本文關(guān)鍵詞：SPT抑制劑多球殼菌素對(duì)油酸誘導(dǎo)的HSC凋亡及自噬的影響

  更多相關(guān)文章： 絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶 多球殼菌素 肝星狀細(xì)胞 凋亡 自噬

【摘要】：目的:探討多球殼菌素阻斷神經(jīng)酰胺從頭合成途徑關(guān)鍵酶絲氨酸棕櫚酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶(Serine palmitoyl-CoA transferase SPT)對(duì)油酸誘導(dǎo)肝星狀細(xì)胞凋亡與自噬的影響。方法:體外培養(yǎng)HSC-T6細(xì)胞,應(yīng)用不同濃度的油酸((0 uM、50uM、100 uM、200 uM、400 uM、600uM)培養(yǎng)HSC-T6細(xì)胞24h,采用MTT法檢測(cè)HSC-T6細(xì)胞的增殖活力。篩選出能抑制HSC-T6細(xì)胞增殖發(fā)揮抑制作用且無(wú)明顯細(xì)胞毒性的最適濃度(100 uM),進(jìn)入下一步實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、油酸處理組(OA組)和不同濃度(50、100、150umol/L)Myriocin組,除對(duì)照組外,其余組均予以油酸(100umol/L)共培養(yǎng)HSC-T6細(xì)胞24h。1、利用MTT法檢測(cè)HSC-T6細(xì)胞的增殖活力。2、通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HSC-T6細(xì)胞凋亡率。3、MDC染色法,觀察熒光顯微鏡下HSC-T6細(xì)胞自噬溶酶體形態(tài)改變。4、利用Real-time PCR檢測(cè)SPTLC2mRNA的表達(dá)。5、利用Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax的表達(dá)。6、利用Western blot檢測(cè)HSC-T6細(xì)胞的標(biāo)志性自噬蛋白Atg5、Beclin-1、LC3B的表達(dá)。結(jié)果:1、油酸抑制HSC-T6細(xì)胞增殖,且具有濃度依賴(lài)性。2、正常對(duì)照組、油酸處理組及不同濃度(50、100、150umol/L)Myriocin作用于HSC-T6細(xì)胞,多球殼菌素組HSC-T6細(xì)胞凋亡率高于正常對(duì)照組(P0.05),但低于油酸處理組(P0.05),且具有濃度依賴(lài)性。3、熒光顯微鏡結(jié)果表明:與對(duì)照組相比,油酸組及多球殼菌素組的自噬溶酶體明顯增多,前者較明顯;油酸組及多球殼菌素組相比,后者的自噬溶酶體明顯減少,且具有濃度依賴(lài)性。4、與正常對(duì)照組比,油酸處理組SPTLC2mRNA表達(dá)水平增高具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),加入Myriocin后,SPTLC2mRNA表達(dá)水平較油酸處理組下降(P0.05),且具有濃度依賴(lài)性。5、與正常對(duì)照組相比,油酸上調(diào)促凋亡蛋白,Bax表達(dá)明顯增加(P0.01),而抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)則明顯下降(P0.01),多球殼菌素處理后可逆轉(zhuǎn)油酸對(duì)HSC-T6細(xì)胞的促凋亡作用,且具有濃度依賴(lài)性。6、正常對(duì)照組、油酸處理組及不同濃度(50、100、150umol/L)Myriocin組作用于HSC-T6細(xì)胞,多球殼菌素組自噬標(biāo)志蛋白Atg5、Beclin-1、LC3B明顯低于油酸處理組,且具有濃度依賴(lài)性,但高于正常對(duì)照組(P0.05)。結(jié)論:SPT抑制劑多球殼菌素可抑制油酸誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞的凋亡及自噬。
【關(guān)鍵詞】：絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶 多球殼菌素 肝星狀細(xì)胞 凋亡 自噬
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R575.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 英文縮略詞表12-14
• 第1章 引言14-18
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料18-22
• 第3章 實(shí)驗(yàn)方法22-28
• 第4章 結(jié)果28-36
• 第5章 討論36-42
• 第6章 結(jié)論42-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 綜述 自噬與慢性肝炎病毒感染的研究進(jìn)展48-58
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 碩士期間撰寫(xiě)論文及獲獎(jiǎng)情況58-60
• 致謝60

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本文編號(hào)：1129515