本文關(guān)鍵詞：LPS通過激活TLR4誘導(dǎo)人肝內(nèi)膽管上皮細胞上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化

  更多相關(guān)文章： 脂多糖 Toll樣受體4 人肝內(nèi)膽管上皮細胞 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化 Snail

【摘要】：目的:研究Toll樣受體4(TLR4)在脂多糖(LPS)誘導(dǎo)人肝內(nèi)膽管上皮細胞(HIB ECs)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)中的作用及核轉(zhuǎn)錄因子Snail是否與參與該過程的調(diào)控。方法:體外培養(yǎng)人肝內(nèi)膽管上皮細胞,CON+LPS組加終濃度為2ug/ml的LPS誘導(dǎo)72h,CON組不作處理作為對照。倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化;Real-time PC R檢測上皮標記物E-cadherin,間質(zhì)標記物N-cadherin、Vimentin,TLR4、核轉(zhuǎn)錄因子Snailm RNA表達量;Western blot檢測以上各指標蛋白表達量;Transwell細胞遷移實驗評估各組細胞移動能力。KD+LPS組構(gòu)建TLR4 si RNA慢病毒載體,采用RN A干擾技術(shù)沉默HIBECs中TLR4,NC+LPS組空白病毒轉(zhuǎn)染作為對照,轉(zhuǎn)染72h后分別予終濃度為2ug/ml的LPS誘導(dǎo),72h后通過上述方法觀察慢病毒轉(zhuǎn)染對LPS誘導(dǎo)的細胞形態(tài)改變,TLR4、Snail、上皮間質(zhì)標記物基因表達改變的影響。結(jié)果:1.LPS誘導(dǎo)HIBECs 72h,CON+LPS組細胞由上皮向間葉樣細胞形態(tài)改變;與CON組相比,CON+LPS組上皮標記物E-cadherin m RNA表達下調(diào)(P0.05),間質(zhì)標記物N-cadherin、Vimentin m RNA表達上調(diào)(P0.05,P0.05);上述指標蛋白水平表達趨勢與m RNA一致;兩組細胞轉(zhuǎn)移率無差異(P0.05);提示:LPS可誘導(dǎo)HIB ECS發(fā)生EMT。2.CON+LPS組TLR4 m RNA表達量高于CON組(P0.05);蛋白水平表達前者較高;提示:LPS可導(dǎo)致HIBECs中TLR4表達增加。3.CON+LPS組Snail m RNA表達量高于CON組(P0.05);蛋白水平表達前者較高;提示:LPS可導(dǎo)致HIBECs中Snail表達增加。4.KD+LPS組TLR4 Si RNA慢病毒轉(zhuǎn)染HIBECs,TLR4 m RNA表達量較NC+L PS組降低(P0.05);蛋白水平表達量前者較低。提示:TLR4Si RNA慢病毒轉(zhuǎn)染能減弱LPS誘導(dǎo)HIBECs中TLR4基因表達上調(diào)。5.沉默HIBECs中TLR4,KD+LPS組Snail m RNA表達量較NC+LPS組降低(P0.05)。蛋白水平表達前者較低。提示:沉默TLR4能減弱LPS誘導(dǎo)HIBECs中Sn ail基因表達上調(diào)。6.沉默HIBECs中TLR4,KD+LPS組細胞由上皮向間葉樣細胞形態(tài)改變不明顯。與NC+LPS組比較,KD+LPS組上皮標記物E-cadherin m RNA表達較高(P0.05),間質(zhì)標記物N-cadherin、Vimentin m RNA表達較低(P0.05,P0.05)。兩組上述指標蛋白水平表達趨勢與m RNA表達一致。提示:沉默TLR4能阻斷LPS誘導(dǎo)HIBEC s發(fā)生EMT。結(jié)論:1.LPS通過激活TLR4誘導(dǎo)HIBEC發(fā)生EMT;2.LPS誘導(dǎo)HIBECs發(fā)生EMT可能受轉(zhuǎn)錄因子Snail調(diào)控。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575.62

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