目的:糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病的一種重要微血管病變并發(fā)癥。對(duì)于糖尿病患者來說,DR也是導(dǎo)致他們視力下降甚至失明的主要原因。近來對(duì)DR并發(fā)癥進(jìn)行了深入的研究。研究發(fā)現(xiàn)了一種特殊的代謝記憶現(xiàn)象,這種現(xiàn)象是指患者經(jīng)歷一段時(shí)間的高血糖狀態(tài),血糖水平恢復(fù)正常后,血管并發(fā)癥仍然高發(fā)的現(xiàn)象。對(duì)于DR患者來說,高糖代謝記憶現(xiàn)象可能是血糖控制后病情繼續(xù)進(jìn)展的重要原因。既往研究表明,由內(nèi)源性和外源性來源引起的氧化應(yīng)激會(huì)對(duì)包括基因組和線粒體DNA在內(nèi)的細(xì)胞成分造成損害。DR患者視網(wǎng)膜血管存在mtDNA損傷,且有氧化應(yīng)激引發(fā)的ROS過量產(chǎn)生參與DR早期發(fā)病。mtDNA一旦受損,將會(huì)導(dǎo)致線粒體膜電位降低,細(xì)胞凋亡增加,反過來又增加了ROS的產(chǎn)生,并形成ROS過量產(chǎn)生的惡性循環(huán)。由于代謝性記憶現(xiàn)象是DR過程中難以克服的現(xiàn)象,我們推測(cè)ROS過量產(chǎn)生的這種惡性循環(huán)不斷促進(jìn)代謝性記憶的過程,導(dǎo)致視網(wǎng)膜血管mtDNA氧化損傷。為了更好地了解高糖代謝記憶現(xiàn)象對(duì)DR線粒體氧化損傷的影響,我們使用hRECs體外模擬代謝記憶。將hRECs暴露于高糖環(huán)境中作用不同時(shí)間后再轉(zhuǎn)至正常培...

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞對(duì)照表
第1章 引言
    1.1 概述
第2章 人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞mtDNA氧化損傷與“高糖代謝記憶”
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑及儀器
        2.1.3 主要試劑的配制
        2.1.4 引物
        2.1.5 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)分組
        2.2.3 實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)評(píng)估視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞呼吸鏈復(fù)合物COX1、NADPH mRNA表達(dá)水平
        2.2.4 western blot技術(shù)評(píng)估視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞色素C蛋白水平
        2.2.5 JC-1 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)hRECs線粒體膜電位的變化
        2.2.6 DCFH-DA熒光探針檢測(cè)視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)ROS水平
        2.2.7 Annexin V/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)hRECs細(xì)胞凋亡水平
        2.2.8 細(xì)胞總線粒體的提取及ELISA法檢測(cè)hRECs線粒體內(nèi)8-ohdG含量
        2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 高糖對(duì)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率
        2.3.2 高糖對(duì)各高糖誘導(dǎo)組呼吸鏈亞單位細(xì)胞色素C和 COX-1、NADPH表達(dá)的影響
        2.3.3 高糖誘導(dǎo)不同時(shí)間轉(zhuǎn)至正常培養(yǎng)基培養(yǎng)2 天后各組HRECs細(xì)胞線粒體DNA氧化應(yīng)激損傷情況8-OHdG結(jié)果分析
        2.3.4 高糖誘導(dǎo)不同時(shí)間轉(zhuǎn)至正常培養(yǎng)基培養(yǎng)2d后各組HRECs細(xì)胞氧化應(yīng)激ROS含量變化分析結(jié)果
        2.3.5 高糖代謝記憶導(dǎo)致hRECs MMP的丟失
    2.4 討論
第3章 結(jié)論與展望
    3.1 結(jié)論
    3.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3813916