本文關鍵詞：蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子對喉癌細胞株Hep-2增殖的影響及相關機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：喉癌是人類頭頸部常見的惡性腫瘤,來源于喉部黏膜上皮組織,近些年來其發(fā)病率有逐漸增長趨勢。晚期喉癌患者的5年生存率較低、預后差,影響患者預后重要因素是復發(fā)和頸淋巴結轉移。以手術切除為主的治療手段也嚴重影響術后患者的發(fā)聲功能以及生存質量,同時腫瘤耐藥性也使喉癌的治療受限,因此尋找有效的喉癌靶向治療方法是臨床的迫切需求。蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A, CIP2A)是新發(fā)現的一種癌蛋白,CIP2A通過抑制蛋白磷酸酶2A(proteinphosphatase2A, PP2A)對c-myc基因S62位點的去磷酸化作用,從而阻止c-myc蛋白的降解,穩(wěn)定c-myc的表達,促進細胞增殖和惡性轉化。CIP2A已被證實在肺癌、卵巢癌、骨肉瘤、胰腺導管腺癌、結腸癌等多種惡性腫瘤中高表達,參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。我們前期研究中初步證實CIP2A在喉癌組織中高表達,且與腫瘤的分級分期、淋巴結轉移、組織分化程度和預后等相關。但目前CIP2A在喉癌中的生物學功能及機理還不清楚。本實驗運用siRNA技術沉默Hep-2細胞中CIP2A基因的表達,觀察抑制CIP2A基因后對Hep-2細胞增殖、凋亡和順鉑敏感性的影響及探討其可能的分子機制,以期為喉癌的早期分子診斷和臨床基因治療提供一定的實驗依據。方法：設計合成靶向CIP2A基因的siRNA序列和陰性對照siRNA序列,并轉染入喉癌Hep-2細胞,實驗分為CIP2A siRNA組與Control siRNA組。平板克隆形成實驗檢測CIP2A在喉癌細胞增殖中的作用；MTT法檢測CIP2A對Hep-2細胞生長曲線及化療藥物順鉑的敏感性的影響；流式細胞儀檢測轉染后細胞的周期分布和細胞凋亡率的改變。Real-time PCR檢測CIP2A mRNA表達水平,Western blot檢測CIP2A及生長相關蛋白c-myc、AKT、p-AKT、cyclinD1的蛋白表達水平。結果：轉染CIP2A siRNA后,CIP2A的表達量在轉錄水平和蛋白水平均顯著下調。沉默CIP2A后,Hep-2細胞的生長減緩,細胞克隆的形成能力被抑制,Control siRNA組為339.00+34.00,CIP2A siRNA組為126.00⒈33.00,差異有統計學意義(p＝0.010)；沉默CIP2A可增加喉癌細胞對順鉑的敏感性,Control siRNA組ICso為(6.67±0.54) μg/ml, CIP2A siRNA組為(3.53±0.32) μg/ml,差異有統計學意義(P=0.001)；細胞周期阻滯于G1期,Control siRNA組G1期細胞比例為66.860±1.972, CIP2A siRNA組為74.613±3.357,差異有統計學意義(P=0.026)；S期細胞比例減少,Control siRNA組為23.713±1.564,CIP2A siRNA組為17.747⒈1.255,差異有統計學意義(P=0.007)；沉默CIP2A表達沒有引起細胞凋亡率的改變(P=0.216)。Western blot結果顯示,沉默CIP2A表達可下調CyclinD1 (P=0.011)、c-myc (P=0.011)、 p-AKT (p=0.010)的表達,但對總AKT蛋白的表達沒有影響。結論：沉默Hep-2細胞CIP2A基因后,可有效抑制細胞的增殖,增強細胞對順鉑的敏感性,其機制可能與下調c-myc、cyclin1、p-AKT的表達有關,提示CIP2A有望成為喉癌基因治療的潛在靶點。
【關鍵詞】：喉鱗狀細胞癌 CIP2A 藥物敏感性 細胞增殖 細胞凋亡
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.65
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 1 實驗材料與方法13-21
• 2 實驗結果21-27
• 3 討論27-30
• 全文結論30-31
• 參考文獻31-33
• 文獻綜述33-45
• 參考文獻40-45
• 致謝45-46
• 碩士研究生學習階段發(fā)表的學術論文46

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