本文關(guān)鍵詞：Hic-5基因與大鼠膽管纖維化關(guān)系的研究

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【摘要】：目的:膽管纖維化作為一種膽管損傷修復(fù)的必經(jīng)階段,纖維化的輕重程度直接決定了修復(fù)后的膽管組織功能的恢復(fù)情況。致纖維化的各種因子的表達及其互相間的調(diào)控關(guān)系對組織纖維化的發(fā)生發(fā)展起著至關(guān)重要的作用。本實驗主要通過對3個不同分組(對大鼠膽管進行鉗夾制作膽管纖維化模型手術(shù)組、僅進行大鼠腹部切開探查膽管,再縫合,不進行膽管鉗夾的假手術(shù)組、正常飼喂不進行任何處理的正常組)大鼠模型的研究,收集3個組中大鼠的膽管組織標(biāo)本進行HE和Masson染色,光鏡下觀察膽管組織的纖維化情況;進行PCR檢測3個組中膽管組織的Hic-5、TGF-β1的m RNA表達高低情況;免疫組織化學(xué)及Western-blot檢測3個組中膽管組織標(biāo)本中Hic-5、TGF-β1的表達量的高低;通過以上方法來探究Hic-5基因在大鼠膽管纖維化中的作用機制。方法:1、選取4-6周齡SD級雌性大鼠30只,隨機分為3組:對大鼠膽管進行鉗夾90min制作膽管纖維化模型的手術(shù)組;僅進行大鼠腹部切開后探查膽管再縫合,不進行膽管鉗夾的假手術(shù)組;正常飼喂不進行任何處理的正常組。造模后予以同樣的飼喂方法,繼續(xù)飼養(yǎng)21d,處死后分別摘取3個不同分組的大鼠膽管組織。2、將摘取的大鼠膽管組織進行HE和Masson染色病理檢測,染色后的組織置于光鏡下,觀察3個組的大鼠膽管組織中纖維化的變化情況。3、PCR檢測不同組的大鼠膽管組織中Hic-5、TGF-β1的m RNA表達水平。4、免疫組織化學(xué)法及Western blot法檢測大鼠膽管組織Hic-5、TGF-βl的蛋白表達情況。結(jié)果:(1)行為學(xué)上的觀察結(jié)果顯示:正常組的大鼠精力充沛,活動靈敏,皮毛光滑,飲食正常。假手術(shù)組大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)除活動度稍差,進食量相對較少,余無明顯的異常。手術(shù)組大鼠靈敏度相對較低,警惕性較差,精神不佳,皮毛干燥發(fā)黃,進食量和飲水量均較正常組和假手術(shù)組低。(2)HE染色結(jié)果:正常組大鼠膽管的膽管上皮細(xì)胞排列整齊,形態(tài)完整,無纖維條梭狀結(jié)構(gòu)和炎癥細(xì)胞的浸潤;鏡下觀,假手術(shù)組的大鼠膽管上皮細(xì)胞排列整齊,形態(tài)正常,可見極少量的纖維條梭狀結(jié)構(gòu);膽管鉗夾組鏡下發(fā)現(xiàn)膽管上皮細(xì)胞排列紊亂,形態(tài)不規(guī)則,可見大量的纖維條梭狀結(jié)構(gòu)。(3)Masson染色結(jié)果:正常組和假手術(shù)組大鼠膽管未見明顯的藍色條梭狀染色結(jié)構(gòu),而手術(shù)組的膽管上可見明顯的藍色的條梭狀結(jié)果即為纖維條梭組織。(4)PCR分析各組間Hic-5、TGF-β1表達結(jié)果:膽管鉗夾手術(shù)組的Hic-5、TGF-β1的m RNA表達明顯呈現(xiàn)出高表達狀態(tài),Hic-5、TGF-β1的m RNA表達水平:正常組和假手術(shù)組的表達均較低,手術(shù)組與正常組和假手術(shù)組比較,表達明顯增高(P0.05),正常組和假手術(shù)組比較,差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(5)免疫組織化學(xué)顯示:在大鼠膽管鉗夾的手術(shù)組中可見大量的Hic-5、TGF-β1的蛋白表達,大量的陽性染色顆粒分布區(qū)域主要集中在膽管周圍,均多于正常組和假手術(shù)組,而正常組和假手術(shù)組的陽性表達均較少。將手術(shù)組的Hic-5和TGF-β1陽性表達面積進行統(tǒng)計學(xué)分析,結(jié)果顯示兩組具有相關(guān)性。(6)Western blot分析結(jié)果顯示,膽管鉗夾的手術(shù)組Hic-5、TGF-β1的蛋白表達明顯呈現(xiàn)高表達,而正常組和假手術(shù)組的蛋白表達水平均偏低,手術(shù)組與正常組和假手術(shù)組比較,Hic-5、TGF-β1的蛋白表達明顯增高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),假手術(shù)組和正常組的Hic-5、TGF-β1蛋白表達相比較,差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1、Hic-5和TGF-β1在手術(shù)組的膽管組織中表達較正常組和假手術(shù)組明顯增高,說明兩者均可能參與了膽管纖維化的發(fā)生發(fā)展過程;2、在手術(shù)組纖維化的大鼠膽管組織中,Hic-5和TGF-β1的表達及變化,經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果提示兩組存在著相關(guān)性,表明兩者可能存在著相互調(diào)控的關(guān)系。
【關(guān)鍵詞】：膽管纖維化 Hic-5 TGF-β1
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575.7
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-9
• 前言9-11
• 材料和方法11-23
• 結(jié)果23-34
• 討論34-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-47
• 英漢專業(yè)術(shù)語及縮略詞對照47-48
• 致謝48
• 綜述48-61
• 參考文獻56-61

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本文編號：1072490