目的：合成槲皮素磷脂復(fù)合物,以ARPE-19為研究對象,比較槲皮素及其磷脂復(fù)合物對t-BHP誘導(dǎo)ARPE-19細胞氧化損傷的保護作用；觀察槲皮素及其磷脂復(fù)合物對Nrf2/ARE信號通道及下游Ⅱ相解毒酶和抗氧化酶的調(diào)控作用,闡明槲皮素保護氧化損傷細胞的機制。方法：采用溶劑法制備復(fù)合物,差示掃描量熱分析、紅外光譜分析、X-射線衍射分析進行表征；測定單體及其復(fù)合物在水／氯仿中的溶解度。用t-BHP誘導(dǎo)ARPE-19細胞氧化損傷,MTT、AnnexinV-FITC/PI檢測槲皮素及其磷脂復(fù)合物對細胞存活率、凋亡率的影響。將ARPE-19細胞分成：溶媒對照組(DMSO)、氧化損傷組、Nrf2 siRNA組、藥物干預(yù)組、Nrf2siRNA+藥物干預(yù)組,熒光定量PCR檢測各組ARPE-19細胞Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL、mRNA轉(zhuǎn)錄,Western blot檢測各組ARPE-19細胞核內(nèi)Nrf2、胞質(zhì)Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL蛋白表達,分別用二氯熒光黃法、化學(xué)比色法、黃嘌呤氧化酶法和硫化巴比妥酸法測定細胞內(nèi)ROS、T-AOC.SOD、MDA含量。結(jié)果：差示掃描量熱分析、紅外光...

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一篇 理論部分
    1. 中醫(yī)對AMD的認識
        1.1 病名溯源
        1.2 病因病機
        1.3 證侯特征
        1.4 中醫(yī)治療
    2. 西醫(yī)對AMD的認識
        2.1 臨床特征及分類
        2.2 病因
        2.3 發(fā)病機制
        2.4 治療
    3. 槲皮素及其磷脂復(fù)合物的相關(guān)研究
        3.1 分子結(jié)構(gòu)
        3.2 生物活性
    4. 本研究的目的和意義
第二篇 槲皮素磷脂復(fù)合物的合成及表征
    實驗材料
        1. 主要儀器及試劑
    實驗方法
        1. 磷脂復(fù)合物的制備
        2. 磷脂復(fù)合物的結(jié)構(gòu)鑒定
        3. 磷脂復(fù)合物溶解度測定
    結(jié)果
        1. 差示掃描量熱分析
        2. 紅外光譜分析
        3. X-射線衍射分析
        4. 槲皮素溶解度測定
    討論
    結(jié)論
第三篇 槲皮素及其磷脂復(fù)合物對氧化損傷ARPE-19細胞的保護作用
    實驗材料
        1. 實驗細胞
        2. 主要儀器及設(shè)備
        3. 藥物及試劑
    實驗方法
        1. 主要試劑的配備
        2. 細胞的培養(yǎng)、傳代、凍存和復(fù)蘇
        3. ARPE-19細胞氧化損傷模型建立
        4. MTT檢測槲皮素及其磷脂復(fù)合物對ARPE-19細胞的毒性
        5. MTT檢測槲皮素及其磷脂復(fù)合物對t-BHP誘導(dǎo)的ARPE-19細胞存活率的影響
        6. AnnexinV-FITC/PI檢測槲皮素及其磷脂復(fù)合物對t-BHP誘導(dǎo)的ARPE-19細胞凋亡率的影響
    實驗結(jié)果
        1. ARPE-19細胞氧化損傷模型建立
        2. 不同濃度槲皮素及其磷脂復(fù)合物對APRE-19細胞的毒性
        3. 槲皮素及其磷脂復(fù)合物對氧化損傷APRE-19細胞的存活率影響
        4. 槲皮素及其磷脂復(fù)合物對氧化損傷APRE-19細胞的凋亡率影響
        5. 槲皮素及其磷脂復(fù)合物對t-BHP誘導(dǎo)APRE-19細胞形態(tài)的影響
    討論
    結(jié)論
第四篇 槲皮素及其磷脂復(fù)合物對t-BHP誘導(dǎo)ARPE-19細胞氧化損傷保護作用及機制研究
    實驗材料
        1. 實驗細胞
        2. 主要儀器及設(shè)備
        3. 藥物及試劑
    實驗方法
        1. 瞬時轉(zhuǎn)染ARPE-19細胞
        2. Real time PCR在轉(zhuǎn)錄水平鑒定轉(zhuǎn)染效率
        3. Western blot在翻譯水平鑒定轉(zhuǎn)染效率
        4. Real time PCR觀察藥物在轉(zhuǎn)錄水平對二相酶的誘導(dǎo)作用
        5. Western blot觀察藥物在翻譯水平對二相酶的誘導(dǎo)作用
        6. 細胞內(nèi)SOD活性及T-AOC、ROS、MDA含量檢測
        7. 統(tǒng)計學(xué)方法
    實驗結(jié)果
        1. ARPE-19細胞轉(zhuǎn)染鑒定
        2. Real time PCR檢測NRF2、HO-1、GCL、NQO-1的表達
        3. Western blot檢測NRF2、HO-1、GCL、NQO-1蛋白的表達
        4. 細胞SOD活性及T-AOC、ROS、MDA含量檢測
    討論
全文總結(jié)
參考文獻
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝



本文編號：3764610