本文關(guān)鍵詞：山西地區(qū)耳聾流行病學(xué)調(diào)查及分子病因?qū)W分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:對山西地區(qū)各地市特殊教育學(xué)校的1011例非綜合征性耳聾患者進(jìn)行GJB2基因及mt DNA 12Sr RNA基因1555位點(diǎn)突變的篩查,探討山西地區(qū)GJB2基因及mt DNA1555位點(diǎn)的突變發(fā)生率及熱點(diǎn)突變,為該地區(qū)今后的基因治療以及耳聾預(yù)防提供依據(jù)。抽取20例進(jìn)行基因芯片檢測,采用芯片技術(shù)篩查山西地區(qū)耳聾患者基因突變熱點(diǎn)。方法;1、收集并整理山西地區(qū)所有耳聾患者的臨床癥狀,挑選符合非綜合征性耳聾的患者標(biāo)本,標(biāo)號并提取相應(yīng)基因組DNA;2、針對GJB2基因及mt DNA 12S r RNA基因1555位點(diǎn)設(shè)計(jì)特異性引物,并同時(shí)進(jìn)行體外擴(kuò)增、酶切及測序,然后與相應(yīng)正常基因序列進(jìn)行比對,從而得到該地區(qū)耳聾患者的突變位點(diǎn)信息。3、從1011例標(biāo)本中隨機(jī)抽取20例,通過Affynetrix公司Cyto Scan 750K基因芯片技術(shù)進(jìn)行耳聾基因診斷。結(jié)果;1、1011例患者中,有232例檢測到GJB2基因突變,突變率達(dá)22.95%。共35個(gè)突變位點(diǎn):c.IVS1-35、c.21G-T、c.30-35del C、c.35del G、c.54C-A、c.79G-A、c.88A-G、c.109G-A、c.127G-C、c.139G-T、c.167del T、c.176-191del16、c.186C-T、c.187C-T、c.199C-T、c.223C-T、c.226C-A、c.235del C、c.253T-C、c.270A-C、c.271G-C、c.277A-G、c.283G-A、c.299-300del AT、c.319A-G、c.328del G、c.336G-T、c.341 A-G、c.368C-A、c.457G-A、c.512-513ins AACG、c.553C-T、c.558G-A、c.608T-C、c.765T-C。c.79G-A、c.341A-G、c.457G-A、c.608T-C、c.765T-C屬于多態(tài)位點(diǎn),突變率分別為32.15%、28.39%、0.10%、2.67%、6.82%;新發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)11例為c.IVS1-35、c.127G-C、c.558G-A、c.512-513ins AACG、c.512-513ins AACG、c.88A-G、c.186C-T、c.187C-T、c.199C-T、c.277A-G、c.319A-G。所有突變位點(diǎn)中,c.235del C比率最高,為13.06%;依次是c.299-300del AT(3.17%)、c.109G-A(2.47%)、c.368C-A(1.38%)、c.176-191del16(1.19%)。2、1011例患者中15例患者被檢出線粒體基因1555A-G突變,突變率為1.5%(15/1011)。3、20例標(biāo)本中18例進(jìn)行Affynetrix公司Cyto Scan 750K芯片檢測,被測樣本并未發(fā)現(xiàn)與數(shù)據(jù)庫中已知耳聾基因關(guān)聯(lián)的變異,發(fā)現(xiàn)7、9和11號3個(gè)樣本有相似的重復(fù),4號標(biāo)本有較大缺失,且在Y染色體上有大的重復(fù),其他樣本還顯示到一些重復(fù)或缺失。結(jié)論:1、山西地區(qū)耳聾基因突變以GJB2基因突變率最高,與戴樸等在全國范圍開展的耳聾流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果相一致;2、山西地區(qū)耳聾基因突變篩查和統(tǒng)計(jì)的完成,為該地區(qū)耳聾的早期診斷與治療提供了理論依據(jù),為今后臨床治療工作的開展提供可靠的理論基礎(chǔ),該地區(qū)耳聾基因突變資料庫的建立將為山西其他地區(qū)耳聾患者突變數(shù)據(jù)庫的建立奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ),同時(shí)也豐富了我國耳聾資料庫。3、采用基因芯片對18例患者進(jìn)行耳聾相關(guān)基因突變位點(diǎn)檢測,檢出率低,可能由于基因芯片檢測成本極高,本次檢測標(biāo)本數(shù)少等原因而導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確,有待于擴(kuò)大樣本進(jìn)一步探討。
【關(guān)鍵詞】：耳聾 基因突變 GJB2 mt DNA 12S rRNA 1555 基因芯片
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R764.43
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-13
• 第一部分 山西地區(qū)耳聾患者GJB2 基因分子流行病學(xué)研究13-24
• 1 材料與方法13-18
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料13-14
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法14-18
• 2 結(jié)果18-22
• 2.1 全血基因組DNA制備結(jié)果18
• 2.2 GJB2 基因目的片段擴(kuò)增結(jié)果18
• 2.3 GJB2 基因目的片段測序結(jié)果18-22
• 3 討論22-24
• 第二部分 山西地區(qū)耳聾患者M(jìn)TDNA 12SRRNA基因分子流行病學(xué)研究24-30
• 1 材料與方法24-27
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料24-25
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法25-27
• 2 結(jié)果27-29
• 2.1 MTDNA 12SRRNA基因目的片段擴(kuò)增結(jié)果27
• 2.2 限制性內(nèi)切酶Alw26I酶切分析結(jié)果27
• 2.3 mtDNA 12SrRNA基因目的片段測序結(jié)果27-29
• 3 討論29-30
• 第三部分 基因芯片檢測耳聾基因熱點(diǎn)突變30-38
• 1 材料與方法30-35
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料30-31
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法31-35
• 2 結(jié)果35-37
• 2.1 基因組DNA電泳檢測結(jié)果35
• 2.2 PCR產(chǎn)物檢測結(jié)果35
• 2.3 片段質(zhì)量化控制35-36
• 2.4 芯片檢測結(jié)果36-37
• 3 討論37-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-41
• 綜述41-50
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 致謝50-51
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果51-52
• 個(gè)人簡歷52

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 李磊;楊濤;吳皓;;耳聾基因的篩查與診斷[J];診斷學(xué)理論與實(shí)踐;2010年05期

2 戴樸,于飛,康東洋,張昕,劉新,米文宗,曹菊陽,袁慧軍,楊偉炎,吳柏林,韓東一;線粒體DNA1555位點(diǎn)和GJB2基因及SLC26A4基因的診斷方法及臨床應(yīng)用[J];中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2005年10期

3 戴樸;劉新;于飛;朱慶文;袁永一;楊淑芝;孫R，

本文編號：363578