不同膳食模式對NAFLD大鼠肝臟炎性細胞因子影響
本文關鍵詞:不同膳食模式對NAFLD大鼠肝臟炎性細胞因子影響
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【摘要】:研究目的通過建立非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠模型,分時點檢測血清及肝臟組織中炎性因子IL-1β,IL-18,NLRP3,Caspase-1的變化情況,并對檢測腸道糞便中的大腸桿菌和乳酸桿菌的構成變化情況進行分析,從而探討飲食因素對NAFLD發(fā)病的影響以及NAFLD的發(fā)病機制。研究方法選購6周齡,體重140-180g健康清潔級雄性SD大鼠。經過一周適應性飼養(yǎng)后,大鼠被隨機分成2組:正常對照組和造模組,對照組給予普通飼料,造模組給予高脂飼料。8w后根據血清生化指標和肝臟病理學結果確定造模情況。隨后將造模組隨機分為4種膳食模式:高脂組、高蛋白組、高糖組和普通組,分別于12w,16w處死大鼠。采用ELISA法檢測血清中IL-1β,IL-18的濃度水平。實時熒光定量PCR法檢測肝臟組織中IL-1β,IL-18,NLRP3,Caspase-1m RNA轉錄水平。Western blot法檢測肝臟組織中NLRP3和Caspase-1蛋白表達水平。提取糞便細菌DNA通過實時熒光定量PCR法檢測大腸桿菌和乳酸桿菌的表達水平變化。結果1.造模結果本研究中,4,8周造模組大鼠的體重、肝濕重、肝臟器系數明顯高于同期對照組;4,8周造模組血清中ALT,AST,TC,TG較同期對照組明顯升高,HDL-C明顯降低;8周肝臟HE染色和電鏡結果均表明造模組的肝組織脂質沉積增加,表明長期的高脂飲食可誘發(fā)肝臟的脂肪變性。實驗結果顯示8周高脂飲食誘導的NAFLD大鼠模型成功。2.不同飲食干預結果1)血清生化指標檢測結果與同期正常對照組相比,各飲食干預組血清ALT,AST水平均升高,HDL-C水平降低;高脂、高糖和普通組血清TC,TG水平較同期對照組高,而高蛋白組TC,TG水平較同期對照組降低,差異有統計學意義(P0.05)。與同期普通組相比,高脂、高蛋白和高糖組血清ALT,AST水平升高,HDL-C水平降低;高脂和高糖組血清TC,TG水平較同期普通組高,而高蛋白組TC,TG水平較同期普通組降低,差異有統計學意義(P0.05)。2)血清IL-1β,IL-18濃度水平與同期正常對照組及普通組相比,高脂、高蛋白和高糖組血清IL-1β,IL-18表達水平均升高,差異有統計學意義(P0.05)。3)肝臟IL-1β,IL-18,NLRP3,Caspase-1 m RNA轉錄水平與同期正常對照組及普通組相比,高脂、高蛋白和高糖組IL-1β,IL-18,NLRP3,Caspase-1 m RNA的轉錄水平均升高;與同期正常對照組相比,普通組IL-1β,IL-18,NLRP3 m RNA轉錄升高,Caspase-1 m RNA轉錄降低,差異有統計學意義(P0.05)。4)肝臟NLRP3和Caspase-1的蛋白表達水平結果顯示:正常對照組和普通組的NLRP3和Caspase-1蛋白表達較少,普通組的NLRP3蛋白表達較正常對照組增加,并且差異有統計學意義(P0.05)。而普通組Caspase-1蛋白表達較正常對照組減少,差異無統計學意義(P0.05)。與正常對照組和普通組相比,NLRP3和Caspase-1蛋白在高脂、高蛋白和高糖組中表達均增加,有明顯的上升趨勢,并且差異有統計學意義(P0.05)。5)肝臟組織病理結果光鏡下HE染色顯示,正常對照組肝小葉結構完整,細胞中央有大而圓的核,細胞質均勻;普通組尚可見肝小葉結構,部分細胞水腫,并可見少量脂滴空泡,呈輕度脂變;高脂、高蛋白和高糖組肝小葉結構紊亂,肝細胞廣泛腫脹,呈氣球樣變,細胞質內可見大小不等的脂滴空泡。12周肝組織呈中-重度脂變,16周肝組織均呈重度脂變,并可見肝細胞破壞和少量炎癥細胞散在浸潤。6)糞便標本細菌定量結果與同期正常對照組和普通組比較,高脂、高蛋白和高糖組的大腸桿菌均顯著升高,乳酸桿菌明顯減少。差異有統計學意義(P0.05)。結論1.高脂飼料喂養(yǎng)8周后可成功建立NAFLD大鼠模型,提示長期的高脂飲食可誘發(fā)肝臟的脂肪變性。2.高脂、高蛋白和高糖組的血清炎癥因子IL-18,IL-1β均明顯升高,肝組織炎癥因子IL-1β,IL-18,NLRP3,Caspase-1 m RNA轉錄水平均升高,肝組織NLRP3,Caspase-1蛋白表達均呈上升趨勢。表明IL-1β,IL-18,NLRP3,Caspase-1參與了NAFLD發(fā)生發(fā)展過程中的慢性炎癥反應。3.高脂、高蛋白和高糖組中大腸桿菌顯著升高,乳酸桿菌明顯減少,提示NAFLD發(fā)生發(fā)展過程中可能存在腸道菌群結構失調。同時提示腸道菌群失調可能參與NAFLD炎癥的發(fā)生發(fā)展過程。4.不合理的飲食結構均可加重NAFLD的發(fā)展,高脂肪、高蛋白和高碳水化合物是NAFLD患病的危險膳食因素。
【學位授予單位】:安徽醫(yī)科大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2016
【分類號】:R575
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,本文編號:1200598
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