本文關(guān)鍵詞：病毒介導(dǎo)反義CK13基因?qū)θ吮茄拾〩NE1細(xì)胞動(dòng)物模型放療敏感性的影響

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【摘要】：目的：鼻咽癌(nasopharyngeal careinoma, NPC)是我國南方地區(qū)的一種常見惡性腫瘤。目前NPC的主要治療手段為放射治療。NPC放療后局部殘?jiān)�、�?fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是放療失敗的主要原因,即NPC組織中存在一定比例(10%-20%)對(duì)放射線具有抗拒作用的細(xì)胞,放射后殘留的這些細(xì)胞不僅使腫瘤對(duì)放射的抗拒能力增強(qiáng),而且使腫瘤更具有侵襲性,容易發(fā)生淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。因此,深入了解NPC放射敏感性的機(jī)制,探索一種能有效地增加NPC放射敏感性的治療措施,以提高NPC的放射療效,降低并發(fā)癥,具有重要的臨床意義。本課題前期實(shí)驗(yàn)從體外環(huán)境證明反義CK13基因在NPC治療過程中有降敏作用。本研究將病毒介導(dǎo)反義CK13基因的細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)建立鼻咽癌移植瘤,旨在模擬體內(nèi)環(huán)境下探索反義CK13基因在鼻咽癌治療中的放療敏感性的影響。為尋找一個(gè)可以在NPC治療中提高放療敏感性的靶基因提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法：1.含目的基因NPC動(dòng)物模型A組(Al:HNE1細(xì)胞；A2：轉(zhuǎn)染空載體HNE1細(xì)胞；A3：轉(zhuǎn)染anti-CK13a的HNE1細(xì)胞；A4：轉(zhuǎn)染anti-CK13b HNE1細(xì)胞)。每組隨機(jī)抓取5只裸鼠。2.NPC動(dòng)物模型局部注射質(zhì)粒B組(B1：對(duì)照組,注射生理鹽水；B2：空質(zhì)粒組,注射空慢病毒質(zhì)粒；B3：反義CK13a組,注射反義CK13a慢病毒質(zhì)粒；B4.反義CK13b組,注射反義CK13b慢病毒質(zhì)粒)。每組隨機(jī)抓取5只裸鼠。3.放療,并測量放療前后腫瘤體積。4.處死小鼠,稱重瘤體計(jì)算抑瘤率,予以病檢、免疫組化、RT-qPCR及Western Blot檢測。5.結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：1、實(shí)驗(yàn)期間40只裸鼠死亡率0%,存活率為100%；種瘤于左腋下后均形成明顯肉眼可見的移植瘤,平均大小約400.-420mm3,成瘤率為100%。兩大組移植瘤病檢顯示均呈現(xiàn)低分化鱗癌。2、我們對(duì)比照射前后的八組裸鼠的瘤體大小。在A組內(nèi),A3、A4兩組腫瘤生長體積較A1、A2兩組明顯大,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),A1組和A2組,A3組和A4組之間無顯著性差異(p0.05)。在B組內(nèi),B3、B4兩組腫瘤生長體積較B1、B2兩組明顯大,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),B1組和B2組,1B3組和B4組之間無顯著性差異(p0.05)。3、稱重瘤體重量并計(jì)算抑瘤率,A組以A1組為對(duì)照,A2、A3、A4組分別為-0.26%、-59.64%、-63.31%。實(shí)驗(yàn)組抑瘤率呈負(fù)值,說明瘤體重量較對(duì)照組A1明顯增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而兩組間比較無顯著性差異(p0.05)。 B組以Bl組為對(duì)照,經(jīng)計(jì)算,B2、B3、B4組分別為1.46%、-46.91%、-46.58%.實(shí)驗(yàn)組抑瘤率呈負(fù)值,說明瘤體重量較對(duì)照組B1明顯增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而兩組間比較無顯著性差異(p0.05)。4、Western blot和RT-qPCR結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組(A3、A4、B3、B4)的組織中CK13的表達(dá)均較對(duì)照組(A1、B1)、空載體組(A2、B2)明顯降低差異具有顯著性,(P0.05)5、Western blot和RT-qPCR顯示,CK13表達(dá)水平變化的同時(shí),WNT/β-catenin的表達(dá)水平也出現(xiàn)變化。結(jié)論：研究發(fā)現(xiàn)反義CK13基因聯(lián)合放射治療使鼻咽癌HNE1細(xì)胞移植瘤體積、重量都較空載體組和對(duì)照組大,計(jì)算抑瘤率,證明體內(nèi)動(dòng)物模型中反義CK13降低了HNE1細(xì)胞的放療敏感性。間接從反向證明CK13基因可能提高鼻咽癌HNE1細(xì)胞的放射敏感性。同時(shí)我們初步發(fā)現(xiàn)反義CK13降敏作用可能涉及到WNT/β-catenin信號(hào)通路,這為NPC治療過程中尋找一個(gè)新的靶基因提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)胞角蛋白13基因的反義寡核苷酸 鼻咽癌 動(dòng)物模型 放射敏感性 β-catenin
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.63
【目錄】：

• 英文縮略詞5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-14
• 材料和方法14-34
• 實(shí)驗(yàn)材料14-18
• 實(shí)驗(yàn)方法18-34
• 結(jié)果34-45
• 討論45-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 綜述 微小RNA與鼻咽癌的相關(guān)性研究53-61
• 參考文獻(xiàn)58-61
• 碩士研究生在讀期間發(fā)表及投稿的論文61-62
• 致謝62

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 蘇婷;陳海輝;;鼻咽癌調(diào)強(qiáng)適形放射治療的進(jìn)展[J];重慶醫(yī)學(xué);2011年34期

2 賀光,富偉能,邱廣斌,趙震,徐振明,孫興和,孫開來;細(xì)胞角蛋白基因13在喉鱗狀細(xì)胞癌中缺失和表達(dá)的研究[J];遺傳學(xué)報(bào);2002年05期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 羅朝輝;鼻咽癌的miRNA組學(xué)動(dòng)態(tài)表達(dá)特征及miR-18a通過Dicer1介導(dǎo)的致癌機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 楊艷坤;MicroRNA-18a在胰腺祖細(xì)胞和腺泡細(xì)胞中對(duì)轉(zhuǎn)錄因子Ptf1a的調(diào)控研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：661361