目的:研究α-黑素細(xì)胞刺激素(α-melanocyte stimulating hormone,α-MSH)在小鼠煙曲霉菌性角膜炎中的免疫調(diào)控作用及機(jī)制。方法:1.煙曲霉菌感染C57BL/6小鼠角膜,建立小鼠真菌性角膜炎動(dòng)物模型,α-MSH聯(lián)合煙曲霉菌感染組在感染后第1天開始給予球結(jié)膜下注射5ulα-MSH(1x10^-4mmol/m L)至感染后第3天,PBS聯(lián)合煙曲霉菌感染組給予等量體積的PBS處理。裂隙燈下拍照觀察小鼠角膜感染情況并記錄小鼠角膜感染1天、3天后的臨床評(píng)分。2.采用PCR法和Western blot法檢測(cè)感染后第3天α-MSH干預(yù)組和PBS對(duì)照組小鼠角膜中炎癥因子IL-1β、TNF-α、IL-6、MIP-2、iNOS和模式識(shí)別受體LOX-1和Dectin-1的m RNA和蛋白的表達(dá);采用免疫熒光法特異性標(biāo)記中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,檢測(cè)α-MSH干預(yù)組和PBS對(duì)照組感染后第3天角膜中中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞數(shù)量的變化。3.采用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8(CCK-8)檢測(cè)不同濃度的外源性α-MSH(10nM,100n M,1000n M)處理RAW264.7小鼠巨...

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
    1.實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與耗材
        1.3 實(shí)驗(yàn)主要儀器與設(shè)備
    2.實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 培養(yǎng)煙曲霉菌和制備煙曲霉菌菌絲刺激液
        2.2 C57BL/6小鼠煙曲霉菌性角膜炎模型的建立
        2.3 RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)
        2.4 α-MSH干預(yù)實(shí)驗(yàn)
        2.5 q RT-PCR
        2.6 Western blot
        2.7 免疫熒光染色
        2.8 CCK-8 檢測(cè)α-MSH對(duì)小鼠RAW264.7 巨噬細(xì)胞增殖活性的影響
    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié)果
    1. Α-MSH減輕C57BL/6 小鼠煙曲霉菌性角膜炎臨床評(píng)分
    2. Α-MSH減輕C57BL/6 小鼠煙曲霉菌性角膜炎的炎癥反應(yīng)
    3. Α-MSH減少C57BL/6 小鼠煙曲霉菌感染角膜中中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的募集
    4. Α-MSH減少煙曲霉菌刺激的RAW264.7 小鼠巨噬細(xì)胞中炎癥因子及模式識(shí)別受體的表達(dá)
    5. Α-MSH通過(guò)JNK/ERK信號(hào)通路抑制炎癥因子的表達(dá)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3792281