本文關(guān)鍵詞：視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞吞噬功能與MERTK-Ras-肌球蛋白通路關(guān)系的研究

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【摘要】：目的:研究視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)細(xì)胞吞噬功能與MERTK受體及其下游信號(hào)通路Ras-MEK-MLCK-肌球蛋白的關(guān)系。方法:用視細(xì)胞外節(jié)膜盤(rod outer segments,ROS)于37℃孵育離體培養(yǎng)的3~5代C57小鼠RPE細(xì)胞,在孵育0、30、60、120、180、240min終止吞噬反應(yīng)。雙重?zé)晒鈽?biāo)記法檢測(cè)RPE細(xì)胞吞噬動(dòng)力學(xué);以MERTK及Ras抗體、磷酸化MEK及MLCK抗體應(yīng)用Western-Blot方法檢測(cè)不同孵育時(shí)間(30、60、120、180min)MERTK、Ras、MEK及MLCK的激活狀態(tài);以瞬時(shí)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒方法抑制Ras及MERTK基因表達(dá)后,再次以Western-Blot方法檢測(cè)對(duì)應(yīng)時(shí)間MERTK-Ras通路激活狀態(tài)及吞噬功能的變化。結(jié)果:C57小鼠RPE細(xì)胞吞入ROS發(fā)生在孵育30min,并在3h達(dá)到飽和。在吞噬過(guò)程中,隨著孵育時(shí)間的延長(zhǎng),RPE細(xì)胞MERTK、Ras、MEK和MLCK的蛋白表達(dá)水平不斷增多(與對(duì)照組相比,P0.05)。Ras及MERTK干擾后的RPE細(xì)胞與ROS共孵育(30、60、120、180min)的全過(guò)程中,MERTK、Ras、MEK和MLCK的蛋白表達(dá)及ROS的吞人數(shù)量始終維持較低水平,僅在孵育180min見到少量ROS吞入;與未轉(zhuǎn)染RPE細(xì)胞相比,siRas-RPE細(xì)胞及siMERTK-RPE細(xì)胞與ROS共孵育120、180min時(shí),MERTK、Ras、MEK及MLCK的蛋白表達(dá)量均明顯減少(P0.05)。結(jié)論:Ras-MEK-MLCK-肌球蛋白通路是鼠RPE細(xì)胞吞噬過(guò)程中MERTK受體激活的下游信號(hào)通路。
【作者單位】： 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬一院眼科;
【關(guān)鍵詞】： 視網(wǎng)膜色素上皮 吞噬 MERTK Ras 肌球蛋白
【基金】：沈陽(yáng)市科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.F13-316-1-11)~~
【分類號(hào)】：R774.1
【正文快照】： Liaoning Province,China.sunyz91667@sina.com妁METHODS:Cultured 3~5 passage RPE cells of C57BL/6m ouse w ere incubated w ith rod outer segm ents(ROS)suspension(containing ROS 1×107/m l)at 37℃,then cellsw ere rinsed at different tim es(30,60,120,180,240m ，

本文編號(hào)：574864