本文關(guān)鍵詞：多奈哌齊延緩MNU誘導(dǎo)的小鼠感光細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的研究

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【摘要】：目的:本研究旨在研究多奈哌齊在視網(wǎng)膜中對(duì)MNU誘導(dǎo)的感光細(xì)胞凋亡抑制作用的機(jī)制。方法:雄性C57BL/6小鼠腹腔注射MNU(60mg/kg),分別在第1天,第3天,第5天,第7天處死,取眼球進(jìn)行HE染色觀察視網(wǎng)膜各層形態(tài)。小鼠玻璃體腔注射熱休克蛋白抑制劑Ⅰ,灌胃給予多奈哌齊10mg/kg預(yù)處理3天后處死,取眼球做免疫熒光檢測(cè),免疫熒光觀察Hsp70的表達(dá)與定位情況。對(duì)小鼠分別灌胃給予不同劑量的多奈哌齊(1 mg/kg、5 mg/kg、10mg/kg)預(yù)處理3天后處死小鼠,取眼球進(jìn)行蛋白印跡檢測(cè)。對(duì)小鼠在不同時(shí)間點(diǎn)(1天,3天,5天)灌胃給予較高劑量多奈哌齊(10mg/kg)處死小鼠取眼球進(jìn)行蛋白印跡檢測(cè),觀察多奈哌齊誘導(dǎo)Hsp70表達(dá)的劑量和時(shí)間依賴性。另外小鼠玻璃體腔注射熱休克蛋白抑制劑Ⅰ及灌胃給予Bcl-2抑制劑,利用蛋白印跡技術(shù)檢測(cè)Hsp70,Bcl-2的表達(dá)情況,同時(shí)利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)感光細(xì)胞凋亡的情況。結(jié)果:1、HE染色發(fā)現(xiàn)腹腔注射MNU后視網(wǎng)膜外核層顯著變薄,高峰在第3天,第7天變得更薄,外叢狀層在第1,3,5,7天后開始逐漸變薄,然而內(nèi)核層在第5,7天后才開始變薄,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層在各個(gè)時(shí)間段都沒有顯著變化。2、免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn)對(duì)照組Hsp70在感光細(xì)胞內(nèi)節(jié)和外核層有微弱的表達(dá),當(dāng)給予多奈哌齊預(yù)處理3天后,Hsp70表達(dá)顯著增強(qiáng),熱休克蛋白抑制劑使Hsp70的表達(dá)顯著減弱。3、蛋白印跡分析表明多奈哌齊(5,10 mg/kg)組與對(duì)照組(0 mg/kg)相比,Hsp70的表達(dá)顯著增加;多奈哌齊(第3,5天)組與對(duì)照組(第0天)相比,Hsp70的表達(dá)高峰在第3天組。4、蛋白印跡分析發(fā)現(xiàn)多奈哌齊誘導(dǎo)Hsp70和Bcl-2的表達(dá)增強(qiáng),熱休克蛋白抑制劑抑制使Hsp70和Bcl-2的表達(dá)顯著減弱,Bcl-2抑制劑明顯減弱Bcl-2的表達(dá),但對(duì)Hsp70的表達(dá)無明顯影響,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。5、HE染色發(fā)現(xiàn)與MNU組相比,多奈哌齊+MNU組的視網(wǎng)膜外核層顯著增厚,然而熱休克蛋白抑制劑+多奈哌齊+MNU組視網(wǎng)膜外核層顯著變薄。流式細(xì)胞分析發(fā)現(xiàn)對(duì)照組凋亡率為6.4±4.1%,MNU組為43.2±7.4%,多奈哌齊+MNU組為29.4±4.1%,熱休克蛋白抑制劑+多奈哌齊+MNU組為40.6±2.3%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:1、小鼠腹腔注射MNU可以顯著并且選擇性誘導(dǎo)感光細(xì)胞凋亡。2、多奈哌齊能誘導(dǎo)Hsp70的表達(dá),同時(shí)存在劑量和時(shí)間依賴性,另外,多奈哌齊能上調(diào)Bcl-2的表達(dá)。3、多奈哌齊對(duì)感光細(xì)胞具有保護(hù)作用,其保護(hù)機(jī)制可能是通過Bcl-2抑制凋亡實(shí)現(xiàn)的,并且Hsp70可能是Bcl-2上游抑制凋亡的一個(gè)重要因素。
【關(guān)鍵詞】：多奈哌齊 感光細(xì)胞 MNU Hsp70 Bcl-2
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R774.1
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料與方法12-22
• 2.1 材料12-17
• 2.1.1 動(dòng)物和分組12-13
• 2.1.2 抗體13
• 2.1.3 免疫熒光13-14
• 2.1.4 蛋白免疫印跡14
• 2.1.5 溶液配制14-16
• 2.1.6 實(shí)驗(yàn)儀器16-17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法17-21
• 2.2.1 石蠟切片17-18
• 2.2.2 蘇木紫伊紅染色法（HE染色）18
• 2.2.3 免疫熒光法18-19
• 2.2.4 蛋白免疫印跡19-21
• 2.2.5 流式細(xì)胞術(shù)21
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析21-22
• 第3章 結(jié)果22-28
• 3.1 腹腔注射MNU誘導(dǎo)感光細(xì)胞的凋亡22-23
• 3.2 多奈哌齊誘導(dǎo)Hsp70的表達(dá)23
• 3.3 多奈哌齊誘導(dǎo)Hsp70表達(dá)的劑量和時(shí)間依賴23-24
• 3.4 多奈哌齊誘導(dǎo)Hsp70表達(dá)與Bcl-2 有關(guān)24-25
• 3.5 多奈哌齊通過上調(diào)Hsp70來減少M(fèi)NU誘導(dǎo)的感光細(xì)胞凋亡25-28
• 第4章 討論28-31
• 第5章 結(jié)論31-32
• 致謝32-33
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 綜述 視網(wǎng)膜感光細(xì)胞凋亡和保護(hù)的研究36-43
• 參考文獻(xiàn)41-43

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 徐學(xué)君;徐德琴;汪駿;;多奈哌齊的藥理作用及其臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J];安徽醫(yī)藥;2009年04期

2 李寧東;視網(wǎng)膜色素變性的分子發(fā)病機(jī)制[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).眼科學(xué)分冊(cè);2003年06期

3 李虹,李華林,李婉宜,肖麗英,蔣中華,李明遠(yuǎn),汪曉東,張林;流感病毒誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的研究[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年03期

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本文編號(hào)：662896