目的:探究氯喹對(duì)CoCl₂誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。方法:小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞RGC-5細(xì)胞加入300μmol/L CoCl₂及30μmol/L氯喹處理24 h后,采用qPCR、Western blot、flow cytometry及MTT法分別檢測(cè)自噬相關(guān)基因Beclin1、LC3b、Atg5、Atg7、自噬相關(guān)蛋白LC3、凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3的表達(dá)、細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞存活率。結(jié)果:相比于單純CoCl₂組,CoCl₂及氯喹處理后的RGC-5細(xì)胞中,相關(guān)基因Beclin1、LC3b、Atg5、Atg7、自噬相關(guān)蛋白LC3B、凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3均被明顯抑制（P<0.05）,細(xì)胞凋亡率顯著下降（P<0.05）,細(xì)胞存活率明顯升高（P<0.05）。結(jié)論:自噬抑制劑氯喹抑制CoCl₂導(dǎo)致的細(xì)胞自噬和凋亡,從而保護(hù)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。

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圖1 qPCR檢測(cè)自噬基因相對(duì)表達(dá)量

CoCl2能夠誘導(dǎo)細(xì)胞慢性缺氧損傷而發(fā)生凋亡。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,用300μmol/L的CoCl2處理后,RGC-5細(xì)胞中自噬相關(guān)基因Beclin1、LC3b、Atg5及Atg7等均有顯著上調(diào)(圖1、表2)。Westernblot結(jié)果也表明,經(jīng)CoCl2處理后,細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白LC....

圖2 Western blot檢測(cè)自噬蛋白LC3B和凋亡蛋白Caspase-3的表達(dá)

表2qPCR檢測(cè)自噬基因相對(duì)表達(dá)量(xˉ±s)Tab.2RelativeexpressionofautophagyrelatedgenesdetectedbyqPCR(xˉ±s)GroupsBeclin1LC3bAtg5Atg7C....

圖3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況

圖2Westernblot檢測(cè)自噬蛋白LC3B和凋亡蛋白Caspase-3的表達(dá)圖4MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率

圖4 MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率

圖3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況表3細(xì)胞凋亡及存活比例(xˉ±s,%)Tab.3Cellapoptosisandsurvivalratio(xˉ±s,%)GroupsEarlyapoptoticcellsLateapoptoticcel....

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