目的建立ARPE-19細(xì)胞缺氧模型,探討缺氧條件下視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞（retina pigment epithelium, RPE） MEK/ERK信號(hào)傳導(dǎo)通路與細(xì)胞問(wèn)緊密連接蛋白的改變,以及影響緊密連接的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）的變化。方法ARPE-19細(xì)胞復(fù)蘇后取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,利用化學(xué)制劑二氯化鈷（CoCl2）誘導(dǎo)其缺氧模型。將細(xì)胞培養(yǎng)于60×15mm細(xì)胞培養(yǎng)皿中,取6份細(xì)胞隨機(jī)均分為缺氧組和正常對(duì)照組,缺氧組培養(yǎng)基中加入濃度為200μM的二氯化鉆（CoCl2）,而正常對(duì)照組中加入等量的二甲基亞砜（DMSO）。3小時(shí)后利用Western Blot檢測(cè)各組細(xì)胞中缺氧誘導(dǎo)因子（hypoxia-inducible factor-1a, HIF-1α）以明確細(xì)胞缺氧情況,之后以Western Blot檢測(cè)在缺氧環(huán)境下ARPE細(xì)胞中p-ERK/t-ERK的隨時(shí)間變化曲線（每間隔0.5小時(shí)檢測(cè)一次,共3小時(shí)）,24小時(shí)檢測(cè)細(xì)胞間緊密連接蛋白之一的密封蛋白（occludin）的變化,并于3,6,12,24小時(shí)利用ELI... 

【文章來(lái)源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：96 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文對(duì)照
前言
第一章 缺氧條件下ARPE-19細(xì)胞中MEK/ERK信號(hào)傳導(dǎo)通路與細(xì)胞間緊密連接蛋白的變化
    1.1 材料與方法
    1.2 結(jié)果
    1.3 討論
    1.4 小結(jié)
第二章 阻斷MEK/ERK信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)缺氧條件下ARPE-19細(xì)胞間緊密連接的保護(hù)作用
    2.1 材料與方法
    2.2 結(jié)果
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
第三章 阻斷MEK/ERK信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)OIR小鼠模型中外層血-視網(wǎng)膜屏障的保護(hù)作用
    3.1 材料與方法
    3.2 結(jié)果
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間的主要研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]p38MAPKs在細(xì)胞周期調(diào)控中的作用[J]. 陳奕,繆澤鴻,丁健.  生理科學(xué)進(jìn)展. 2004(04)



本文編號(hào)：3355956