先天性白內(nèi)障是一種嚴重的致盲性眼病,是導(dǎo)致兒童失明的主要原因。據(jù)臨床數(shù)據(jù)顯示,約1/3的先天性白內(nèi)障與遺傳有關(guān),且主要為常染色體顯性遺傳。晶狀體蛋白和縫隙連接蛋白的異常表達均可引發(fā)先天性白內(nèi)障。因此,本課題選擇晶狀體蛋白CRYAA基因和縫隙連接蛋白GJA8基因進行研究。其中由CRYAA基因編碼的αA晶狀體蛋白占晶狀體蛋白的40%,在防止蛋白錯誤聚集方面起到重要作用。GJA8編碼的Cx50蛋白主要功能為形成縫隙連接通道,使纖維細胞間代謝產(chǎn)物及水等物質(zhì)交換,以維持晶狀體發(fā)育及透明。不同的致病基因突變可能引起不同白內(nèi)障癥狀并具有不同分子細胞發(fā)病機制,因此,明確白內(nèi)障發(fā)病機理對于進行白內(nèi)障相關(guān)治療極為重要。鑒于兔眼睛大小與人類之間的相似性,我們選擇兔作為人眼病模型。CRISPR/Cas9系統(tǒng)作為一種能夠?qū)蚪M進行精準高效切割的新型基因編輯技術(shù),具有設(shè)計周期短、實驗費用低和打靶效率高等優(yōu)點。因此,本課題利用CRISPR/Cas9技術(shù),對兔CRYAA基因和GJA8基因進行靶向修飾,構(gòu)建先天性白內(nèi)障模型并進行表征分析。在本實驗中,根據(jù)兔全基因組數(shù)據(jù)庫提供的CRYAA及GJA8基因序列,針對這兩個基...

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略詞表
引言
第一篇 綜述
    第1章 基因編輯技術(shù)研究進展
        1.1 傳統(tǒng)基因打靶技術(shù)
        1.2 鋅指核酸酶技術(shù)（ZFNs）
        1.3 轉(zhuǎn)錄激活物效應(yīng)核酸酶 (TALENs）技術(shù)
        1.4 CRISPR/Cas9技術(shù)
    第2章 晶狀體及白內(nèi)障研究進展
        2.1 晶狀體概述
        2.2 白內(nèi)障研究進展
    第3章 晶狀體蛋白基因及縫隙連接蛋白基因研究進展
        3.1 晶狀體蛋白研究現(xiàn)狀
        3.2 縫隙連接蛋白研究現(xiàn)狀
第二篇 研究內(nèi)容
    第1章 pUC57-sgRNA載體構(gòu)建及Cas9與sgRNA mRNAs的制備
        1.1 實驗材料與方法
        1.2 實驗方法
        1.3 實驗結(jié)果
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第2章 利用CRISPR/Cas9技術(shù)敲除CRYAA基因構(gòu)建兔先天性白內(nèi)障模型
        2.1 實驗材料與方法
        2.2 實驗方法
        2.3 實驗結(jié)果
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第3章 利用CRISPR/Cas9技術(shù)敲除GJA8基因構(gòu)建兔先天性白內(nèi)障模型
        3.1 實驗材料與方法
        3.2 實驗方法
        3.3 實驗結(jié)果
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
導(dǎo)師簡介
作者簡介及攻讀博士期間所發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3805121