發(fā)布時間：2017-08-16 06:28

  本文關鍵詞：自噬相關基因Beclin1及P62在鼻息肉組織中的表達及臨床意義

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【摘要】：1研究背景慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉(Chronic Rhinosinusitis with Nasal Polyps, CRSwNP)是一組多病因導致、多步驟發(fā)生、具有高度異質性的鼻粘膜病變,臨床特征多表現(xiàn)為高度水腫的鼻腔粘膜垂出于中鼻道,形成單發(fā)或者多發(fā)的息肉,伴炎性細胞浸潤,以嗜酸性粒細胞為主。研究顯示,改變的固有免疫和獲得免疫、組織重塑、異常的花生四烯酸代謝都有可能對鼻息肉發(fā)展產生影響,但其明確的發(fā)病機制尚不得而知心。自噬是指細胞在應激狀況下,通過清除細胞內的代謝廢物、更新細胞結構來維持蛋白質平衡和細胞內環(huán)境穩(wěn)定的方式。目前認為,Beclin1及P62是兩種比較重要的自噬標志基因,但自噬在鼻息肉組織中的表達及臨床意義的研究少有報道。2目的本研究通過從蛋白質及mRNA水平上分別檢測自噬標志基因Beclin1及P62在鼻息肉組織中的表達,初步探討自噬在鼻息肉發(fā)病機制中的作用及其臨床意義。3方法標本取自2014年10月至2015年4月于山東大學齊魯醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科住院行鼻內鏡手術的患者。其中包括慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉(CRSwNP)患者的鼻息肉組織50例(男26例,女24例,年齡24-71歲,平均47.1歲)作為實驗組；單純鼻中隔偏曲患者的正常下鼻甲粘膜組織20例(男12例,女8例,年齡18-54歲,平均35.2歲),作為對照組。慢性鼻竇炎(Chronic Rhinosinusitis,CRS)診斷標準參照2012年昆明指南。所有患者術前1月內均未接受抗菌素、全身及鼻用糖皮質激素等藥物治療,排除腫瘤、免疫缺陷及其他嚴重的全身性疾病。對照組鼻中隔偏曲的患者經皮膚點刺實驗排除過敏性鼻炎,經鼻竇CT檢查排除鼻竇占位病變。所有研究對象術前均采用視覺模擬評分(VAS評分)和Lund-Mackay評分進行病情嚴重程度的評估。本研究經山東大學齊魯醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準,患者均在知情同意書上簽字表示理解并同意。實驗首先采用蘇木精-伊紅(HE)染色來觀察鼻息肉組織的一般形態(tài)結構并用如下方法來計數(shù)嗜酸性粒細胞的比例：高倍鏡下隨機選取連續(xù)的5個視野,計數(shù)嗜酸性粒細胞數(shù)目及比例,取平均值,如比例大于10%則為嗜酸性粒細胞浸潤型鼻息肉(Eosinophilic Chronic Rhinosinusitis with Nasal Polyps, ECRSwNP),不足則為非嗜酸性粒細胞浸潤型鼻息肉(non-Eosinophilic Chronic Rhinosinusitis with Nasal Polyps, nECRSwNP);采用免疫組織化學技術(IHC)檢測Beclin1及P62在實驗組及對照組中的蛋白表達強度；采用實時熒光定量反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)測定兩組中Beclin1、P62及LC3B mRNA的相對表達水平。以SPSS20.0軟件進行統(tǒng)計學分析。4結果自噬相關基因Beclin1及P62在蛋白水平的表達：Beclin1在鼻息肉組織中的表達和對照組相比明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(U值為-13.36,P0.01)；P62的表達較對照組則明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(U值為12.99,P0.01)。但兩者表達與嗜酸性粒細胞浸潤無明顯關聯(lián)(P值均大于0.05)。自噬相關基因Beclin1及P62在mRNA水平的表達：Beclin1在鼻息肉組織中的相對表達量為0.46±0.17,低于對照組的1.11±0.47,差異有統(tǒng)計學意義(t值為-4.61,P0.01)；P62在鼻息肉組織中的相對表達量為2.19±0.44,高于對照組1.05±0.33,差異有統(tǒng)計學意義(t值為6.16,P0.01)；LC3B在鼻息肉組織中的相對表達量為0.46±0.11,低于對照組的0.96±0.25,差異有統(tǒng)計學意義(t值為-4.61,P0.01)。5結論鼻息肉較正常下鼻甲粘膜組織中Beclin1的表達明顯降低,P62表達明顯增高,提示鼻息肉組織自噬水平降低,這可能與鼻息肉的發(fā)病機制有關。
【關鍵詞】：自噬 Beclin1 P62 鼻息肉 炎癥
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R765.25
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 符號說明12-14
• 前言14-19
• 材料與方法19-29
• 結果29-30
• 討論30-38
• 結論38-39
• 附表及附圖39-43
• 參考文獻43-48
• 致謝48-49
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的文章49-50
• 學位論文評閱及答辯情況表50

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