45度溫水浸泡尾靜脈半分鐘,使其血管充血,擦干備用。選擇5號(hào)注射針頭,以30度角距尾尖2厘米進(jìn)針,平行向前,見回血時(shí)立即參考藥物使用說明書給藥。PK按2U/只,溶于NS 5ml,尾靜脈持續(xù)泵入注藥,連續(xù)12小時(shí)。3.3假手術(shù)組模型建立:以SAP模型建立的方法操作,不同的是逆行胰膽管注入同等劑量的生理鹽水,且物理翻動(dòng)胰腺組織,動(dòng)作重復(fù)3次,余條件相同。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)管理標(biāo)準(zhǔn)。4 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠病情變化指標(biāo)影響的檢測(cè)4.1 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠血清AMY/LIP的檢測(cè)大鼠血清AMY/LIP檢測(cè)采用全自動(dòng)生化檢:第一組大鼠造模后12h開腹,經(jīng)腹主動(dòng)脈采血5毫升,平均分為兩等份,取一份血液標(biāo)本置入密封的采血管中靜置1小時(shí),離心10分鐘(3000r/min),血清AMY/LIP以CHEMIX-800全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測(cè)定。4.2 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠血清炎癥介質(zhì)TNF-a/IL-1β表達(dá)的檢測(cè)大鼠血清炎癥介質(zhì)TNF-a/IL-1β表達(dá)通過ELISA法檢測(cè):取第一組大鼠另一份血液標(biāo)本,置入密封采血管后靜置1小時(shí),離心10分鐘(3000r/min),取血清放入-20℃冰箱中保存,待行ELISA檢測(cè),TNF-a/IL-1β水平檢測(cè)方法嚴(yán)格按試劑盒操作說明書的要求進(jìn)行。4.3 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠血漿內(nèi)毒素水平的檢測(cè)大鼠血漿內(nèi)毒素以鱟試劑基質(zhì)偶氮顯色法進(jìn)行檢測(cè):第二組大鼠造模后12小時(shí)常規(guī)開腹,首先觀察胰腺大體變化,后經(jīng)腹主動(dòng)脈采血5毫升,按照鱟試劑盒說明書要求,首先對(duì)試驗(yàn)器材進(jìn)行去熱源處理,留取標(biāo)準(zhǔn)血樣并配置試劑,吸管吸取血清0.1毫升,與0.05毫升鱟試劑均勻混合,放置于37℃水浴箱3分鐘,之后取出,并加入0.5毫升亞硝酸鈉混勻,隨后再加入0.5毫升氨基磺酸氨,最后加入0.5毫升奈乙二胺均勻混合,隨后波長(zhǎng)545納米以723分光光度計(jì)進(jìn)行比色讀數(shù)。計(jì)算公式:A=As-(Ab-Abb),求得吸光度A值后,查對(duì)內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)曲線并求得內(nèi)毒素的含量。4.4 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠胰腺病理評(píng)分的評(píng)估大鼠胰腺病理評(píng)分采用光學(xué)顯微鏡法:第二組大鼠抽血檢測(cè)血清內(nèi)毒素前,首先觀察胰腺組織大體變化;后取100毫克胰腺組織,浸泡于10%福爾馬林,取出后包埋成蠟塊并切成4微米薄片,附于玻片HE染色,在光學(xué)顯微鏡下觀察,參考Grewal的方法并加以改進(jìn),從四個(gè)方面即水腫、出血、壞死、炎性浸潤(rùn)等評(píng)分,每項(xiàng)指標(biāo)分別為0、1、2、3、4五個(gè)分值,最后匯總并計(jì)算總分。5 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠胰腺微循環(huán)血流影響的檢測(cè):各組大鼠于造模給藥后12h常規(guī)開腹,用Preflux 4001雙通道激光多普勒血流儀測(cè)定胰腺微循環(huán)血流各項(xiàng)指標(biāo),探頭口徑0.25mm,波長(zhǎng)780nm。探頭輕輕接觸胰腺組織表面,首先分別測(cè)定胰頭、胰尾處血流,之后選取胰頭-胰尾測(cè)量連線中點(diǎn)的胰體處進(jìn)行測(cè)定,避開血腫組織及胰腺大血管,取算術(shù)平均值為最終結(jié)果。具體檢測(cè)指標(biāo)包括胰腺微血管血流量、血流速度,微動(dòng)脈、微靜脈管徑,毛細(xì)血管管徑、密度、灌注等指標(biāo)。6 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠胰腺微血管通透性影響的檢測(cè):采用改進(jìn)的Keiji等方法進(jìn)行檢測(cè),各組大鼠檢測(cè)胰腺微循環(huán)血流之后,從股靜脈注入1%伊文氏蘭,劑量2ml/kg,胰腺組織30分鐘后取出,稱濕重后,取150毫克組織置入5毫升試管,按照0.03/mg加入甲酰胺。24h后取浸出液1毫升,通過分光光度計(jì)檢測(cè)伊文氏蘭的濃度,伊文氏蘭的漏出量依次計(jì)算;剩余胰腺組織剪碎,置于160度的電熱干燥箱內(nèi),24小時(shí)后予以稱重,以濕/干重之比計(jì)算150mg胰腺組織干重;微血管通透性最后以伊文氏蘭漏出量/胰腺組織干重(ug/g)表示。7 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠血液流變學(xué)影響的檢測(cè):采用BV-100血流變儀檢測(cè)大鼠血液流變學(xué)。各組大鼠模型建立后12小時(shí)常規(guī)開腹,經(jīng)腹主動(dòng)脈采血5毫升置入不凝管,均勻搖晃,置BV-100血流變測(cè)試儀送檢。檢測(cè)指標(biāo)包括全血高、中、低切邊率下、血漿粘度、全血還原粘度;紅細(xì)胞聚集指數(shù)、血沉及血沉方程K值;紅細(xì)胞變形指數(shù)及紅細(xì)胞剛性指數(shù);紅細(xì)胞壓積,纖維蛋白原。8 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠白細(xì)胞粘附因子CD18、血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子CD54表達(dá)水平影響的檢測(cè):粘附因子CD18、CD54檢測(cè)采用流式細(xì)胞儀法。各組大鼠模型建立后12小時(shí)常規(guī)開腹,經(jīng)腹主動(dòng)脈采血5毫升,EDTA抗凝,取100微升離心10分鐘,1500r/min;取3支管標(biāo)記A、B、C。A管加入20ul CD45-per CP、20ul CD18-FITC,B管加入20ul CD45-per CP、20ul CD54-PE,C管加入20ul CD45-per CP、20ul同型對(duì)照Ig G抗體,室溫避光孵育40min;3支管分別加入1毫升溶血素,混勻放置10分鐘,避光常溫,離心5分鐘800r/min;為清除未結(jié)合的抗體,去上清液再PBS洗兩次,再離心5分鐘800r/min兩次,加入多聚甲醛1g/L固定后上機(jī)檢測(cè);流式細(xì)胞儀熒光檢測(cè)變異系數(shù)首先調(diào)整,一般穩(wěn)定在2%左右,再調(diào)整光電倍增管電壓、靈敏度、閾值及顏色補(bǔ)償,此時(shí)流式細(xì)胞儀處于最佳工作狀態(tài),488納米氬離子激光為光源,FITC受激發(fā)后出現(xiàn)綠色的熒光;啟動(dòng)Elite分析軟件,分別測(cè)定中性粒細(xì)胞前向散射光及側(cè)向散射光,并測(cè)定其MFI。9統(tǒng)計(jì)方法:統(tǒng)計(jì)采用SAS8.0軟件包:大鼠血清AMY/LIP、炎癥介質(zhì)TNF-a/IL-1β、內(nèi)毒素及胰腺微循環(huán)血流、胰腺微血管通透性、血液流變學(xué)、白細(xì)胞-血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子CD18、CD54表達(dá)結(jié)果以“x±s”表示,組間顯著性差異比較采用方差分析,P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;病理評(píng)分為等級(jí)資料,組間顯著性差異比較采用Chi square test,P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果:1 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠病情指標(biāo)影響的檢測(cè)結(jié)果1.1 PK對(duì)SAP并IRI大鼠血清AMY/LIP影響的檢測(cè)結(jié)果:1.1.1與假手術(shù)組比較,SAP合并IRI模型組造模后12h,大鼠血清AMY/LIP出現(xiàn)明顯升高,AMY由123.38±30.25 u/L迅速上升至2536.47±269.43 u/L,LIP由81.47±12.25u/L迅速上升至746.36±85.32u/L,二者升高均具有顯著性差異,P0.01。1.1.2與SAP合并IRI模型組比較,SAP合并IRI且PK干預(yù)組造模后12小時(shí),大鼠血清AMY/LIP明顯降低,AMY由2536.47±269.43 u/L下降至1867.45±139.86 u/L,LIP由746.36±85.32u/L下降至568.27±108.43 u/L,二者降低均具有顯著性差異,P0.05。1.2 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠血清炎癥介質(zhì)TNF-a/IL-1β表達(dá)影響的檢測(cè)結(jié)果:1.2.1與假手術(shù)組比較,SAP合并IRI模型組造模后12h,大鼠血漿TNF-a和IL-1β表達(dá)出現(xiàn)明顯升高,TNF-a由3.91±0.41 pmol/L迅速上升至18.63±3.52pmol/L,組間差異P0.01;IL-1β由108.32±26.65 pg/ml上升至269.86±45.87 pg/ml,組間差異P0.01,二者升高均有顯著性意義。1.2.2與SAP合并IRI組模型組比較,SAP合并IRI且PK干預(yù)組造模后12h,大鼠血漿TNF-a和IL-1β表達(dá)水平出現(xiàn)一定程度的降低,TNF-a由18.63±3.52pmol/L降至15.67±3.09pmol/L,組間差異P0.05;IL-1β由269.86±45.87 pg/ml降至245.76±35.13 pg/ml,組間差異P0.05,二者降低均無顯著性意義。1.3 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠血清內(nèi)毒素表達(dá)影響的檢測(cè)結(jié)果:1.3.1與假手術(shù)組比較,SAP合并IRI模型組造模后12h,大鼠血漿內(nèi)毒素出現(xiàn)明顯升高,由23.38±3.25 EU/L迅速上升至146.67±20.43 EU/L,升高有顯著性差異,P0.01。1.3.2與SAP合并IRI組模型組比較,SAP合并IRI且PK干預(yù)組造模后12h,大鼠血漿內(nèi)毒素出現(xiàn)明顯降低,由146.67±20.43 EU/L降至127.56±22.48 EU/L,降低無顯著性差異,P0.05。1.4 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠胰腺組織病理改變影響的檢測(cè)結(jié)果:1.4.1大鼠胰腺組織改變?nèi)庋塾^察:假手術(shù)組大鼠胰腺質(zhì)地良好,無明顯水腫,胃腸道擴(kuò)張不明顯,腹腔內(nèi)無明顯腹水。SAP合并IRI組胰腺充血、水腫明顯,伴有片狀出血、局灶樣壞死及皂化斑,并出現(xiàn)血性腹水。SAP合并IRI且PK干預(yù)組胰腺組織仍有充血、水腫、片狀出血、局灶樣壞死,皂化斑,血性腹水等,但均有所緩解,尤其是片狀出血,局灶樣壞死。1.4.2光學(xué)顯微鏡下大鼠胰腺病理評(píng)分:假手術(shù)組大鼠胰腺組織水腫,但無明顯出血壞死,間質(zhì)亦無明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)。SAP合并IRI組則胰腺明顯水腫,伴有明顯的片狀出血、壞死及大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。SAP合并IRI且PK干預(yù)組大鼠胰腺仍有水腫及片狀出血、壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)等表現(xiàn),但均出現(xiàn)一定程度的改善。2 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠胰腺微循環(huán)影響的檢測(cè)結(jié)果:2.1 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠胰腺微血管血流量及血流速度影響的檢測(cè)結(jié)果:2.1.1與空白對(duì)照組比較,SAP并IRI組造模后12小時(shí),胰腺微循環(huán)血流量由355.72±26.07下降至263.31±20.95,胰腺微循環(huán)血流速度由101.91±11.81下降至76.63±14.79,血流量組間差異P0.01,血流速度組間差異P0.05,組間比較有顯著性差異。2.1.2與SAP并IRI組比較,PK處理組胰腺微循環(huán)血流量由263.31±20.95上升至307.37±30.23,胰腺微循環(huán)血流速度由76.63±14.79上升至88.42±13.32,組間差異P0.05。2.2.PK對(duì)SAP合并IRI大鼠胰腺微動(dòng)脈及微靜脈管徑影響的檢測(cè)結(jié)果:2.2.1與空白對(duì)照組比較,SAP并IRI組造模后12h,胰腺微動(dòng)脈管徑由17.72±4.07 um下降至8.31±3.05 um,組間差異P0.01;胰腺微靜脈管徑由24.91±3.81um下降至23.63±3.79um,組間差異P0.05。2.2.2與SAP并IRI組比較,PK處理組造模后12h后,胰腺微動(dòng)脈管徑由8.31±3.05um上升至12.46±4.33um,組間差異P0.05;胰腺微靜脈管徑由23.63±3.79um上升至24.67±4.12um,組間差異P0.05。2.3.PK對(duì)SAP合并IRI大鼠胰腺毛細(xì)血管管徑、密度、灌注影響的檢測(cè)結(jié)果:2.3.1與空白對(duì)照組比較,SAP并IRI組造模后12h,胰腺毛細(xì)血管管徑出現(xiàn)變細(xì),由5.72±1.07 um下降至3.11±1.15um;毛細(xì)血管密度降低,由426.91±23.81下降至297.63±14.79;二者比較有顯著性差異,P0.01;毛細(xì)血管灌注形式由穩(wěn)定變?yōu)殚g歇不規(guī)則。2.3.2與SAP并IRI組比較,PK處理組造模后12h后,胰腺毛細(xì)血管管徑出現(xiàn)增粗,由3.11±1.15um上升至4.13.±1.21um;毛細(xì)血管密度增加,由297.63±14.79上升至355.16±27.65;二者比較有顯著性差異,P0.05,;毛細(xì)血管灌注形式雖略有好轉(zhuǎn),仍為間歇不穩(wěn)定。3.PK對(duì)SAP合并IRI大鼠胰腺微血管通透性影響的檢測(cè)結(jié)果:3.1與假手術(shù)組比較,SAP合并IRI模型組造模后12小時(shí)后,胰腺微血管通透性明顯增強(qiáng),由92.47±14.64 ug/g急速上升至986.42±138.72ug/g,組間差異P0.01,有顯著性意義。3.2與SAP合并IRI模型組比較,PK處理組胰腺微血管通透性明顯降低,由986.42±138.72ug/g下降至705.23±96.63ug/g,組間差異P0.05,有顯著性意義。4 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠血液流變學(xué)影響的檢測(cè)結(jié)果4.1 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠血液粘度影響的檢測(cè)結(jié)果:4.1.1與假手術(shù)組比較,SAP合并IRI組大鼠造模12小時(shí)血液低、中、高切邊率下全血粘度,血漿粘度,低、高切邊率下全血還原粘度均明顯上升,分別由6.45±0.47上升至9.67±0.38,3.64±0.34上升至4.75±0.48,3.17±0.31上升至4.29±0.38,1.06±0.08上升至1.65±0.13,5.47±0.42上升至8.79±0.61,3.17±0.31上升至4.29±0.38,組間比較有顯著性差異,P0.05。4.1.2與SAP合并IRI組比較,PK處理組造模12小時(shí)血液低、中、高切邊率下全血粘度,血漿粘度,低、高切邊率下全血還原粘度全面下降,分別由9.67±0.38下降至7.75±0.51,由4.75±0.48下降至4.12±0.41,由4.29±0.38下降至3.68±0.29,由1.65±0.13下降至1.32±0.10,由8.79±0.61下降至7.25±0.51,由4.29±0.38下降至3.68±0.29,組間差異均P0.05,組間差異有顯著性意義。4.2 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠紅細(xì)胞聚集性影響的檢測(cè)結(jié)果:4.2.1與假手術(shù)組比較,SAP合并IRI組大鼠造模12小時(shí)紅細(xì)胞聚集指數(shù)、血沉、血沉方程K值上升,分別由2.13±0.15上升至2.41±0.11,3.98±1.15上升至6.21±1.94,9.42±1.44上升至16.48±3.38,組間差異均P0.05,組間差異有顯著性意義。4.2.2與SAP合并IRI組比較,PK處理組造模12小時(shí)紅細(xì)胞聚集指數(shù)、血沉、血沉方程K值下降,分別由2.41±0.11下降至2.23±0.14,由6.21±1.94下降至4.82±1.36,由16.48±3.38下降至12.23±2.63,組間差異均P0.05,組間差異有顯著性意義。4.3 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠紅細(xì)胞變形性影響的檢測(cè)結(jié)果:4.3.1與假手術(shù)組比較,SAP合并IRI組大鼠造模12小時(shí)紅細(xì)胞變形指數(shù)、紅細(xì)胞剛性指數(shù)上升,分別由0.78±0.15上升至1.98±0.34,2.21±0.15上升至4.78±0.24,組間比較有顯著性差異,P0.05。4.3.2與SAP合并IRI組比較,PK處理組造模12小時(shí),紅細(xì)胞變形指數(shù)、紅細(xì)胞剛性指數(shù)下降,分別由1.98±0.34下降至1.28±0.22,由4.78±0.24下降至4.02±0.16,組間比較有顯著性差異,P0.05。4.4 PK對(duì)SAP合并IRI大鼠紅細(xì)胞壓積及纖維蛋白原影響的檢測(cè)結(jié)果:4.4.1與假手術(shù)組比較,SAP并IRI組大鼠造模12小時(shí)紅細(xì)胞壓積及纖維蛋白原上升,分別由38.13±4.15上升至52.45±3.23,3.16±0.25上升至6.46±1.34,組間比較有顯著性差異,P0.05。4.4.2與SAP并IRI組比較,PK處理組造模12小時(shí),紅細(xì)胞壓積及纖維蛋白原下降,分別由52.45±3.23下降至42.27±3.54,由6.46±1.34下降至4.82±1.08,組間比較有顯著性差異,P0.05。5、PK對(duì)SAP合并IRI大鼠血清CD18、CD54影響的檢測(cè)結(jié)果5.1與假手術(shù)組比較,SAP合并IRI模型組造模后12小時(shí)后,大鼠血清CD18、CD54分別由7.67±1.23上升至29.67±5.23,9.35±2.47上升至31.15±9.36,組間差異P0.01,有顯著性意義。5.2與SAP合并IRI模型組比較,PK處理組血清CD18、CD54分別由29.67±5.23下降至20.67±4.29,31.15±9.36下降至24.19±6.26,組間差異P0.05,有顯著性意義。結(jié)論:1逆行經(jīng)胰膽管泵入5%�；悄懰徕c制備SAP大鼠動(dòng)物模型,方法穩(wěn)定可靠,可操作性強(qiáng),胰腺病理變化典型。2在SAP大鼠模型建立基礎(chǔ)之上,阻斷脾動(dòng)脈30 min再開放的方法制備IRI大鼠模型,穩(wěn)定性高,全身情況影響小,血清酶學(xué)改變及胰腺病理改變符合實(shí)驗(yàn)要求。3 SAP合并IRI大鼠血清AMY/LIP明顯升高,使用PK干預(yù)后血清AMY/LIP明顯降低,表明PK可以降低SAP合并IRI大鼠血清酶學(xué)水平。4 SAP合并IRI大鼠血清TNF-a及IL-lβ的水平明顯升高,使用PK干預(yù)后血清TNF-a及IL-lβ的水平有所降低,但降低水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明PK不能減輕SAP合并IRI大鼠血漿炎癥介質(zhì)水平。5 SAP合并IRI大鼠血清內(nèi)毒素水平明顯升高,PK干預(yù)后血清內(nèi)毒素水平雖然略有降低,但降低無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,說明PK不能減輕SAP合并IRI大鼠血漿內(nèi)毒素水平。6 SAP合并IRI大鼠胰腺組織水腫、出血、壞死、炎細(xì)胞浸潤(rùn)均較重,使用PK干預(yù)后,大鼠肉眼及顯微鏡下胰腺組織病理均得到改善,表明PK是緩解SAP合并IRI大鼠胰腺炎癥的有效手段。7 PK可以明顯改善SAP合并IRI大鼠胰腺微循環(huán)血流量及血流速度;擴(kuò)張微動(dòng)脈;擴(kuò)張胰腺毛細(xì)血管管徑,升高其分布密度,使其灌注狀態(tài)趨于穩(wěn)定,起到改善胰腺微循環(huán)的作用。8 PK可以明顯改善SAP合并IRI大鼠胰腺微血管通透性,從而起到減少胰腺間質(zhì)及周圍組織的滲出的作用。9 PK可以明顯改善SAP合并IRI大鼠全血高、中、低切邊率下、血漿粘度、全血還原粘度;紅細(xì)胞聚集指數(shù)、血沉及血沉方程K值;紅細(xì)胞變形指數(shù)及剛性指數(shù);紅細(xì)胞壓積,纖維蛋白原,從而起到減少改善胰腺微循環(huán)血流,預(yù)防胰腺微循環(huán)血栓的作用。10 PK可以明顯改善SAP合并IRI大鼠白細(xì)胞粘附因子CD18、血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子CD54表達(dá)水平,從而起到減少白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附的作用,進(jìn)而減輕了SAP大鼠胰腺組織壞死,對(duì)緩解局部及全身炎癥反應(yīng)綜合征都有裨益。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R576

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1564725