本文關(guān)鍵詞：犬去細(xì)胞喉支架兩種體外保存方法的對(duì)照研究

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【摘要】：頭頸部腫瘤中喉癌是最常見(jiàn)的癌癥,且發(fā)病率逐年遞增。喉癌目前主要治療方案仍為部分喉或全喉切除術(shù)[1],術(shù)后長(zhǎng)期聲音嘶啞或者不能發(fā)音,并嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。據(jù)統(tǒng)計(jì)每年大約有25萬(wàn)的喉癌患者行喉全切除術(shù)[2]。喉全切除術(shù)后選擇的一個(gè)積極治療方案為喉移植。但是,到目前為止,人類歷史上僅有2例成功的喉移植被報(bào)道[3,4]。臨床上近年來(lái)在組織結(jié)構(gòu)器官移植上進(jìn)步很大,并且在組織工程方面去細(xì)胞的支架已經(jīng)成功運(yùn)用。在去細(xì)胞喉支架的方面,我科已經(jīng)完成了兔和犬喉支架的灌注,并對(duì)這種支架的組織相容性、免疫原性、生物力學(xué)進(jìn)行了檢測(cè),為構(gòu)建去細(xì)胞同種異體喉軟骨支架提供了理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)[5-9]。進(jìn)行喉移植前去細(xì)胞喉支架需進(jìn)行保存,以便為臨床受體的選擇創(chuàng)造時(shí)間。目前器官和軟骨保存臨床上常使用的方法有:冷凍保存、細(xì)胞培養(yǎng)液保存、器官保存液保存[10-14]。冷凍保存主要用于實(shí)質(zhì)器官的保存,缺點(diǎn)為保存時(shí)間短,如果保存軟骨,軟骨細(xì)胞易失活。細(xì)胞培養(yǎng)液是主要用在保存和培養(yǎng)細(xì)胞方面。器官保存液也主要用來(lái)保存實(shí)質(zhì)器官,目前未見(jiàn)用于保存去細(xì)胞支架的報(bào)道。去細(xì)胞喉支架應(yīng)該如何保存?保存時(shí)間能否延長(zhǎng)?保存后喉支架的結(jié)構(gòu)能否起到支撐作用?軟骨細(xì)胞能否存活?本實(shí)驗(yàn)比較了RPMI-1640培養(yǎng)基和HCA器官保存液兩種保存方法對(duì)犬去細(xì)胞喉支架的軟骨活性和軟骨性能的影響,探討去細(xì)胞喉支架保存的最佳方式和時(shí)間。目的:1.灌注法制備犬去細(xì)胞喉支架,探討灌注后犬去細(xì)胞喉支架的外形、組織學(xué)、軟骨細(xì)胞活性、生物力學(xué)的情況,并和兩種體外保存后的支架進(jìn)行比較。2.通過(guò)對(duì)犬去細(xì)胞喉支架兩種體外保存方法的對(duì)比研究,明確哪種方法更適合犬去細(xì)胞喉支架的保存,為下一步喉支架臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法:1.制備犬去細(xì)胞喉支架及其形態(tài)學(xué)研究通過(guò)環(huán)甲動(dòng)脈持續(xù)灌注sds、tritonx-100、pbs離子型去污劑,制備犬去細(xì)胞喉支架。在去除喉黏膜、肌肉、韌帶內(nèi)可溶性基質(zhì)的同時(shí),保留細(xì)胞外基質(zhì)和低免疫原性的軟骨細(xì)胞及完整的去細(xì)胞犬喉支架。制備完后,行大體觀察、組織學(xué)觀察及軟骨活性檢測(cè)。2.犬去細(xì)胞喉支架體外保存的研究實(shí)驗(yàn)組:將2組(各12只)犬去細(xì)胞喉支架分別放入rpmi-1640培養(yǎng)基內(nèi)(a組)和hca器官保存液內(nèi)(b組)進(jìn)行保存,1周、2周、4周、6周后取材。對(duì)照組(c組):將另9只去細(xì)胞喉支架作為空白對(duì)照。3組均行大體觀察、組織學(xué)檢查、軟骨細(xì)胞活性檢測(cè)和生物力學(xué)性能檢測(cè)的對(duì)比。結(jié)果:1.制備犬去細(xì)胞喉支架及其形態(tài)學(xué)研究大體觀察:犬去細(xì)胞喉支架結(jié)構(gòu)完整、顏色蒼白,觸之有彈性,按壓無(wú)變形。he染色示:喉支架肌群去細(xì)胞完全,軟骨細(xì)胞良好填充于軟骨陷窩內(nèi)。pda-pi雙熒光染色示:去細(xì)胞喉支架冰凍切片示軟骨細(xì)胞發(fā)出黃綠色熒光,軟骨陷窩內(nèi)軟骨細(xì)胞存活良好,結(jié)構(gòu)完整。2.犬去細(xì)胞喉支架的體外保存的研究將實(shí)驗(yàn)組的2組犬去細(xì)胞喉支架保存4個(gè)時(shí)間段后取材進(jìn)行檢測(cè)。a組保存2周時(shí)和b組保存6周時(shí)去細(xì)胞喉支架外形變形明顯,軟骨細(xì)胞失活,壓凹硬度試驗(yàn)硬度改變明顯。保存2周、4周a、b兩組組間甲狀軟骨厚度有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t1=3.92,p10.01;t2=4.54,p20.01)。在保存2周、4周時(shí)a、b兩組組間甲狀軟骨壓縮模量比較有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t1=3.36,p10.01;t2=3.13,p20.01)。b組保存4周時(shí)去細(xì)胞喉支架硬度、軟骨細(xì)胞活性和甲狀軟骨壓縮模量與對(duì)照組比較基本無(wú)明顯變化。結(jié)論:1.通過(guò)環(huán)甲動(dòng)脈灌注能夠清除肌肉和黏膜的細(xì)胞成分,保留細(xì)胞外基質(zhì)及軟骨細(xì)胞,去細(xì)胞基本完全,生物力學(xué)性能良好,可得到完整的去細(xì)胞喉支架。2.犬去細(xì)胞喉支架體外保存時(shí),HCA器官保存液優(yōu)于RPMI-1640培養(yǎng)基。HCA器官保存液保存4周時(shí),去細(xì)胞支架外形、組織學(xué)觀察及其生物力學(xué)性能無(wú)明顯改變,是一種可供選擇的去細(xì)胞喉支架體外保存液。
【關(guān)鍵詞】：喉 支架 器官保存 喉軟骨 軟骨細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.65
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-13
• 文獻(xiàn)回顧13-23
• 實(shí)驗(yàn)一 去細(xì)胞犬喉支架的制備及其形態(tài)學(xué)研究23-28
• 1 材料23-24
• 2 實(shí)驗(yàn)方法24-25
• 3 結(jié)果25-26
• 4 討論26-28
• 實(shí)驗(yàn)二 犬去細(xì)胞喉支架兩種體外保存方法的對(duì)照研究28-33
• 1 材料28-29
• 2 方法29-30
• 3 結(jié)果30-31
• 4 討論31-33
• 小結(jié)33-34
• 參考文獻(xiàn)34-47
• 附錄47-54
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果54-55
• 致謝55

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1 侯楠;崔鵬程;羅家勝;鄭德育;;灌注法與浸泡法構(gòu)建去細(xì)胞全喉支架的對(duì)比研究[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2009年05期

2 於子衛(wèi);董頻;;喉支架手術(shù)術(shù)式和分類[J];聽(tīng)力學(xué)及言語(yǔ)疾病雜志;2007年01期

3 劉學(xué)奎,文三立,文冰,廖衛(wèi)國(guó);復(fù)合生物陶瓷喉支架的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[J];江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2004年04期

4 孫安科;胡平;李萬(wàn)同;孟慶延;陳偉;唐維維;;組織工程PHBHH多孔材料喉支架的制備與細(xì)胞相容性研究[J];聽(tīng)力學(xué)及言語(yǔ)疾病雜志;2011年06期

5 陶清華;;“老人聲”警惕“老年病”[J];老人天地;2002年05期

6 ;喉支架的組織學(xué)侵犯對(duì)下咽癌預(yù)后的影響[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(耳鼻咽喉科學(xué)分冊(cè));1998年03期

7 ;[J];;年期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 董頻;於子衛(wèi);;喉支架手術(shù)的進(jìn)展和分類[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)耳鼻咽喉科專業(yè)委員會(huì)第十三次學(xué)術(shù)會(huì)議、浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)耳鼻咽喉科專業(yè)委員會(huì)第十一次學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

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1 馬瑞娜;保留軟骨的去細(xì)胞全喉支架的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 安飛;犬去細(xì)胞喉支架兩種體外保存方法的對(duì)照研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 許莉;犬去細(xì)胞喉支架的生物力學(xué)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

3 李萬(wàn)里;去細(xì)胞犬喉支架的體內(nèi)埋植實(shí)驗(yàn)[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：843478