背景:單純皰疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus-1,HSV-1)是一種噬神經(jīng)組織的雙鏈DNA病毒,人類(lèi)是其唯一的自然宿主。流行病學(xué)顯示,全球有50-90%的人攜帶HSV-1病毒。HSV-1感染角膜引起的角膜病,約50%-80%均表現(xiàn)為上皮性角膜炎。盡管HSV角膜上皮炎在一周之內(nèi)即可自行消退,但如果沒(méi)有適當(dāng)?shù)闹委?仍可能會(huì)進(jìn)展為基質(zhì)性角膜炎,導(dǎo)致進(jìn)行性角膜混濁。迄今為止,關(guān)于HSV上皮性角膜炎的發(fā)病機(jī)制仍不明確�；贖SV-1感染特性,臨床上常采用更昔洛韋等抗病毒藥物作為治療HSV角膜上皮炎的首選藥物。然而長(zhǎng)期使用抗病毒藥物會(huì)導(dǎo)致病毒株的耐藥性。因此,控制HSV-1感染仍然是一個(gè)巨大的挑戰(zhàn),目前迫切需要開(kāi)發(fā)更有效的防御及治療措施。三基序蛋白(Tripartite motif-containing proteins,TRIMs)家族是一類(lèi)含有多個(gè)結(jié)構(gòu)域的生物大分子,TRIMs蛋白家族成員眾多,因其C-末端連接的不同結(jié)構(gòu)域,發(fā)揮不同的功能作用。近期研究表明,C-末端的B30.2結(jié)構(gòu)可以識(shí)別入侵的病毒,在病毒感染的過(guò)程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。TRIM21也稱(chēng)為Ro52或SS-A...

【文章頁(yè)數(shù)】：96 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分 :TRIM21在單純皰疹性角膜上皮炎的異常表達(dá)
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與細(xì)胞
        2.2 主要試劑及儀器
            2.2.1 主要試劑
            2.2.2 主要儀器與耗材
            2.2.3 主要配制試劑
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 Vero細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3.2 細(xì)胞計(jì)數(shù)
            2.3.3 HSV-1病毒激活與保存
            2.3.4 TCID₅₀法病毒滴定測(cè)定
            2.3.5 小鼠單純皰疹性角膜上皮炎模型建立
            2.3.6 確定角膜成功感染病毒
            2.3.7 顯微鏡觀察角膜病變程度
            2.3.8 小鼠角膜組織病理學(xué)檢查
            2.3.9 免疫熒光法檢測(cè)小鼠角膜TRIM21的表達(dá)
            2.3.10 Western Blotting法檢測(cè)小鼠角膜TRIM21 的表達(dá)
        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 病毒滴度測(cè)定
        3.2 小鼠單純皰疹性角膜上皮炎模型鑒定
            3.2.1 Vero細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)淚液膜中病毒復(fù)制情況
            3.2.2 HE染色明確角膜組織病理學(xué)改變
        3.3 Western Blotting法檢測(cè)HSV-1 感染小鼠角膜后TRIM21 的表達(dá)
        3.4 免疫熒光法檢測(cè)HSV-1 感染小鼠角膜后TRIM21 的定位
    4 討論
第二部分 :沉默TRIM21對(duì)小鼠單純皰疹性角膜上皮炎的影響及機(jī)制探索
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與細(xì)胞
        2.2 主要試劑及儀器
            2.2.1 主要試劑
            2.2.2 主要儀器與耗材
            2.2.3 主要配制試劑
            2.2.4 引物序列
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 Vero細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3.2 細(xì)胞計(jì)數(shù)
            2.3.3 HSV-1病毒激活與保存
            2.3.4 TCID₅₀法病毒滴定測(cè)定
            2.3.5 小鼠單純皰疹性角膜上皮炎模型建立
            2.3.6 確定角膜成功感染病毒
            2.3.7 顯微鏡觀察角膜病變程度
            2.3.8 小鼠角膜組織病理學(xué)檢查
            2.3.9 Western Blotting檢測(cè)方法
            2.3.10 qPCR檢測(cè)方法
            2.3.11 ELISA檢測(cè)方法
        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 蛋白質(zhì)及m RNA水平驗(yàn)證siRNA在小鼠角膜上的沉默效果
        3.2 各組小鼠的臨床觀察及評(píng)分
        3.3 HE染色明確各組小鼠角膜組織病理學(xué)改變
        3.4 沉默TRIM21對(duì)角膜淚液膜中病毒復(fù)制的影響
        3.5 沉默TRIM21對(duì)促炎細(xì)胞因子的影響
    4 討論
第三部分 :TRIM21 通過(guò)削弱STING/IRF3 信號(hào)通路加重HSV-1 在人角膜上皮細(xì)胞中的感染
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.2 主要試劑及儀器
            2.2.1 主要試劑
            2.2.2 主要儀器與耗材
            2.2.3 主要配制試劑
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 Vero細(xì)胞培養(yǎng)及HSV-1 病毒滴定檢測(cè)
            2.3.2 HCE細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)
            2.3.4 HCE細(xì)胞轉(zhuǎn)染TRIM21 的小干擾RNA及高表達(dá)TRIM21 的慢病毒質(zhì)粒
            2.3.5 Western Blotting檢測(cè)方法
            2.3.6 qPCR檢測(cè)方法
        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 蛋白質(zhì)及mRNA水平驗(yàn)證在HCE細(xì)胞上TRIM21 的干擾效果
        3.2 干擾TRIM21表達(dá)對(duì)I型干擾素釋放量的影響
        3.3 干擾TRIM21 表達(dá)對(duì)STING/IRF3 信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    4 討論
結(jié)論
本研究創(chuàng)新性自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3791619