目的:糖尿病性視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy,DR）是主要的致盲性眼病,其發(fā)病機制尚未完全闡明,目前已知DR發(fā)生與外泌體相關(guān),因此,我們運用定量蛋白質(zhì)組學技術(shù),分析增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病變（proliferative diabetic retinopathy,PDR）患者血漿外泌體蛋白的表達變化情況,尋找PDR的生物學標記物,探尋PDR發(fā)生的機制和潛在治療靶點。方法:第一部分:分離與鑒定血漿外泌體收集2017年-2018年天津醫(yī)科大學眼科醫(yī)院住院的PDR患者、糖尿病未發(fā)生眼底改變患者（以下簡稱為DM）和正常對照的血漿和臨床信息,用差速離心法分離血漿來源外泌體,透射電鏡觀察外泌體的形態(tài)與大小,WB驗證外泌體表面蛋白:CD9、CD63和CD81。分別測2ml血漿來源的微囊泡（micro vesical,MV）與外泌體的蛋白濃度,考馬斯亮藍染色實驗分析外泌體、MV、不含胞外囊泡的血漿和血漿的蛋白分布情況。第二部分:定量蛋白組學分析血漿來源的外泌體分離三組患者血漿外泌體,將同組5個患者的外泌體混合成一份,取出部分做蛋白濃度測定,并使用同位素質(zhì)量標簽i TRAQ試劑標記樣本... 

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、分離與鑒定血漿外泌體
    1.1 對象和方法
        1.1.1 實驗材料與儀器
        1.1.2 實驗對象納入與排除
        1.1.3 差速離心法分離外泌體
        1.1.4 血漿外泌體鑒定
        1.1.5 血漿不同成分濃度測定
        1.1.6 考馬斯亮藍實驗
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 病人臨床信息總結(jié)
        1.2.2 外泌體鑒定結(jié)果
        1.2.3 外泌體和MV的總蛋白濃測量
        1.2.4 血漿不同成分考馬斯亮藍結(jié)果
    1.3 討論
    1.4 小結(jié)
二、血漿外泌體定量蛋白組學研究
    2.1 實驗材料和方法
        2.1.1 實驗材料與儀器
        2.1.2 血漿外泌體蛋白質(zhì)譜樣品分離與制備
        2.1.3 ELISA驗證
        2.1.4 hRMECs氧化應(yīng)激模型的建立
        2.1.5 hRMECs的 TNFAIP8 表達情況
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 外泌體蛋白濃度測定結(jié)果
        2.2.2 蛋白鑒定結(jié)果與差異蛋白篩選
        2.2.3 ELISA驗證結(jié)果
        2.2.4 hRMECs的 CCK-8 實驗結(jié)果
        2.2.5 hRMECs的 TNFAIP8 表達情況
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
三、4-羥基壬稀酸刺激人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞的定量蛋白組學研究
    3.1 實驗材料和方法
        3.1.1 實驗材料與儀器
        3.1.2 CCK-8 實驗評估4-HNE對 hRMECs增殖的影響
        3.1.3 蛋白組學樣本制備
        3.1.4 液相串聯(lián)質(zhì)譜分析與數(shù)據(jù)分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 CCK-8 結(jié)果
        3.2.2 定量蛋白組學結(jié)果
        3.2.3 差異蛋白的GO分析
        3.2.4 差異蛋白涉及的KEGG分析
        3.2.5 蛋白與蛋白相互作用
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 糖尿病視網(wǎng)膜病變的蛋白組學研究進展
    綜述參考文獻
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Recent progress in mass spectrometry proteomics for biomedical research[J]. Xu Li,Wenqi Wang,Junjie Chen.  Science China（Life Sciences）. 2017(10)
[2]蛋白質(zhì)組學研究進展與趨勢[J]. 曾嶸,夏其昌.  中國科學院院刊. 2002(03)

博士論文
[1]糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者血清差異蛋白質(zhì)組學研究[D]. 劉銀萍.南方醫(yī)科大學 2012



本文編號：3649400