目的研究補(bǔ)腎活血中藥血清對(duì)加壓純化培養(yǎng)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（retinal ganglion cells,RGCs）凋亡模型PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路主要成員PI3K及Akt表達(dá)的影響,探索補(bǔ)腎活血法保護(hù)RGCs的機(jī)制。方法制備補(bǔ)腎活血中藥含藥血清,體外純化SD大鼠RGCs,采取開(kāi)放式壓力控制培養(yǎng)系統(tǒng)建立體外加壓培養(yǎng)RGCs凋亡模型,以50g·L^-1、100 g·L^-1、200 g·L^-1血清濃度梯度補(bǔ)腎活血中藥血清分別處理。將RGCs分為5組,分別為正常培養(yǎng)組（N組）、對(duì)照組（C組）、50 g·L^-1補(bǔ)腎活血中藥血清組(50 g·L^-1BSHX組)、100 g·L^-1補(bǔ)腎活血中藥血清組(100 g·L^-1BSHX組)、200g·L^-1補(bǔ)腎活血中藥血清組(200 g·L^-1BSHX組),Annexin V-FITC/PI雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測(cè)補(bǔ)腎活血中藥血... 

【文章來(lái)源】：眼科新進(jìn)展. 2017,37(09)北大核心

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純化培養(yǎng)ＲGCs形態(tài)學(xué)及Thy1．1免疫熒光鑒定結(jié)果

(0．22±0.01)、200g·L－1BSHX組(0．84±0．10)與C組相比，PI3KmＲNA含量逐漸升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＜0．05)，提示補(bǔ)腎活血中藥含藥血清可提升PI3K在ＲGCs中的轉(zhuǎn)錄水平。圖2補(bǔ)腎活血中藥血清對(duì)加壓純化培養(yǎng)大鼠ＲGCs凋亡的影響。A:N組;B:C組;C:50g·L－1BSHX組;D:100g·L－1BSHX組;E:200g·L－1BSHX組2．4各組ＲGCs中AktmＲNA表達(dá)比較各組ＲGCs相對(duì)表達(dá)定量值結(jié)果表明，C組細(xì)胞AktmＲ-NA(0.04±0．01)表達(dá)較N組(1．00±0．04)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)，而50g·L－1BSHX組(0．21±0．02)、100g·L－1BSHX組(0．36±0.01)、200g·L－1BSHX組(1．07±0．17)細(xì)胞AktmＲNA表達(dá)均高于無(wú)含藥血清的C組，且與C組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＜0．05)，提示補(bǔ)腎活血中藥含藥血清可提升Akt在ＲGCs中的轉(zhuǎn)錄水平。2．5各組ＲGCs的PI3K及Akt蛋白表達(dá)比較與N組比較，C組PI3K蛋白表達(dá)顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)，而50g·L－1、100g·L－1、200g·L－1BSHX組與C組相比，PI3K蛋白表達(dá)量逐漸升高，且100g·L－1、200g·L－1BSHX組與C組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＜0．05，見(jiàn)圖3、表1)。C組Akt蛋白表達(dá)與N組相比顯著降低(P＜0.05)，而50g·L－1、100g·L－1、200g·L－1BSHX組與C組相比，Akt蛋白表達(dá)量逐漸升高，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＜0．05，見(jiàn)圖3、表1)。圖3各組體外培養(yǎng)大鼠ＲGC中的PI3K、Akt蛋白表達(dá)條帶圖3討論高眼壓是青光眼ＲGCs凋亡的重要因素，是青光眼性視神經(jīng)病變的基礎(chǔ)，壓力是青光眼的重要致病因素之一，其直接作用于ＲGCs的細(xì)胞膜，膜的通透性及跨膜物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)受到影響而致細(xì)胞死亡，實(shí)驗(yàn)證表1各組體外培養(yǎng)大鼠ＲG

?－1BSHX組(0．36±0.01)、200g·L－1BSHX組(1．07±0．17)細(xì)胞AktmＲNA表達(dá)均高于無(wú)含藥血清的C組，且與C組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＜0．05)，提示補(bǔ)腎活血中藥含藥血清可提升Akt在ＲGCs中的轉(zhuǎn)錄水平。2．5各組ＲGCs的PI3K及Akt蛋白表達(dá)比較與N組比較，C組PI3K蛋白表達(dá)顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)，而50g·L－1、100g·L－1、200g·L－1BSHX組與C組相比，PI3K蛋白表達(dá)量逐漸升高，且100g·L－1、200g·L－1BSHX組與C組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＜0．05，見(jiàn)圖3、表1)。C組Akt蛋白表達(dá)與N組相比顯著降低(P＜0.05)，而50g·L－1、100g·L－1、200g·L－1BSHX組與C組相比，Akt蛋白表達(dá)量逐漸升高，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＜0．05，見(jiàn)圖3、表1)。圖3各組體外培養(yǎng)大鼠ＲGC中的PI3K、Akt蛋白表達(dá)條帶圖3討論高眼壓是青光眼ＲGCs凋亡的重要因素，是青光眼性視神經(jīng)病變的基礎(chǔ)，壓力是青光眼的重要致病因素之一，其直接作用于ＲGCs的細(xì)胞膜，膜的通透性及跨膜物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)受到影響而致細(xì)胞死亡，實(shí)驗(yàn)證表1各組體外培養(yǎng)大鼠ＲGCs中的PI3K、Akt蛋白表達(dá)組別PI3K蛋白Akt蛋白N組0．57±0．040．60±0．05C組0．37±0．03*0．33±0．04*50g·L－1BSHX組0．43±0．030．42±0．04#100g·L－1BSHX組0．53±0．04#0．46±0．04#200g·L－1BSHX組0．80±0．06#0．64±0．04#注:*P＜0．05vsN組，#P＜0．05vsC組明高眼壓引起的篩板層間變形移位產(chǎn)生的剪切力阻滯視神經(jīng)軸漿流于篩板水平，引起來(lái)源于上級(jí)神經(jīng)元的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不能順利到達(dá)神經(jīng)細(xì)胞，軸突膜不能利用線粒體產(chǎn)生ATP，影響軸突蛋白的生成和轉(zhuǎn)運(yùn)，細(xì)胞正常代謝受到損害?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]補(bǔ)腎活血中藥對(duì)原發(fā)性青光眼術(shù)后視神經(jīng)保護(hù)作用的臨床研究[J]. 汪偉,李妍,劉紅佶,朱新萍,李翔.  北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(02)
[2]補(bǔ)腎活血中藥對(duì)大鼠慢性高眼壓模型視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路p-Akt表達(dá)的影響[J]. 汪偉,李翔,王桃,柯欣怡,劉紅佶,賈正品,牟琳.  眼科新進(jìn)展. 2015(09)
[3]補(bǔ)腎活血中藥對(duì)大鼠慢性高眼壓模型外側(cè)膝狀體病理改變的影響[J]. 李翔,謝釗,郭紅建,謝學(xué)軍,路雪婧,王毅,王超.  眼科新進(jìn)展. 2012(01)
[4]用于青光眼基礎(chǔ)研究的開(kāi)放式壓力控制培養(yǎng)系統(tǒng)的研制[J]. 張虹,李貴剛,汪學(xué)方,胡維琨,謝二娟,陳蓮一,單長(zhǎng)梅,趙國(guó)宏.  中華眼科雜志. 2006(06)



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