本實(shí)驗(yàn)利用乙基亞硝基脲（ENU）誘變實(shí)驗(yàn),經(jīng)遺傳學(xué)檢測(cè)、臨床診斷及病理學(xué)觀察,最終獲得了3種可穩(wěn)定遺傳的眼部異常小鼠;接著采用微衛(wèi)星標(biāo)記連鎖分析的方法對(duì)一例小眼球小鼠進(jìn)行了突變基因的染色體定位。具體工作如下:1.利用ENU處理8¹0周齡的C57BL/6J（B6）清潔級(jí)雄鼠120只（G0）,與同品系小鼠繁育獲得G1代,經(jīng)篩查獲得眼部突變表型小鼠65只,經(jīng)遺傳學(xué)檢測(cè)、臨床診斷及病理學(xué)觀察,最終獲得可穩(wěn)定遺傳突變小鼠3例,分別表現(xiàn)為角膜混濁、小眼球、虹膜異常。2.利用微衛(wèi)星標(biāo)記連鎖分析法,對(duì)小眼球突變小鼠進(jìn)行突變基因染色體定位,發(fā)現(xiàn)其與D8Mit4之間的LOD值為2.53,將突變基因定位在小鼠8號(hào)染色體D8Mit4附近。本實(shí)驗(yàn)成功培育了3例眼部突變表型小鼠,經(jīng)臨床診斷及病理學(xué)觀察,提示3例突變表型小鼠與人類(lèi)相關(guān)眼疾極為相似,為人類(lèi)眼部疾病提供了良好的材料;針對(duì)突變表型小眼球1例,將該突變系小鼠突變基因定位在第8號(hào)染色體D8Mit4附近,為后續(xù)突變基因的精確定位奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：杭州師范大學(xué)浙江省

【文章頁(yè)數(shù)】：47 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
ABSTRACT
1 綜述
    1.1 脊椎動(dòng)物眼部結(jié)構(gòu)
        1.1.1 眼球
        1.1.2 視路
        1.1.3 眼部附屬器
    1.2 脊椎動(dòng)物眼部發(fā)育過(guò)程
        1.2.1 眼部發(fā)育中的一些關(guān)鍵基因
    1.3 眼部突變小鼠與人類(lèi)眼部疾病
        1.3.1 B6-Co小鼠與人類(lèi)角膜炎
        1.3.2 APC~(Min)小鼠與人近視
        1.3.3 DBA/2J小鼠與人青光眼
    1.4 眼部突變小鼠國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀
        1.4.1 利用基因敲除技術(shù)構(gòu)建的眼部基因突變小鼠模型
        1.4.2 化學(xué)試劑誘變獲得的眼部異常小鼠
        1.4.3 自發(fā)性眼部突變小鼠
    1.5 研究意義
2 三例眼部突變小鼠的培育及特征分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 試劑與儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 ENU誘變及突變表型篩選
        2.3.2 突變系小鼠繁育及遺傳模式檢測(cè)
        2.3.3 臨床診斷及病理學(xué)檢查
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 ENU誘變及表型篩選情況
        2.4.2 遺傳模式檢測(cè)
        2.4.3 臨床檢測(cè)及病理學(xué)觀察結(jié)果
    2.5 討論
        2.5.1 ENU誘變的使用劑量及誘變小鼠品系的選擇
        2.5.2 突變表型與人類(lèi)類(lèi)似癥狀眼疾
        2.5.3 應(yīng)用前景
3 一例小眼球小鼠突變基因的染色體定位
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 動(dòng)物飼養(yǎng)條件
        3.1.3 主要儀器和設(shè)備
        3.1.4 主要試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 定位用F2代小鼠的繁殖
        3.2.2 DNA樣本的準(zhǔn)備
        3.2.3 PCR擴(kuò)增F2代DNA樣本
        3.2.4 PCR產(chǎn)物電泳
        3.2.5 計(jì)算LOD值
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 標(biāo)記選擇及F2小鼠的繁殖
        3.3.2 連鎖分析結(jié)果
        3.3.3 突變基因的位置
    3.4 討論
        3.4.1 分子標(biāo)記法在基因定位中的應(yīng)用
        3.4.2 定位策略的選擇
        3.4.3 小眼球小鼠的突變基因定位的意義及后期工作
參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]PAX6基因與視網(wǎng)膜疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 劉靜雯,秦波.  國(guó)際眼科雜志. 2014(09)
[2]Smad4對(duì)小鼠眼瞼發(fā)育的影響[J]. 劉瑛,顧欣祖,LU Michael.  中國(guó)病理生理雜志. 2012(02)
[3]角膜混濁小鼠突變候選基因Map3k1克隆與序列分析[J]. 吳劉成,劉春,蔣熒梅,王生存,邵義祥.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2011(04)
[4]SNP標(biāo)記對(duì)角膜混濁小鼠突變相關(guān)基因的精細(xì)定位[J]. 蔣熒梅,劉春,吳劉成,邵義祥.  遺傳. 2010(05)
[5]C57BL/6小鼠葡萄球菌性角膜感染模型的建立及相關(guān)研究[J]. 劉春,袁志云,楊菲菲,管懷進(jìn),邵義祥.  眼科研究. 2010(03)
[6]青光眼動(dòng)物模型DBA/2J小鼠的眼部特征及組織學(xué)觀察[J]. 楊帆,吳玲玲,郭秀娟,楊麗萍,李穎,吳樂(lè)萌,王冬梅.  眼科研究. 2010(02)
[7]B6-Co小鼠角膜病的細(xì)菌學(xué)因素探討[J]. 邵義祥,殷小敏,王春中,蔣熒梅,管懷進(jìn).  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué). 2008(05)
[8]胎兒酒精中毒綜合征及其發(fā)病機(jī)理的研究進(jìn)展[J]. 李藝,彭英.  中國(guó)神經(jīng)精神疾病雜志. 2008(03)
[9]CYP1B1基因敲除小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和視乳頭結(jié)構(gòu)的觀察[J]. 崔凌,姜發(fā)綱,徐惠民,劉曉文.  眼科研究. 2007(01)
[10]高通量篩選ENU誘變產(chǎn)生的遺傳疾病小鼠模型[J]. 賀芳,王子興,趙靜,鮑潔,丁鈞,阮海斌,葛曉梅,謝青,張作明,高翔.  科學(xué)通報(bào). 2003(22)

博士論文
[1]ENU誘變瞳孔散大小鼠模型的分子機(jī)制與遺傳特性研究[D]. 陳兵.揚(yáng)州大學(xué) 2012
[2]CRX基因和全反式視黃酸對(duì)斑馬魚(yú)感光細(xì)胞發(fā)育的影響[D]. 張艷瓊.復(fù)旦大學(xué) 2006
[3]ENU誘導(dǎo)小鼠突變及對(duì)部分突變基因的定位克隆[D]. 吳寶金.揚(yáng)州大學(xué) 2004

碩士論文
[1]APC基因突變誘導(dǎo)小鼠近視發(fā)生的相關(guān)研究[D]. 朱貞貞.廈門(mén)大學(xué) 2014
[2]ENU誘導(dǎo)小鼠突變及對(duì)一種白斑突變基因的定位鑒定[D]. 盧增蘭.杭州師范大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3513877