目的:構(gòu)建過表達(dá)睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（CNTF）的腺病毒,利用腺病毒載體轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,使其在體外持續(xù)高效表達(dá)CNTF,為視網(wǎng)膜病變的體外研究提供新途徑。方法:構(gòu)建空載GFP-腺病毒及CNTF-腺病毒,取第3代BMSCs用于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn),分為3組:空白對(duì)照組（未轉(zhuǎn)染腺病毒組）、陰性對(duì)照組（GFP-腺病毒轉(zhuǎn)染組）和實(shí)驗(yàn)組（CNTF-腺病毒轉(zhuǎn)染組）。ELISA測(cè)轉(zhuǎn)染后1、2、3d各組上清液的CNTF蛋白分泌量。結(jié)果:成功構(gòu)建空載GFP-腺病毒及CNTF-腺病毒,實(shí)驗(yàn)組的CNTF表達(dá)量明顯高于空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論:利用腺病毒載體可使BMSCs在體外持續(xù)高效表達(dá)CNTF。 

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
0引言
1材料和方法
    1.1材料
    1.2方法
        1.2.1大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)及傳代
        1.2.2腺病毒包裝和擴(kuò)增及純化
        1.2.3腺病毒感染BMSCs
        1.2.4 ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清液中CNTF分泌水平
2結(jié)果
    2.1合成的目的基因序列
    2.2含有CNTF的pHBAd-MCMV-GFP載體酶切回收結(jié)果
    2.3合成的序列載體用BamH I和EcoR I雙酶切獲得CNTF片段并且酶切完成后膠回收
    2.4 CNTF單克隆PCR鑒定結(jié)果
    2.5 pHBAd-MCMV-GFP- CNTF重組載體測(cè)序結(jié)果
    2.6各組在不同時(shí)間點(diǎn)上清液的CNTF蛋白濃度
3討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Current focus of stem cell application in retinal repair[J]. Maria L Alonso-Alonso,Girish Kumar Srivastava.  World Journal of Stem Cells. 2015(03)
[2]睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子基因修飾的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的構(gòu)建[J]. 武晶晶,華寧,東莉潔,李筱榮.  中華實(shí)驗(yàn)眼科雜志. 2014 (05)
[3]WJSC 6th Anniversary Special Issues（2）:Mesenchymal stem cells Progress of mesenchymal stem cell therapy for neural and retinal diseases[J]. Tsz Kin Ng,Veronica R Fortino,Daniel Pelaez,Herman S Cheung.  World Journal of Stem Cells. 2014(02)



本文編號(hào)：3721909