本文關(guān)鍵詞：Wip1基因敲除對急性肝損傷的影響及其機(jī)制研究

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【摘要】：研究背景：肝臟作為人體內(nèi)最大的器官,構(gòu)成體重的2.5%。肝臟的血液供應(yīng)占全部血液循環(huán)的25%,分別通過門靜脈和肝動(dòng)脈流入肝門,其中前者貢獻(xiàn)了肝臟全部血供的75-80%和全部氧供的50%。熱缺血再灌注損傷是臨床中非常常見的急性肝損傷,肝臟手術(shù)中經(jīng)常應(yīng)用的Pringle manoeuvre是造成熱缺血再灌注損傷的主要原因。目前研究發(fā)現(xiàn),肝臟缺血再灌注損傷受到眾多調(diào)控機(jī)制的共同作用,包括血竇內(nèi)皮細(xì)胞和NO共同介導(dǎo)的血竇內(nèi)壓力改變、Kupffer細(xì)胞介導(dǎo)的固有免疫反應(yīng)[2,3]以及ATP耗竭介導(dǎo)的肝細(xì)胞壞死和caspase介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡等。Akt是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶,在調(diào)控細(xì)胞凋亡、自噬、生長和再生及蛋白質(zhì)合成方面發(fā)揮重要調(diào)控作用,已有研究發(fā)現(xiàn)PI3K/Akt激活的下游凋亡和自噬通路調(diào)控肝臟缺血再灌注[8],同時(shí)也有研究發(fā)現(xiàn)Rapamycin抑制nTORCl功能從而激活mTORC2-Akt通路從而減輕肝臟缺血再灌注損傷。Wip1 (Wild-type p53 induced phosphatase 1)是一種絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶,研究發(fā)現(xiàn)其在機(jī)體免疫調(diào)控看、炎癥發(fā)生過程中發(fā)揮作用,但目前尚無研究報(bào)道Wipl在肝臟缺血再灌注過程中的作用。本研究利用2/3肝臟熱缺血再灌注模型研究wip1基因在急性肝損傷中的作用,并初步探索Wip1對于肝臟缺血再灌注影響的機(jī)制。研究方法：1.將129sv背景的wip1基因敲除小鼠和C57BL/6背景的野生型小鼠進(jìn)行雜交,以獲得C57BL/6純合背景的wip1基因雜合小鼠,并進(jìn)一步獲得wip1基因敲除小鼠。2.10～14周齡wip1基因敲除小鼠作為實(shí)驗(yàn)組小鼠,同窩同性別小鼠作為對照組小鼠,建立2/3肝臟熱缺血再灌注模型,缺血時(shí)間為60min、90min,術(shù)后6h、24h提取小鼠血液和肝臟,測血清ALT水平,HE染色觀察組織學(xué)改變,TUNEL染色統(tǒng)計(jì)細(xì)胞凋亡率,Western Blot檢測肝組織Wip1、Akt、mTOR、p70 S6K、S6蛋白及相應(yīng)磷酸化水平的改變,RT Real-time PCR檢測肝組織wipl基因轉(zhuǎn)錄水平的改變。結(jié)果：1.缺血60min,再灌注6h后,小鼠血清ALT水平分別為：野生型小鼠1172.5±237.1U/L,wipl-/-小鼠851.3±270.9U/L(P0.01):假手術(shù)組小鼠ALT水平分別為：野生型小鼠44.3±11.3U/L,wip1-/-小鼠56.6±12.9U/L(p=0.369).與同窩對照野生型小鼠相比,wipl基因敲除小鼠肝臟損傷輕。2.缺血90min,再灌注24h后,小鼠肝組織石蠟切片HE染色結(jié)果為：野生型小鼠Suzuki評分為7.75±0.43,wip1-/-小鼠為5.25±0.43(P0.01)。與同窩對照野生型小鼠相比,wip1基因敲除小鼠組織病理學(xué)改變輕。3.缺血90min,再灌注24h后,小鼠肝組織石蠟切片TUNEL染色結(jié)果為：野生型小鼠凋亡率約為62.3%±5.6%,wipl-/-小鼠約為30.4%±3.7%(P0.01)。與同窩對照野生型小鼠相比,wip1基因敲除小鼠凋亡率低。4.缺血90min,再灌注6h后,野生型小鼠肝組織Wip1蛋白表達(dá)量有所下降；與同窩對照野生型小鼠相比,wip1-/-小鼠肝組織mTOR.phosph0-mTOR(Ser2448).Akt、S6蛋白水平無顯著差異,phospho-Akt(Ser473).phospho-p70S6K(Thr389)蛋白水平明顯升高,phospho-S6(Ser235/236)蛋白水平有所升高,phospho-mTOR(Ser2481)蛋白水平較損傷前有所下降。結(jié)論：wip1基因敲除后肝臟缺血再灌注損傷減輕,可能與Wip1敲除后促進(jìn)P13K/Akt/mTOR通路進(jìn)一步激活,并通過下游蛋白對細(xì)胞凋亡的調(diào)控完成。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R575.3
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本文編號：1203936