先天性白內障是一種嚴重的致盲性眼病,是導致兒童失明的主要原因。據(jù)臨床數(shù)據(jù)顯示,約1/3的先天性白內障與遺傳有關,且主要為常染色體顯性遺傳。晶狀體蛋白和縫隙連接蛋白的異常表達均可引發(fā)先天性白內障。因此,本課題選擇晶狀體蛋白CRYAA基因和縫隙連接蛋白GJA8基因進行研究。其中由CRYAA基因編碼的αA晶狀體蛋白占晶狀體蛋白的40%,在防止蛋白錯誤聚集方面起到重要作用。GJA8編碼的Cx50蛋白主要功能為形成縫隙連接通道,使纖維細胞間代謝產物及水等物質交換,以維持晶狀體發(fā)育及透明。不同的致病基因突變可能引起不同白內障癥狀并具有不同分子細胞發(fā)病機制,因此,明確白內障發(fā)病機理對于進行白內障相關治療極為重要。鑒于兔眼睛大小與人類之間的相似性,我們選擇兔作為人眼病模型。CRISPR/Cas9系統(tǒng)作為一種能夠對基因組進行精準高效切割的新型基因編輯技術,具有設計周期短、實驗費用低和打靶效率高等優(yōu)點。因此,本課題利用CRISPR/Cas9技術,對兔CRYAA基因和GJA8基因進行靶向修飾,構建先天性白內障模型并進行表征分析。在本實驗中,根據(jù)兔全基因組數(shù)據(jù)庫提供的CRYAA及GJA8基因序列,針對這兩個基...

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略詞表
引言
第一篇 綜述
    第1章 基因編輯技術研究進展
        1.1 傳統(tǒng)基因打靶技術
        1.2 鋅指核酸酶技術（ZFNs）
        1.3 轉錄激活物效應核酸酶 (TALENs）技術
        1.4 CRISPR/Cas9技術
    第2章 晶狀體及白內障研究進展
        2.1 晶狀體概述
        2.2 白內障研究進展
    第3章 晶狀體蛋白基因及縫隙連接蛋白基因研究進展
        3.1 晶狀體蛋白研究現(xiàn)狀
        3.2 縫隙連接蛋白研究現(xiàn)狀
第二篇 研究內容
    第1章 pUC57-sgRNA載體構建及Cas9與sgRNA mRNAs的制備
        1.1 實驗材料與方法
        1.2 實驗方法
        1.3 實驗結果
        1.4 討論
        1.5 小結
    第2章 利用CRISPR/Cas9技術敲除CRYAA基因構建兔先天性白內障模型
        2.1 實驗材料與方法
        2.2 實驗方法
        2.3 實驗結果
        2.4 討論
        2.5 小結
    第3章 利用CRISPR/Cas9技術敲除GJA8基因構建兔先天性白內障模型
        3.1 實驗材料與方法
        3.2 實驗方法
        3.3 實驗結果
        3.4 討論
        3.5 小結
結論
參考文獻
導師簡介
作者簡介及攻讀博士期間所發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3805121