本文關(guān)鍵詞：LPS在大鼠肝星狀細(xì)胞介導(dǎo)肝纖維化的作用及機(jī)制研究

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【摘要】：背景和目的:肝纖維化是各種慢性肝病進(jìn)展為肝硬化、甚至肝癌的重要階段。隨著對(duì)腸源性?xún)?nèi)毒素血癥與肝纖維化發(fā)生之間關(guān)系的深入研究,內(nèi)毒素脂多糖(lipopolyssacharide,LPS)在慢性肝病進(jìn)展過(guò)程中的作用倍受關(guān)注。然而,內(nèi)毒素LPS在肝臟疾病的確切致病機(jī)制仍未完全闡明。最近,我們的研究發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期酒精喂養(yǎng)大鼠門(mén)靜脈LPS升高,其在酒精性肝纖維化發(fā)生學(xué)中發(fā)揮重要作用。本研究旨在通過(guò)對(duì)SD大鼠尾靜脈反復(fù)注射內(nèi)毒素LPS,以期進(jìn)一步闡明內(nèi)毒素LPS單因素在大鼠肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cells,HSC)介導(dǎo)肝纖維化發(fā)生中的作用及機(jī)制。方法:將24只體重120g±20g SD雄性大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(n=12)與內(nèi)毒素組(n=12)。兩組大鼠均接受Lieber-Decarli配方的液體飼料喂養(yǎng)至10周末,其中LPS組于喂養(yǎng)8周末開(kāi)始每周經(jīng)尾靜脈注射LPS一次(3 mg/kg),共3次,對(duì)照組注射生理鹽水1ml。采用光度法檢測(cè)大鼠門(mén)靜脈血漿LPS濃度。ELISA法測(cè)定大鼠肝臟I型膠原A1和羥脯氨酸的含量。免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)大鼠肝組織F4/80和FSP-1分別識(shí)別激活的庫(kù)普弗細(xì)胞(Kupffer cells,KC)和HSC;免疫熒光雙染技術(shù)檢測(cè)FSP-1陽(yáng)性HSC表達(dá)TLR4和F4/80陽(yáng)性KC表達(dá)TLR4或TGF-β1。采用RT-q PCR檢測(cè)大鼠肝組織IL-1、IL-6、TNF-α和TGF-β1 m RNA。采用HE染色和苯胺藍(lán)染色法評(píng)價(jià)肝臟炎癥反應(yīng)和纖維化程度。采用Collagenase-Pronase消化法分離大鼠HSC,建立HSC過(guò)渡模型,評(píng)價(jià)LPS在TGF-β1作用下大鼠HSC介導(dǎo)肝臟纖維化發(fā)生中的作用及機(jī)制。采用Western Blot檢測(cè)HSC Collagen I、Bambi和p Smad2表達(dá);RT-q PCR法檢測(cè)HSC Collagen I和Bambi m RNA表達(dá)。結(jié)果:與正常對(duì)照組相比反復(fù)LPS注射組大鼠肝組織存在明顯的水腫及炎細(xì)胞浸潤(rùn),肝組織致炎癥因子IL-1、IL-6、TNF-αm RNA和纖維源性因子TGF-β1 m RNA轉(zhuǎn)錄水平明顯升高,肝組織膠原沉積面積明顯增大,反映肝組織膠原合成增加的I型膠原A1和脯氨酸含量也明顯增加。免疫熒光雙染結(jié)果顯示:FSP-1陽(yáng)性HSC和F4/80陽(yáng)性KC均可表達(dá)TLR4受體,反復(fù)內(nèi)毒素LPS注射可激活肝組織HSC和KC表達(dá)TLR4受體增加,也可使KC表達(dá)TGF-β1增加。在原代HSC研究發(fā)現(xiàn):LPS可抑制TGF-β1偽受體Bambi m RNA和蛋白質(zhì)表達(dá),使得TGF-β1刺激HSC合成Colagen Im RNA和蛋白質(zhì)的功能增強(qiáng),然而,LPS對(duì)HSC的TGF-β1/Smad2通路沒(méi)有作用。結(jié)論:內(nèi)毒素LPS可激活肝臟HSC和KC內(nèi)TLR4信號(hào)通路,合成致炎性因子和纖維源性因子TGF-β1。LPS還通過(guò)降低HSC Bambi表達(dá)水平,協(xié)同TGF-β1合誘導(dǎo)HSC合成I型膠原,促進(jìn)肝纖維化。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R575.2

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