目的:研究不同濃度小檗堿（Berberine,BBR）在高糖環(huán)境下對體外培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞（Human retina vascμLar endothelial cells,HRCECs）增殖及血管內(nèi)皮生長因子（VascμLar endothelial growth factor,VEGF）表達(dá)的影響。方法:以人眼球提取的視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞用作研究對象,在高糖培養(yǎng)基內(nèi)模擬糖尿病環(huán)境建立人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞模型,運(yùn)用免疫熒光法進(jìn)行視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞鑒定。實(shí)驗(yàn)分為低糖組、高糖組、高糖+5μmol/L小檗堿組、高糖+10μmol/L小檗堿組、高糖+20μmol/L小檗堿組、高糖+40μmol/L小檗堿組。HRCECs經(jīng)不同濃度藥物處理后,分別于加藥后12小時(shí)、24小時(shí)、36小時(shí)采用MTT法檢測藥物在高糖環(huán)境下對HRCECs增殖的影響,采用免疫印記法檢測不同濃度藥物對HRCECs中VEGF的表達(dá)量的影響。結(jié)果:1.MTT結(jié)果顯示:（1）HRCECs在體外培養(yǎng)12小時(shí)、24小時(shí)、36小時(shí)后低糖組細(xì)胞數(shù)量明顯少于高糖組細(xì)胞數(shù)量,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）;（2）當(dāng)小檗堿在高糖環(huán)境下... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

體外培養(yǎng)的視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)

4.1 視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)剛剛提取出來的視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞中混有質(zhì)細(xì)胞、周細(xì)胞、白細(xì)胞等雜質(zhì)細(xì)胞，培養(yǎng) 1 天后梭狀的血管內(nèi)皮細(xì)胞開始貼壁,培養(yǎng)大概 1 周后觀察到血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)過克隆生長、細(xì)胞分裂開始有細(xì)胞集落形成。選用有利于視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮生長細(xì)胞生存的 DMEM 培養(yǎng)液，使內(nèi)皮細(xì)胞能夠快速生長，雜質(zhì)細(xì)胞逐漸死亡漂浮而在換液時(shí)被除去。培養(yǎng) 2 周時(shí)觀察到血管內(nèi)皮細(xì)胞融合生長呈鋪路石樣鋪滿培養(yǎng)皿底(圖 4.1)，當(dāng)觀察到細(xì)胞出現(xiàn)接觸卻制時(shí)，以 1:2 傳代。4.2 視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的鑒定利用免疫熒光法檢測：經(jīng)兔抗人 vWF 抗體染色，視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞膜及胞漿特異性染色呈綠色，非特異性染色的細(xì)胞核呈藍(lán)色，陽性細(xì)胞著色 95.8%，視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)成功。(圖 4.2)

圖 4.3 小檗堿對高糖環(huán)境下視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響（注：濃度為 5、10、20、40μmol/L小檗堿對體外高糖環(huán)境下 HRCECs 作用 12、24、36 小時(shí)，與高糖組對比：*P＜0.05，**P＜0.05）4.4 小檗堿對體外視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞中 VEGF 的表達(dá)影響視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞在體外高糖環(huán)境下培養(yǎng)成功后，加入不同濃度小檗堿藥物處理，細(xì)胞中 VEGF 表達(dá)量用免疫印跡法檢測，結(jié)果示：(1)與低糖對照組相比，高糖對照組血管內(nèi)皮細(xì)胞在體外高糖環(huán)境下培養(yǎng) 12 小時(shí)、24 小時(shí)、36 小時(shí)后，VEGF 表達(dá)均多于低糖組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。(2)當(dāng)同一濃度小檗堿對 HRCECs 分別作用 12、24、48 小時(shí)后，血管內(nèi)皮細(xì)胞中 VEGF 表達(dá)量均有減量，且作用時(shí)間越長差異越大(P<0.05)；（3）不同濃度小檗堿（5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L）對高糖環(huán)境下 HRCECs 作用時(shí)間相同時(shí)，較不加藥組細(xì)胞中 VEGF 表達(dá)均有減量，且小檗堿濃度越高抑制作用越強(qiáng)(P<0.05)，且不同濃

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3384586